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冬箭筈豌豆耐盐基因NHX1克隆及表达分析 被引量:1
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作者 姚娜 云岚 +3 位作者 艾芊 任晓敏 周成美 李博华 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1401-1409,共9页
为了分析和挖掘更多豆科牧草耐盐基因,选育耐盐品种,本研究通过同源克隆PCR方法从冬箭筈豌豆(Vicia villosa Roth.)cDNA中克隆NHX1基因,并对其进行生物信息分析。结果表明:冬箭筈豌豆NHX1基因CDS序列长度为1641 bp,编码546个氨基酸,为... 为了分析和挖掘更多豆科牧草耐盐基因,选育耐盐品种,本研究通过同源克隆PCR方法从冬箭筈豌豆(Vicia villosa Roth.)cDNA中克隆NHX1基因,并对其进行生物信息分析。结果表明:冬箭筈豌豆NHX1基因CDS序列长度为1641 bp,编码546个氨基酸,为碱性疏水蛋白,与豌豆同源相似度最高;蛋白结构以α螺旋为主,包含10个跨膜结构域;相对定量分析表明NHX1在根、茎、叶组织中均有表达,盐胁迫下叶中表达量最高并在盐胁迫后48 h达到最大值;1300-cYFP-NHX1农杆菌转化烟草亚细胞定位显示其定位于细胞膜,并通过蛋白印迹法验证蛋白表达。冬箭筈豌豆NHX1基因参与盐胁迫响应,在耐盐性强的材料中相对高表达。本研究为豆科牧草耐盐性改良奠定基础。 展开更多
关键词 冬箭筈豌豆 nhx1 基因克隆 表达分析
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南林895杨树GmNHX1基因的转入及其耐盐性分析 被引量:8
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作者 孙伟博 邓大霞 +1 位作者 杨立恒 诸葛强 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2014年第1期34-38,共5页
将大豆中编码Na+/H+离子逆向转运蛋白的GmNHX1基因构建到植物表达载体pGWB402Ω,通过农杆菌侵染叶盘法转化南林895杨树(Populus deltoides×P.euramericana cv.‘Nanlin895’),PCR检测和Southern杂交结果表明,GmNHX1基因已经整合入... 将大豆中编码Na+/H+离子逆向转运蛋白的GmNHX1基因构建到植物表达载体pGWB402Ω,通过农杆菌侵染叶盘法转化南林895杨树(Populus deltoides×P.euramericana cv.‘Nanlin895’),PCR检测和Southern杂交结果表明,GmNHX1基因已经整合入南林895杨树基因组.对转GmNHX1基因的南林895杨树耐盐性的生理生化指标进行检测,结果表明GmNHX1基因的表达能够提高转基因杨树的耐盐性. 展开更多
关键词 GM nhx1 南林895杨树 转基因 盐胁迫
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利用RNAi技术抑制拟南芥NHX1基因家族的表达 被引量:3
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作者 原江锋 杨建雄 +2 位作者 俞嘉宁 王丽娟 张志琪 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1735-1741,共7页
采用RNAi抑制NHX1基因家族的表达,并观察其对拟南芥耐盐性和耐旱性的影响.根据从拟南芥(Ara-bidopsis thaliana)cDNA中扩增出编码Na+/H+反向转运蛋白基因AtNHX1长度为210 bp高度保守序列作为RNAi的靶标区,并正反2个方向插入载体pHANNIBA... 采用RNAi抑制NHX1基因家族的表达,并观察其对拟南芥耐盐性和耐旱性的影响.根据从拟南芥(Ara-bidopsis thaliana)cDNA中扩增出编码Na+/H+反向转运蛋白基因AtNHX1长度为210 bp高度保守序列作为RNAi的靶标区,并正反2个方向插入载体pHANNIBAL中,2个片段用intron连接;将RNAi表达框连入具有NPTⅡ筛选标记基因的表达载体pART27中,构建以拟南芥NHX1基因家族为靶标的RNAi载体.采用农杆菌介导的真空渗透法转化拟南芥,得到T0代转基因拟南芥种子.对转基因阳性植株进行RT-PCR检测以及耐盐性和耐旱性分析.结果表明,利用本实验构建的NHX1基因家族RNAi载体,拟南芥NHX1基因家族表达被成功地抑制;耐盐和耐旱分析表明RNAi技术对基因表达沉默是有效的. 展开更多
关键词 Na^+/H^+反向转运蛋白 nhx1基因家族 RNAI 拟南芥
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酿酒酵母BJ3505 NHX1基因突变株的构建及功能验证 被引量:2
