一株海洋杆菌属新菌种XAAS-72^(T)的植物促生功能分析及ACC脱氨酶蛋白结构预测

【目的】研究海洋杆菌属新菌种XAAS-72的植物促生功能,挖掘其潜在功能基因。【方法】通过对菌株全基因组测序,分析相关功能基因组成,挖掘ACC脱氨酶合成相关的候选基因,并进行功能预测。【结果】海洋杆菌属新种Pontibacter kalidii XAAS-72菌悬液处理可显著提高盆栽小麦麦苗生长,其基因组长度为5054860 bp,含1个环形质粒,总GC含量为54.52%,注释的基因数目为4391个,编码蛋白数4261个,具有多种抗逆和促生相关基因。其与Pontibacter sp.BAB1700的ACC脱氨酶(1-aminoeyclopropane-1-earboxylate-deaminase)相似度最高为72.48%。该蛋白属于不稳定亲水性蛋白,不具备跨膜结构,且无信号肽结构。【结论】海洋杆菌属新种XAAS-72蕴藏着丰富的抗逆和植物促生相关基因。

平贝母水提物通过激活AMPK/ACC通路和调节肠道菌群减轻小鼠非酒精性脂肪性肝病

目的:探索平贝母水提物(aqueous extract of Fritillaria ussuriensis,FU-AE)抗非酒精性脂肪性肝病的作用效果与机制。方法:通过网络药理学分析平贝母(Fritillaria ussuriensis Maxir.,FU)与非酒精性脂肪性肝病的关联,利用高脂饮食(high fat diet,HFD)+10%果糖饮水诱导小鼠构建非酒精性脂肪性肝病小鼠模型,给予小鼠平贝母水提物高、中、低三个剂量进行干预治疗。通过比色法检测实验小鼠血清中门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、甘油三酯(triglyceride,TG)、胆固醇(to-tal cholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平;HE染色评估小鼠肝脏病理学变化,明确平贝母水提物抗非酒精性脂肪性肝病的效果;提取肝脏组织蛋白,Western blot检测AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)通路相关蛋白的表达,明确平贝母抗非酒精性脂肪性肝病作用机制。运用16S rRNA测序技术探究盲肠内容物微生物组成等,揭示平贝母水提物对非酒精性脂肪性肝病小鼠肠道菌群结构的调节作用。结果:平贝母水提物(高剂量)能够改善非酒精性脂肪性肝病小鼠肝脂肪变性(P<0.05)。与模型组比较,平贝母水提物(高剂量)干预组AST、ALT、TG、TC、LDL-C水平均显著性下降(P<0.05),HDL-C水平显著性上升(P<0.05);平贝母水提物(高剂量)干预组能够显著性增加模型小鼠肝脏中磷酸化AMPKα、AMPKα和磷酸化ACC蛋白水平(P<0.05),显著性减少ACC蛋白的表达水平(P<0.05);并显著性增加潜在有益菌Faecalibaculum ro-dentium、Lactobacillus johnsonii和Akkermansia muciniphila的相对丰度(P<0.05)。结论:平贝母水提物可能通过激活AMPK/ACC通路和调节肠道菌群结构、改善小鼠非酒精性脂肪性肝病。

滋膵降糖方介导Fetuin B-AMPK/ACC通路对高脂诱导肥胖小鼠肝脏胰岛素抵抗的调控机制研究

目的:探讨滋膵降糖方通过Fetuin B-AMPK/ACC通路改善肥胖C57BL/6J小鼠胰岛素抵抗的机制。方法:高脂饮食喂养C57BL/6J小鼠,构建胰岛素抵抗模型,随机分为模型组、滋膵降糖方组、二甲双胍组、联合组(滋膵降糖方+二甲双胍),正常饮食小鼠为空白对照组。观察各组小鼠体质量、肝脏质量、葡萄糖耐量、胰岛素抵抗指数,肝脏Fetuin B、AMPK、ACC mRNA及肝脏Fetuin B、AMPK_(α1)、ACC、P-AMPK_(αT183/T172)、P-ACC_(S79)蛋白表达。结果:滋膵降糖方可改善小鼠葡萄糖耐量,减小曲线下面积,降低胰岛素抵抗指数,下调肝脏质量和肝体比,降低肝脏Fetuin B、ACC mRNA和Fetuin B蛋白表达,上调AMPK mRNA和P-AMPK_(αT183/T172)/AMPK_(α1)、P-ACCs79/ACC蛋白水平。结论:滋膵降糖方可能通过Fetuin B-AMPK/ACC信号通路减轻肥胖小鼠肝脏胰岛素抵抗。

