用三嗪染料修饰吐温80液-固萃取乳酸脱氢酶的研究

利用三嗪类染料 Cibacron Blue F3G- A修饰吐温 80 ,与硫酸铵构建染料聚合物 -盐的液 -固亲和萃取体系 ,从猪心肌匀浆液中分离纯化乳酸脱氢酶。结果表明 ,吐温 80浓度 12 % ,含染料吐温 80为 5 % ;硫酸铵浓度1.81mol/ L ;p H 7.4 ;匀浆液加入量为体系的 1%时 ,吐温 80相平均酶活收率 93% ,纯化倍数 9.2。研究了乳酸脱氢酶与吐温 80相分离的条件 ,将吐温 80相保温溶解 ,改变硫酸铵浓度为 0 .9m ol/ L ,二次成相反萃 ,盐水相酶活收率90 % 。

用三嗪染料配基吐温80-磷酸盐液固萃取-体系分离纯化乳酸脱氢酶

目的 利用三嗪类染料 Cibacron Blue F3 G-A修饰的吐温 80 ,与磷酸钾盐构建染料配基吐温 80 -盐液 -固亲和萃取体系 ,从猪心肌匀浆液中分离纯化乳酸脱氢酶。方法 成相染料配基吐温 80浓度为 1 5 % (其中吐温 80中含染料配基吐温 80为 1 0 % ) ;成相磷酸钾盐浓度为 1 .49mol/L (p H 8.5 0 ) ;匀浆液加入量为体系的1 % ,一次成相正萃取。将吐温 80相保温溶解 ,改变磷酸钾盐浓度为 0 .91 mol/L,二次成相反萃取。结果 一次成相正萃取吐温 80相平均酶活收得率 97% ,纯化 8.0倍。二次成相反萃取 ,盐水相酶活收得率近 1 0 0 % ,实现了酶与吐温 80相的分离。结论 三嗪染料配基吐温 80 -磷酸盐液 -固萃取体系 ,分离纯化乳酸脱氢酶 ,具有良好选择性和分离纯化效果。对其进一步研究与开发 ,具有较大实际应用价值。

天花粉蛋白的盐析工艺和亲和双水相分离工艺

近年,随着天花粉蛋白(TCS)在抗癌细胞和HIV病毒方面的临床性研究进展,天花粉蛋白生产工艺也需在保证效益的前提下精细化。本实验利用硫酸铵分级沉淀、硫酸铵粗提后亲和双水相进一步纯化,得到精制的天花粉蛋白。并对提取工艺进行了优化,最后利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳对其纯度进行了鉴定以及相对分子质量的测定,并对比了盐析法和亲和双水相分离法,研究结果表明:硫酸铵沉淀法最佳分离条件为固液比为1∶12、浸泡时间为24h、pH在5左右,最终得率0.8mg/g;亲和萃取最佳条件:染料CibacronBlue F3GA-吐温80在成相吐温80中的含量8%,成相吐温80的占双水相含量为4.0%,(NH4)2SO4的含量2.0mol/L,充分混合的时间9h,反萃取氯化钠的含量为0.5mol/L,反萃取的时间为8h,得率0.6mg/g,但凝胶电泳显示其纯度较高。