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作者 王立光 陈军 +1 位作者 叶春雷 罗俊杰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期152-158,共7页
构建酿酒酵母NHX1基因单缺失突变株,验证其在酿酒酵母BJ3505抵抗逆境及液胞融合中的功能。利用同源重组技术构建BJ3505 NHX1基因的插入失活突变株BJ3505Δnhx1,并构建互补菌株BJ3505Δnhx1-C,对酿酒酵母NHX1基因在逆境胁迫及液胞融合中... 构建酿酒酵母NHX1基因单缺失突变株,验证其在酿酒酵母BJ3505抵抗逆境及液胞融合中的功能。利用同源重组技术构建BJ3505 NHX1基因的插入失活突变株BJ3505Δnhx1,并构建互补菌株BJ3505Δnhx1-C,对酿酒酵母NHX1基因在逆境胁迫及液胞融合中的功能进行验证研究。结果表明:与互补菌株BJ3505Δnhx1-C和野生型相比,突变株BJ3505Δnhx1抗逆能力减弱,液胞融合受影响,导致多液胞存在。利用同源重组法成功的构建了NHX1基因缺失突变株;酿酒酵母NHX1作为重要的离子反向转运体,在酿酒酵母BJ3505抵抗外界胁迫环境和液胞融合过程中发挥着重要的作用。 展开更多
关键词 酿酒酵母 nhx1 逆境胁迫 液胞融合
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互花米草NHX1基因的cDNA全长克隆、序列信息及定量表达分析 被引量:3
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作者 徐璐 尹海波 +5 位作者 张侠 曹雪霖 卢楠楠 闫丽华 陈世华 郭善利 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第8期34-38,共5页
以盐生植物互花米草(Spartina alterniflora)为试验材料,利用RACE技术克隆到编码Na+/H+逆向转运蛋白的NHX1基因的cDNA全长序列。利用生物信息学软件及网站对获得的基因核苷酸序列及编码的蛋白质序列进行分析,结果发现该核苷酸序列长度为... 以盐生植物互花米草(Spartina alterniflora)为试验材料,利用RACE技术克隆到编码Na+/H+逆向转运蛋白的NHX1基因的cDNA全长序列。利用生物信息学软件及网站对获得的基因核苷酸序列及编码的蛋白质序列进行分析,结果发现该核苷酸序列长度为2 277 bp,开放阅读框为1 623 bp,编码540个氨基酸残基,且该基因所编码的蛋白质与植物的Na+/H+逆向转运蛋白NHX1同源,所以命名为SaNHX1基因。同时氨基酸序列比对显示,其与芦苇(Phragmites australis NHX,BAD95562.1)、玉米(Zea mays NHX,XP_008653443.1)、水稻(Oryza sativa NHX,BAA83337.1)等的NHX亲缘关系相近,同源相似性依次为94%、92%、91%。利用Qiagene Rotor Gene Q荧光实时定量PCR仪对不同时间盐处理及ABA处理的互花米草材料进行荧光定量PCR检测。结果发现,在盐处理及ABA处理的不同处理时期,该基因的相对表达量都发生了明显的变化,这表明该基因受到了盐胁迫及ABA胁迫的诱导,由此可以看出Sa NHX1基因与植物的耐盐性有着密切的关系。 展开更多
关键词 耐盐性 互花米草 nhx1基因 相对定量表达
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酿酒酵母NHX1基因克隆与烟草表达分析 被引量:1
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作者 郭兆奎 杨谦 +1 位作者 万秀清 颜培强 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第6期779-785,共7页
提取酿酒酵母DNA,PCR法合成片段长度为1902bp的NHX1基因,构建植物高效表达载体转化烟草,经PCR扩增、GUS酶染色分子鉴定后,应用荧光定量PCR分析转化材料幼根NHX1基因的转录水平,并将各转化材料T1代烟苗移栽至中间试验隔离圃中,化验分析... 提取酿酒酵母DNA,PCR法合成片段长度为1902bp的NHX1基因,构建植物高效表达载体转化烟草,经PCR扩增、GUS酶染色分子鉴定后,应用荧光定量PCR分析转化材料幼根NHX1基因的转录水平,并将各转化材料T1代烟苗移栽至中间试验隔离圃中,化验分析烟叶内在成分。获得抗卡那霉素、NHX1基因PCR扩增和GUS染色阳性的转化子42株,在转化材料幼根中可检测到外源基因NHX1转录的mR-NA分子;烟叶内在成分化验结果表明T1代转化材料烟叶含钾量增加30%,总糖含量显著降低,证明NHX1基因除了与Na+运输有关还与K+的吸收和糖分运输有关。 展开更多