不同方式运动对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌脂肪沉积的影响及AMPK-ACC途径在调节脂肪酸氧化中的作用

目的:研究有氧运动、抗阻运动、有氧联合抗阻运动3种不同方式运动对胰岛素抵抗(IR)大鼠骨骼肌游离脂肪酸(FFA)及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、肉毒碱棕榈酰基转移酶(CPT1)活性水平的影响,为探讨不同方式运动对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌脂肪沉积的效果及AMPK-ACC途径在骨骼肌中调节脂肪酸氧化的作用。方法:高糖高脂饲料喂养建立胰岛素抵抗大鼠模型之后改为普食饲养,并随机分为高脂改善食对照组(C组)、有氧运动组(E组)、抗阻运动组(R组)、有氧+抗阻联合运动组(RE组),运动干预结束后检测股四头肌FFA、AMPK、ACC、CPT1酶活性水平。结果:(1)13周高糖高脂饮食造模后,与P组相比,造模组C组口服葡萄糖耐量、胰岛素耐量在30 min、60 min、曲线下面积AUC均有极显著性差异(P<0.01),造模组C组大鼠FBG无显著性差异(P>0.05);造模组C组FINS、ISI、HOMA-IR较P组均有极显著性差异(P<0.01)。(2)与C组相比,E组、R组、RE组血清FFA无显著差异(P>0.05);股四头肌FFA均显著降低(P<0.01),但各运动组间无显著差异(P>0.05)。(3)与C组相比,E组、R组、RE组AMPK酶活性均显著升高(P<0.01),RE组AMPK酶活性较E组、R组均显著升高(P<0.01);与C组相比,E组、RE组ACC酶活性有降低趋势,而R组则升高,但均无显著性差异(P>0.05),各运动组之间ACC酶活性也未见差异(P>0.05);各运动组CPT1酶活性较C组均显著升高(P<0.01),RE组CPT1酶活性较E组、R组均显著升高(P<0.01)。结论:(1)13周高糖高脂饮食干预成功造成胰岛素抵抗大鼠模型。(2)8周期不同运动均能显著降低IR大鼠骨骼肌脂肪沉积,其机制可能与运动显著上调IR大鼠骨骼肌AMPK、CPT1酶活性水平,增强脂肪氧化利用,改善胰岛素抵抗有关;联合有氧与抗阻运动较单一运动对脂肪氧化效果更为显著。(3)8周期不同方式运动干预未观察到IR大鼠ACC、CPT1的同步变化。IR大鼠骨骼肌脂肪酸氧化的调节可能独立于AMPK/ACC途径,ACC酶活性的调节对于降低脂肪含量是否重要,尚需进一步研究。