关键词 酿酒酵母 nhx1 转基因烟草 K^+含量
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转Mz_2NHX_1基因拟南芥对盐胁迫的生理响应 被引量:1
7
作者 王璐平 张永利 +4 位作者 孙婷梅 于梦楠 秦家慧 李爱 彭立新 《天津农业科学》 CAS 2016年第11期1-5,共5页
为了探讨珠美海棠Na^+/H^+逆向转运蛋白基因Mz_2NHX_1在植物耐盐中的作用,以野生型拟南芥和转Mz_2NHX_1基因拟南芥为材料,研究不同盐浓度对转基因和野生型拟南芥种子萌发、植株耐盐性相关生理指标的影响。结果表明:在不同盐胁迫下,转基... 为了探讨珠美海棠Na^+/H^+逆向转运蛋白基因Mz_2NHX_1在植物耐盐中的作用,以野生型拟南芥和转Mz_2NHX_1基因拟南芥为材料,研究不同盐浓度对转基因和野生型拟南芥种子萌发、植株耐盐性相关生理指标的影响。结果表明:在不同盐胁迫下,转基因拟南芥种子发芽率明显高于野生型。随着盐浓度的增加,野生型和转基因植株的电导率呈上升趋势;SOD活性呈先上升后下降趋势;POD活性、可溶性糖含量、脯氨酸含量在野生型植株中呈先上升后下降趋势,在转基因植株中呈不断升高的趋势。盐胁迫下,转基因植株的各项生理指标均优于野生型,表明Mz_2NHX_1基因的过量表达,提高了转基因拟南芥的耐盐性。 展开更多
关键词 Mz2nhx1基因 拟南芥 盐胁迫 生理响应
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表达谱芯片对灰绿藜和水稻NHX1基因在转基因拟南芥中表达差异的研究 被引量:1
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作者 郭继娜 张富春 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期1-6,F0003,共7页
【目的】基因芯片作为高通量、高效率的DNA分析技术,已被广泛地用于植物抗逆性功能基因的分析之中。为探讨盐生植物和甜土植物NHX1基因调控盐应答过程和亲水性C端的功能研究提供借鉴,进一步揭示盐生植物和甜土植物耐盐机制的差异,为植... 【目的】基因芯片作为高通量、高效率的DNA分析技术,已被广泛地用于植物抗逆性功能基因的分析之中。为探讨盐生植物和甜土植物NHX1基因调控盐应答过程和亲水性C端的功能研究提供借鉴,进一步揭示盐生植物和甜土植物耐盐机制的差异,为植物耐盐机理的实际应用提供依据。【方法】利用Affymetrix拟南芥表达谱芯片对过表达盐生植物灰绿藜和甜土植物水稻NHX1基因及缺失部分C端基因的转基因拟南芥进行基因表达差异的分析。【结果】在盐胁迫的转基因拟南芥组织中,筛选出在四组转基因型拟南芥中共同差异表达的基因有394条,占筛选基因总数的1.64%,其中上调表达的基因有177条,下调表达的基因有217条。将这些差异基因初步分为12类,包括非生物性与生物性刺激的应答过程、胁迫应答过程、电子转移和能量途径、信号转导和转录等功能类别。【结论】表明植物耐盐过程是一个多基因参与的复杂的变化过程,涉及到许多相关基因的变化。联系两两比较散点图和聚类分析结果从理论上说明,转基因拟南芥cgNHX1,cgNHX1dc,osNHX1和osNHX1dc耐盐性有依次减弱的趋势。 展开更多
关键词 表达谱芯片 灰绿藜 水稻 nhx1 植物耐盐
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硅促进盐胁迫下黄瓜NHX1基因表达及Na^+在液泡中的区隔化效应 被引量:8
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作者 缑天韵 苏艳 +2 位作者 陈馨航 朱永兴 宫海军 《植物营养与肥料学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1923-1934,共12页
【目的】硅可提高植物的耐盐性,但不同植物中硅提高耐盐性的机理并不相同。探究硅对盐胁迫下黄瓜幼苗的氧化损伤、Na^+积累和激素水平的影响,以阐明硅提高黄瓜耐盐性的机制。【方法】以基因型为Mch-4的黄瓜幼苗为试材,进行水培试验。营... 【目的】硅可提高植物的耐盐性,但不同植物中硅提高耐盐性的机理并不相同。探究硅对盐胁迫下黄瓜幼苗的氧化损伤、Na^+积累和激素水平的影响,以阐明硅提高黄瓜耐盐性的机制。【方法】以基因型为Mch-4的黄瓜幼苗为试材,进行水培试验。营养液中NaCl的胁迫浓度为65 mmol/L,施硅水平为Na2SiO3·9H2O0.3 mmol/L。在处理10天后,测定黄瓜幼苗生物量、Na^+含量与分配、Na^+转运相关基因表达水平及激素含量。【结果】施硅可改善盐胁迫下黄瓜幼苗的生长,减轻植株的氧化损伤。硅对盐胁迫下黄瓜根系和叶片Na^+含量无明显影响,可显著降低根和叶中质膜Na^+/H^+反向转运蛋白基因SOS1的表达量,对高亲和力钾转运蛋白基因HKT1的表达均影响不大,但促进了液泡膜Na^+/H^+反向转运蛋白基因NHX1的表达。对盐胁迫下黄瓜叶片Na^+的亚细胞定位发现,硅处理使叶绿体中Na^+含量下降,而液泡中Na^+含量升高。硅处理提高了盐胁迫植株根和叶片中赤霉素、生长素和细胞分裂素的水平。【结论】施硅可提高液泡膜Na^+/H^+反向转运蛋白基因NHX1的表达,将Na^+区隔化于液泡中,进而降低叶绿体中的Na^+含量,缓解盐胁迫下黄瓜幼苗的氧化损伤;硅还诱导产生了较多的赤霉素、生长素和细胞分裂素,其调控Na^+积累和黄瓜幼苗的氧化损伤的机理还需进一步研究。 展开更多
关键词 盐胁迫 Na^+/H^+反向转运蛋白基因nhx1 Na^+区隔化 激素
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珠美海棠Mz_2NHX1基因的克隆和序列分析 被引量:3
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作者 张永利 孟晓烨 +2 位作者 孙婷梅 李爱 彭立新 《江苏农业科学》 北大核心 2015年第9期20-25,共6页
以珠美海棠幼苗根系的c DNA为模板,根据珠美海棠NHX1(GQ503257)的保守序列设计引物,通过RT-PCR扩增得到目的基因全长1 865 bp,包含1个1 635 bp的开放阅读框,编码544个氨基酸,其核苷酸序列与苹果(GU338395)、玫瑰(KC188664)、杨树(ACU018... 以珠美海棠幼苗根系的c DNA为模板,根据珠美海棠NHX1(GQ503257)的保守序列设计引物,通过RT-PCR扩增得到目的基因全长1 865 bp,包含1个1 635 bp的开放阅读框,编码544个氨基酸,其核苷酸序列与苹果(GU338395)、玫瑰(KC188664)、杨树(ACU01853)的核苷酸序列同源性分别是95%、93%、91%。其对应的氨基酸序列与拟南芥(AAF21755)、玫瑰(BAD93487.1)和大叶补血草(BAB11940)液泡型Na+/H+逆向转运蛋白的氨基酸序列的同源性分别是79%、87%、79%,说明该蛋白是一种定位于液泡膜的Na+/H+逆向转运蛋白,该基因属于液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因。它编码的蛋白质分子量为60.5 ku,理论等电点(p I)为8.85,二级结构主要由α-螺旋、β-折叠和不规则卷曲构成,其N-末端具有12个跨膜疏水片段,C-末端具有亲水的长链尾巴,在跨膜片段内含有氨基酸保守序列85-LFFIYLLPPI-94,是Na+/H+逆向转运蛋白抑制剂氨氯吡嗪咪的结合位点。 展开更多
关键词 珠美海棠 Mz2nhx1基因 克隆 生物信息学 耐盐机理
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大叶补血草Na^+/H^+逆向转运蛋白基因NHX1的克隆及番茄的遗传转化
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作者 宋晓丽 祝建波 周玲玲 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期192-196,共5页
根据NCBI公布的大叶补血草NHX1基因序列设计特异性引物,经RT-PCR方法克隆得到大叶补血草液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因NHX1,构建植物融合表达载体pCAMBIA1301-NHX1,重组质粒通过农杆菌介导转化番茄,经PCR和RT-PCR鉴定,获得转基因番茄植... 根据NCBI公布的大叶补血草NHX1基因序列设计特异性引物,经RT-PCR方法克隆得到大叶补血草液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因NHX1,构建植物融合表达载体pCAMBIA1301-NHX1,重组质粒通过农杆菌介导转化番茄,经PCR和RT-PCR鉴定,获得转基因番茄植株。本研究为大叶补血草耐盐基因NHX1的进一步功能分析和应用奠定了一定的理论基础。 展开更多
关键词 大叶补血草 nhx1 番茄 遗传转化
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Synergistic responses of NHX, AKT1, and SOS1 in the control of Na^+ homeostasis in sweet sorghum mutants induced by ^(12)C^(6+)-ion irradiation 被引量:4
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作者 Wen-Ting Gu Li-Bin Zhou +4 位作者 Rui-Yuan Liu Wen-Jie Jin Ying Qu Xi-Cun Dong Wen-Jian Li 《Nuclear Science and Techniques》 SCIE CAS CSCD 2018年第1期32-38,共7页