植物根际产ACC脱氨酶原油降解菌的筛选及其降解和促生特性研究

从新疆克拉玛依油田作业区周围选择石油污染及盐渍化的3个区域采集梭梭根际土壤,测定土壤理化性质;分别以原油与1-氨基环丙烷-1-羧酸(1-amino-cyclopropane-1-carboxylic acid,ACC)作为唯一碳源和氮源,从土样中分离出两株耐盐碱能力强、ACC脱氨酶活力较高、原油降解能力较强的菌株。菌株S8-1和W8-4的ACC脱氨酶比活力分别为(0.17±0.06)和(0.77±0.08)U/mg,W8-4的酶比活力显著高于S8-1。通过乳化性能的测定,得出菌株W8-4和S8-1的乳化率分别为(54.92±5.04)%和(49.59±3.69)%,表明其具有增溶作用,可降低油水界面张力。7 d的降解试验结果显示,两株菌对原油的降解率分别为52.82%和41.38%。经形态学观察、生理生化鉴定和16S rDNA序列分析鉴定S8-1为格氏假单胞菌(Pseudomonas gessardii)菌株,W8-4为假单胞菌属(Pseudommonas sp.)菌株。通过研究不同环境条件对菌株原油降解效果的影响发现,当降解时间为7 d,摇床转速为180 r/min时,菌株S8-1的最佳降解条件是接种量为4%,初始pH为7,培养温度为30℃,原油浓度为0.5 g/L;菌株W8-4的最佳降解条件是接种量为5%,初始pH为8,培养温度为30℃,原油浓度为2.5 g/L;此时,两菌株对原油的降解率分别为55.16%和57.89%。促生能力的测定结果表明,两株菌均具有生物固氮和溶磷能力。因此,这两株菌可为将来盐渍化石油污染土壤的治理提供有价值的菌种资源。

薰衣草根际促生菌ACC脱氨酶基因克隆与表达

本文采用原核表达系统,表达薰衣草根际促生菌的ACC脱氨酶,并探究重组菌酶的ACC脱氨酶活性。经PCR扩增,薰衣草根际促生菌YSX-12的acdS基因长度达到了1 017 bp,与已报道的恶臭假单胞菌AM15株acdS基因核苷酸序列的相似度为99%。构建重组载体p ET-28-ACDS后,在IPTG诱导下,特异表达大小为39 k Da的蛋白条带。Western印迹表明,表达的重组ACC脱氨酶能与小鼠抗6×His标签抗体发生特异性反应;ELISA结果显示,重组ACC脱氨酶能够与抗ACC脱氨酶抗体结合,ACC脱氨酶含量达421 pg/mL,重组菌和YSX-12的最大酶活性分别为0.621 U/mg和0.642 U/mg。通过研究构建的重组菌BL21及其表达的重组ACC脱氨酶,可为进一步研究ACC脱氨酶在根际促生菌中的促生机理奠定基础。

基于CANoe软件的ACC测试系统开发

为了解决主机厂智能化车型的自适应巡航控制(ACC)测试系统功能测试验证的问题,基于CANoe软硬件开发了ACC测试系统,此系统实现了对智能化车控制器局域网络(CAN)总线上的数据进行实时采集、保存、解析、数据回放的功能,测试方法及评价标准符合ACC相关法规标准要求,ACC相关测试项目的关键数据可实时显示进行在线分析,也可进行离线分析,数据分析的结果对于某主机厂E6车ACC系统功能的评估验证有重要的参考价值,可方便测试人员更快更高效地完成智能化车型ACC功能的测试验证工作。

姜黄素介导的骨髓间充质干细胞外泌体对ACC-M细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨姜黄素介导的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)外泌体对ACC-M细胞增殖和转移的影响及其作用机制。方法:将7.5μmmol/L的姜黄素与人BMSCs共培养72 h后,分离外泌体并进行鉴定,将外泌体与ACC-M细胞进行共培养,并将ACC-M细胞分为control组(正常培养)、BMSC-Exo组(未经姜黄素处理的BMSCs外泌体与ACC-M细胞共培养)、Cur-BMSC-Exo组(经姜黄素处理的BMSCs外泌体与ACC-M细胞共培养)及Cur组(经7.5μmmol/L的姜黄素处理细胞);培养48 h后使用蛋白质印迹法(Western blotting)实验检测外泌体肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG-101)、CD63、CD9和重组人钙连蛋白(calnexin,CANX)及ACC-M细胞上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)的蛋白表达情况;使用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK8)实验检测ACC-M细胞存活率;使用transwell实验检测ACC-M细胞迁移和侵袭情况;使用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测ACC-M细胞TGF-β1和ERK mRNA相对表达量。结果:与control组和BMSC-Exo组比较,Cur-BMSC-Exo组和Cur组的细胞活力、细胞迁移和侵袭数量及N-cadherin、vimentin、TGF-β1和ERK表达水平均显著降低(P<0.05),而E-cadherin蛋白水平显著增加(P<0.05);与Cur-BMSC-Exo组比较,Cur组细胞活力、细胞迁移和侵袭数量及N-cadherin、vimentin、TGF-β1和ERK表达水平均显著增加(P<0.05),而E-cadherin蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论:BMSCs分泌的外泌体可作为姜黄素的载体,抑制ACC-M细胞的增殖和转移并调控TGF-β1/ERK信号通路。

考虑反应时滞的ACC跟驰模型构建与分析

为建立自适应巡航(Adaptive cruise control, ACC)车辆的跟驰模型,采用实车试验数据,确定ACC车辆的反应时滞的存在,并将反应时滞代入全速度差(Full Velocity Difference, FVD)模型,建立考虑反应时滞的ACC跟驰模型;通过傅里叶变换和泰勒展开,推导出所构建模型的稳定性条件;通过灵敏性分析,确定各参数对模型的影响;采用遗传算法进行模型标定,分析仿真结果的稳定性状态。研究结果表明,ACC车辆仍旧存在较大的反应时滞,各车的反应时滞均值均大于1.3 s;随着ACC车辆对车头间距和速度差灵敏性提升,保持车队稳定所需的时滞时间逐渐减低,反之则逐渐上升;稳定状态判定结果与实际结果基本一致。得到以下结论,ACC车辆对前后车速度差的敏感程度对车队线性稳定性的影响更大;所构建模型能较好地反映ACC车辆的行为模式和跟驰特点。

盐碱胁迫下产ACC脱氨酶促生菌对绿豆插条生根的作用

盐碱胁迫使植物产生过量的乙烯,过量的乙烯会抑制植物生根,产1-氨基环丙烷1-羧酸(ACC)脱氨酶促生菌可以通过分解乙烯的直接前体ACC缓解盐碱对植物的伤害。为探讨盐碱胁迫下产ACC脱氨酶促生菌对植物生根的作用,从碱草根际土中筛选耐盐碱、产ACC脱氨酶能力较强的菌株,对筛选出的菌株进行鉴定,并分析了菌株对绿豆插条生根的影响。结果表明,DQJC1、DQJC5、DQJC6三个菌株产ACC脱氨酶活性分别为8.147、7.282、7.906 U/mg,3个菌株具有较强的耐盐碱能力,同时具有产吲哚乙酸(IAA)能力,经鉴定这3株细菌均属于假单胞菌属(Pseudomonas)。将3株促生菌接种到绿豆插条基部,结果发现,不论是在正常条件下还是盐碱胁迫条件下,绿豆插条的根长、鲜质量及发根数均不同程度增加;在盐碱胁迫条件下,接种3株菌显著下调了绿豆插条根中ACC合酶及ACC氧化酶活性,DQJC1和DQJC6菌株显著下调了绿豆插条根中ACC含量。说明产ACC脱氨酶促生菌通过减少乙烯的生成有效地缓解了盐碱胁迫对绿豆插条生根的抑制。

含ACC脱氨酶的根际促生菌对切花月季生长的影响

【目的】探明含ACC脱氨酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylate deaminase)的不同植物根际促生菌对切花月季白荔枝的促生效果。【方法】以白荔枝为试验材料,在其盆栽过程中施入含ACC脱氨酶的不同PGPR菌株,通过测定其株高、茎粗、分枝数等农艺性状、叶绿素a/b值、叶片保护酶活性及MDA含量、花朵乙烯释放量、光合及叶绿素荧光参数等生理指标,探讨不同菌株对白荔枝生长及生理的影响。【结果】施入含ACC脱氨酶的不同PGPR菌株对白荔枝生长及光合作用产生的影响有所差异,其中菌株F23和F195处理较对照株高增加25.9%和26.0%,且F23处理后茎粗比对照处理增加17.1%,菌株F23和F195处理叶绿素a/b也高于对照。菌株F23显著提高了根际土壤脲酶、磷酸酶和蔗糖酶活性至42.6%、 16.3%和48.8%;且菌株F23对POD以及CAT活性的提高有显著促进作用,分别达到对照的1.78和2.07倍,花朵乙烯释放量比对照减少37.8%。净光合速率经菌株F195和F23处理后显著高于对照,分别达对照的1.40倍和1.16倍。【结论】综合比较认为,菌株F23对切花月季白荔枝的促生效果最好。