Sweet sorghum mutants induced by^(12)C(6+)-ion irradiation were planted under different soil salinity conditions to investigate the mechanisms maintaining the transport and spatial distribution of Na^+. The functions ... Sweet sorghum mutants induced by^(12)C(6+)-ion irradiation were planted under different soil salinity conditions to investigate the mechanisms maintaining the transport and spatial distribution of Na^+. The functions of the synergistic responses of NHX, AKT1, and SOS1 related to Na^+ accumulation were investigated in control(KFJT-CK) sorghum and KF1210-3 and KF1210-4 mutants. The results indicated that the NHX, AKT1, and SOS1 proteins in sweet sorghum are mainly involved in the transport, exclusion, and spatial distribution of Na^+,respectively. In addition to physiological parameters, we also measured the expression levels of NHX, AKT1, and SOS1 genes. The experimental results indicated that 150 m M Na Cl induced marked increases in the transcripts of NHX and SOS1 after 8 and 12 h in the KF1210-3,KF1210-4, and KFJT-CK cultivars. In contrast, however, a decrease in AKT1 was observed. On the basis of our results, we propose a model in which cooperation amongNHX, AKT1, and SOS1 facilitates Na^+ homeostasis in sweet sorghum in response to an increase in salt concentration. Accordingly, study of the regulatory mechanisms in sweet sorghum generated by carbon ion irradiation is essential for the selection of salt-tolerant cultivars. 展开更多
关键词 12C6+-ion irradiation Sweet SORGHUM Salt stress nhx AKT1 SOS1
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Differential Responses of NHX1 and SOS1 Gene Expressions to Salinity in two Miscanthus sinensis Anderss.Accessions with Different Salt Tolerance 被引量:1
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作者 Qian Sun Toshihiko Yamada +1 位作者 Yulai Han Tetsuo Takano 《Phyton-International Journal of Experimental Botany》 SCIE 2021年第3期827-836,共10页