盐碱胁迫下产ACC脱氨酶促生菌对绿豆叶片脂质代谢的影响

为探讨盐碱胁迫下产ACC脱氨酶促生菌对绿豆叶片脂质代谢的影响,采用液相色谱质谱联用技术分析盐碱胁迫下接种产ACC脱氨酶促生菌(DQJC1)后绿豆叶片内脂类代谢产物的变化。结果表明:盐碱胁迫下接种DQJC1可以促进绿豆生长,显著提高了绿豆植株的株高(34.87%)、地上部鲜质量和干质量(44.07%和46.43%)、地下部鲜质量和干质量(30.56%和23.68%)及叶绿素含量(41.61%)。同时在绿豆叶片中共筛选到61个具有显著性差异的代谢产物,其中包括32种甘油磷脂类、14种固醇类、4种甘油糖脂类、3种鞘脂类和8种其他脂类;其中上调的代谢物主要为甘油磷脂(PC、PG、LPC、PI、PE、LPG)、甘油糖脂(SQDG47∶11)及鞘脂(CerG1d18∶2/16∶0+O),下调的代谢物主要为固醇(TG),甘油糖脂(SQDG:16∶0/16∶0)及鞘脂(CerG1d34∶2+O)。KEGG通路富集分析发现筛选出的差异代谢物中有6种代谢物被富集到9条代谢通路中,包括甘油磷脂代谢通路、甘油脂代谢通路、自噬性溶酶体代谢通路、糖基磷脂酰肌醇代谢通路、醚脂质代谢通路、亚油酸代谢通路、磷脂酰肌醇代谢通路、α-亚油酸代谢通路和花生四烯酸代谢通路。

基于AMPKα/SREBP-1/ACCα信号通路调节糖脂代谢的山楂果叶配伍机制

糖脂代谢病是由遗传、环境和精神状况引起的一种复杂性疾病,其特点是糖、脂代谢紊乱,中医学称之为“消渴症”,随着生活水平和社会压力的提高该疾病呈现多龄化趋势。中药的多组分协同增效使其在长期治疗消渴症方面具有明显优势。山楂果、叶富含有机酸和黄酮类成分,在降糖降脂方面具有显著效果。测定了山楂果、叶提取物中主要成分的含量,建立了T2DM大鼠模型,研究了山楂果叶提取物干预AMPKα/SREBP-1/ACCα信号通路进而调节糖脂代谢的作用和机制,结合网络药理学方法分析山楂果、叶治疗T2DM的有效成分、作用靶点和作用机制。结果表明,山楂果、叶配伍给药能更显著降低T2DM大鼠空腹血糖血脂水平,提高糖耐量水平,促进胰岛素分泌,降低脂肪堆积,缩小脂肪细胞,同时调节肝肾功能,增加肝脏AMPKα及其磷酸化水平,降低SREBP-1、ACCα的蛋白表达。网络药理学共筛选到14个山楂果、叶的有效成分,与疾病交集靶点共150个,参与调控PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、胰岛素抵抗等与糖脂代谢相关的多个信号通路。研究表明,山楂的果、叶配伍能够通过干预AMPKα/SREBP-1/ACCα通路,协同调节糖脂代谢,并且对于PI3k-Akt信号通路、MAPK信号通路、胰岛素抵抗等也有调节作用,具有良好的临床应用前景。