The lignocellulosic crop Miscanthus spp.has been identified as a good candidate for biomass production.The responses of Miscanthus sinensis Anderss.to salinity were studied to satisfy the needs for high yields in marg... The lignocellulosic crop Miscanthus spp.has been identified as a good candidate for biomass production.The responses of Miscanthus sinensis Anderss.to salinity were studied to satisfy the needs for high yields in marginal areas and to avoid competition with food production.The results indicated that the relative advantages of the tolerant accession over the sensitive one under saline conditions were associated with restricted Na^(+)accumulation in shoots.Seedlings of two accessions(salt-tolerant‘JM0119’and salt-sensitive‘JM0099’)were subjected to 0(control),100,200,and 300 mM NaCl stress to better understand the salt-induced biochemical responses of genes involved in Na^(+)accumulation in M.sinensis.The adaptation responses of genes encoding for Na^(+)/H^(+)antiporters,NHX1 and SOS1 to NaCl stress were examined in JM0119 and JM0099.The cDNA sequences of genes examined were highly conserved among the relatives of M.sinensis based on the sequencing on approximate 600 bp-long cDNA fragments obtained from degenerate PCR.These salt-induced variations of gene expression investigated by quantitative real-time PCR provided evidences for insights of the molecular mechanisms of salt tolerance in M.sinensis.The expression of NHX1 was up-regulated by salt stress in JM0119 shoot and root tissues.However,it was hardly affected in JM0099 shoot tissue except for a significant increase at the 100 mM salt treatment,and it was salt-suppressed in the JM0099 root tissue.In the root tissue,the expression of SOS1 was induced by the high salt treatment in JM0119 but repressed by all salt treatments in JM0099.Thus,the remarkably higher expression of NHX1 and SOS1 were associated with the resistance to Na^(+)toxicity by regulation of the Na^(+)influx,efflux,and sequestration under different salt conditions. 展开更多
关键词 SALINITY Miscanthus sinensis nhx1 SOS1
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NH_x(x=1~3)在金属Ir表面吸附与解离的第一性原理研究 被引量:5
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作者 肖香珍 《原子与分子物理学报》 北大核心 2017年第4期617-623,共7页
采用密度泛函理论,在slab模型下,研究了NH_x(x=1~3)在Ir(100)、Ir(111)和Ir(110)表面上的最稳定吸附位置、几何构型以及逐步脱氢分解过程,计算了相应的吸附能和活化能.计算结果表明,在Ir(100)、Ir(111)面上,NH_3是以C_3轴垂直吸附在顶位... 采用密度泛函理论,在slab模型下,研究了NH_x(x=1~3)在Ir(100)、Ir(111)和Ir(110)表面上的最稳定吸附位置、几何构型以及逐步脱氢分解过程,计算了相应的吸附能和活化能.计算结果表明,在Ir(100)、Ir(111)面上,NH_3是以C_3轴垂直吸附在顶位,在Ir(110)上,NH_3是以N-Ir键与表面成68.6°吸附在顶位,且吸附能依赖于表面的结构而不同,相比而言,NH_3更容易吸附在开放表面Ir(100)、Ir(110)面上,说明NH_3在这些表面的吸附具有结构敏感性.NH_(x(x=1~3))的分解,在Ir(100),NH_3的吸附与分解存在竞争,在Ir(110)面NH_3最容易分解,在Ir(111)面NH_3是分子性吸附,不能分解.NH_2、NH在三个表面均能够分解,在Ir(110)面活化能均较高. 展开更多
关键词 密度泛函理论 nhx(x=1~3)吸附与分解 Ir表面 结构敏感性
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2种菊苣再生体系及遗传转化效率的比较 被引量:3
15
作者 赵龙 陈丹丹 +3 位作者 梁明祥 郑青松 王长海 刘兆普 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期2169-2176,共8页
以普那菊苣和将军菊苣子叶为材料,通过植物组织培养的方法,探讨了不同激素浓度配比对二者愈伤组织诱导、芽分化以及根再生的影响,并通过农杆菌介导法将编码獐茅液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因(AlNHX)导入菊苣中,比较普那菊苣和将军菊苣... 以普那菊苣和将军菊苣子叶为材料,通过植物组织培养的方法,探讨了不同激素浓度配比对二者愈伤组织诱导、芽分化以及根再生的影响,并通过农杆菌介导法将编码獐茅液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因(AlNHX)导入菊苣中,比较普那菊苣和将军菊苣的遗传转化效率。结果表明:不同基因型的菊苣愈伤组织诱导和芽分化条件不同,普那菊苣最佳培养基为MS+1.5mg/L 6-BA+0.2mg/L IBA;将军菊苣最佳培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA;二者最佳生根培养基均为1/2MS+0.1mg/L NAA。获得的抗性芽经PCR检测,初步证实AlNHX已插入到菊苣基因组中,且普那菊苣转化效率为10.0%,将军菊苣转化效率为13.3%。 展开更多
关键词 普那菊苣 将军菊苣 农杆菌 Alnhx 转化效率
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盐爪爪Na^+/H^+逆向转运蛋白和焦磷酸酶的亚细胞定位 被引量:7
16
作者 刘琳 张富春 曾幼玲 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期463-468,共6页
将盐爪爪Na+/H+逆向转运蛋白基因(KfNHX1)和焦磷酸酶基因(KfVP1)分别构建至植物表达载体,利用基因枪介导的方法转化洋葱表皮细胞,通过荧光显微镜观察研究其亚细胞定位.结果表明,转化了KfNHX1(或KfVP1)-GFP融合蛋白的洋葱表皮细胞仅膜系... 将盐爪爪Na+/H+逆向转运蛋白基因(KfNHX1)和焦磷酸酶基因(KfVP1)分别构建至植物表达载体,利用基因枪介导的方法转化洋葱表皮细胞,通过荧光显微镜观察研究其亚细胞定位.结果表明,转化了KfNHX1(或KfVP1)-GFP融合蛋白的洋葱表皮细胞仅膜系统散发荧光,而对照组即未转入KfNHX1(或KfVP1)基因的细胞则整体均匀发出荧光.说明KfNHX1和KfVP1可能定位于细胞的膜系统,作为跨膜转运蛋白在离子的调控运输中发挥重要作用. 展开更多
关键词 盐爪爪 nhx1 VP1 绿色荧光蛋白 定位
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转AtNHX1基因烟草钾积累及根系生理特性 被引量:4
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作者 许杰 武恒燕 +5 位作者 薛刚 陈荣平 彭玉富 韩助君 徐世晓 杨铁钊 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期31-37,共7页
为了探明转At NHX1基因提高烟叶钾含量的生理原因,利用大田和水培试验,以3个转At NHX1基因阳性纯合株系N7、N9和N10,以及未转化烟草K326(对照)为材料,研究了转At NHX1基因烟草钾含量、根系形态和生理特性。结果表明,转At NHX1基因烟草... 为了探明转At NHX1基因提高烟叶钾含量的生理原因,利用大田和水培试验,以3个转At NHX1基因阳性纯合株系N7、N9和N10,以及未转化烟草K326(对照)为材料,研究了转At NHX1基因烟草钾含量、根系形态和生理特性。结果表明,转At NHX1基因烟草在大田中长势一致,烟叶含钾量在10~70 d叶龄始终显著高于对照;在水培实验中,转At NHX1基因烟草吸收K^+能力强,具有较大的K^+吸收速率,其根系形态、根系活力、阳离子交换量和ATPase活性均显著高于对照。转At NHX1基因烟草具有富钾基因型烟草钾高效吸收和积累的特征,因而钾含量大大提高。 展开更多
关键词 转At nhx1基因烟草 钾含量 根系形态 生理特性
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根癌农杆菌介导的苜蓿悬浮胚性愈伤遗传转化体系的建立与优化 被引量:3
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作者 申玉华 李望丰 +4 位作者 金太成 常青 殷东旭 王德利 刘立侠 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期721-727,共7页
苜蓿基因型是限制遗传转化的关键因素之一。本实验通过对7种苜蓿胚性愈伤组织诱导,筛选出一份具有高频再生潜力的基因型公农-1号,并以该基因型为转化平台探索和建立了一套高效的苜蓿遗传转化系统。分析了影响农杆菌共培养转化苜蓿悬浮... 苜蓿基因型是限制遗传转化的关键因素之一。本实验通过对7种苜蓿胚性愈伤组织诱导,筛选出一份具有高频再生潜力的基因型公农-1号,并以该基因型为转化平台探索和建立了一套高效的苜蓿遗传转化系统。分析了影响农杆菌共培养转化苜蓿悬浮胚性愈伤的因素,优化了悬浮培养条件,建立的超声波辅助农杆菌介导苜蓿胚性愈伤的遗传转化系统为:以下胚轴诱导的愈伤组织经悬浮培养得到的胚性愈伤为转化材料,乙酰丁香酮为100μmol·L-1、超声波处理时间8s、卡那霉素筛选浓度30mg·L-1、共培养4d,接种于选择培养基上进行筛选和再生。最终,获得了大量的转基因植株,分子检测证实目的基因-角碱蓬液泡膜型Na+/H+逆向转运蛋白基因已经整合到苜蓿基因组中。 展开更多
关键词 苜蓿 悬浮胚性愈伤 nhx1基因 遗传转化
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大叶补血草Na^+/H^+逆向转运蛋白基因的克隆及序列分析 被引量:5
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作者 周玲玲 缪建锟 +1 位作者 祝建波 曹连莆 《草业学报》 CSCD 北大核心 2009年第5期176-183,共8页
根据同源序列区域设计简并引物,利用RT-PCR及RACE方法从盐生植物大叶补血草中分离了Na+/H+逆向运输蛋白基因的cDNA(LgNHX1,GenBank登录号EU780457)。LgNHX1的cDNA全长为2 397 bp,5′端非翻译区长度为512 bp,3′端非翻译区长度为229 bp,... 根据同源序列区域设计简并引物,利用RT-PCR及RACE方法从盐生植物大叶补血草中分离了Na+/H+逆向运输蛋白基因的cDNA(LgNHX1,GenBank登录号EU780457)。LgNHX1的cDNA全长为2 397 bp,5′端非翻译区长度为512 bp,3′端非翻译区长度为229 bp,其中包括12 bp的poly(A)尾巴,中间的开放读码框为1 656bp,编码1个550个氨基酸的多肽,推测分子量为61 kD。氨基酸同源性分析表明,LgNHX1与北滨藜、小麦、盐角草和拟南芥液泡Na+/H+逆向运输蛋白的一致性分别为82.62%,82.01%,80.64%和75.86%。预测分析表明,LgNHX1具有11~12个跨膜结构区域。系统发育分析表明该蛋白(LgNHX1)与液泡型的Na+/H+逆向转运蛋白的亲缘关系较近,与质膜型的Na+/H+逆向转运蛋白亲缘关系较远。 展开更多
关键词 大叶补血草 Na+/H+逆向转运蛋白基因(nhx1) CDNA克隆 RACE
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角碱蓬NHX1基因的克隆及在烟草中的表达
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作者 张春玉 关敏 +2 位作者 宋凯 李望丰 刘立侠 《吉林农业科学》 CSCD 北大核心 2013年第3期31-34,共4页
Na+/H+逆向转运蛋白在植物抗盐碱的过程中起着至关重要的作用。本实验首次从角碱蓬中克隆出Na+/H+逆向转运蛋白基因NHX1,并将其连接到真核表达载体pBIGFP中,通过农杆菌LBA4404介导转化至烟草中。最后的分子检测实验结果表明,NHX1基因成... Na+/H+逆向转运蛋白在植物抗盐碱的过程中起着至关重要的作用。本实验首次从角碱蓬中克隆出Na+/H+逆向转运蛋白基因NHX1,并将其连接到真核表达载体pBIGFP中,通过农杆菌LBA4404介导转化至烟草中。最后的分子检测实验结果表明,NHX1基因成功整合到了烟草的基因组中并得到了有效表达。 展开更多
关键词 角碱蓬 nhx1基因 烟草
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