含ACC脱氨酶的植物促生菌对香石竹生长及瓶插特性的影响

[目的]研究含ACC脱氨酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylate deaminase)的不同植物生长促生菌对香石竹生长及瓶插特性的影响。[方法]以香石竹品种Tenie和Master为材料进行盆栽试验,研究接种不同菌株对香石竹生长过程中株高、茎粗、叶绿素相对含量、叶片数、花径和花期以及瓶插过程中鲜质量、叶绿素降解率和叶片凋落的影响。[结果](1)栽培过程中,混合菌株对香石竹生长有一定的促进作用,可显著增加Tenie的叶片数和Master的茎粗,分别较对照高25.0%和6.2%。经SN-2菌株处理后,Master的花期较对照显著延长34.9%。(2)瓶插过程中,与对照相比,所有菌株都可显著抑制Master的叶绿素降解,且效果最好的为SN-2处理,降解率仅为对照的57.6%。经XG菌株处理后,Tenie和Master的鲜质量减少率显著降低,分别仅为对照的79.0%和43.3%。经XG、F和混合菌株处理后,Tenie的叶片凋落率显著降低;而仅有混合菌株可显著抑制Master的叶片凋落,其凋落率仅为对照的54.4%。[结论]栽培中施用混合菌株对香石竹促生效果最好,而在瓶插中XG菌株和混合菌株分别对Tenie和Master采后品质的保持效果最好。

三株产ACC脱氨酶的植物根际促生菌产酶条件优化及促生作用研究

为提高植物根际促生菌(PGPR)菌株产1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶的能力,对3株PGPR菌株进行了最佳产酶条件优化及玉米促生试验。在单因素试验的基础上,研究了p H、温度、ACC底物浓度、Na Cl浓度、摇床转速对ACC脱氨酶酶比活力的影响,以p H、温度、ACC底物浓度为主要因素,进行响应面最佳产酶工艺优化。最终得到W5菌株的产酶条件为p H 8、温度32℃、ACC脱氨酶底物浓度6.0 mmol/L;BS2-2菌株的产酶条件为p H 10、温度30℃、ACC脱氨酶底物浓度6.0 mmol/L;5#菌株产酶条件为pH 9、温度30℃、ACC脱氨酶底物浓度6.0 mmol/L;较未优化前酶比活力分别提高了6.6、2、4倍。在盆栽试验中,W5菌株促生效果最为显著。利用高产ACC脱氨酶的PGPR能够促进玉米生长,可为制作为微生物复合菌剂奠定基础。

含ACC脱氨酶的植物促生菌对荷花耐镉性及镉富集的影响

为研究含ACC脱氨酶的植物促生菌(PGPB)对改善荷花耐Cd性及植物修复效率的作用,以观赏荷花品种“秣陵秋色”(Nelumbo nucifera‘Molingqiuse’)为材料,通过盆栽试验探讨了Cd胁迫条件下,接种含ACC脱氨酶的PGPB(Pantoea vagans So23和Pseudomonas veronii E02)对荷花的生长、生理代谢及Cd吸收积累能力的影响。结果显示:接种So23和E02能够有效缓解Cd胁迫对荷花生长的抑制作用,使得株高、叶面积及立叶数与未接菌Cd处理相比均有不同程度的增加,叶片中丙二醛含量分别降低38.39%和31.21%,抗坏血酸含量分别升高54.85%和36.64%。接种So23和E02显著改变了Cd在荷花不同器官间的分配模式,能够通过限制Cd从地下部向地上部叶片的转移来抵抗Cd胁迫;此外,接种So23能明显增强荷花对底泥中Cd的富集,使底泥中Cd含量下降56.47%,改善了底泥环境。研究表明,接种So23和E02在一定程度上能够通过提高抗氧化剂含量增强荷花对Cd胁迫的耐受性,同时改变荷花对Cd的转运及富集能力。

二陈汤对肥胖小鼠肝脏脂代谢及AMPK/ACC/SREBP1信号通路作用机制研究

目的:观察二陈汤对肥胖小鼠肝组织AMPK/ACC/SREBP1信号通路的作用,并探讨其改善肝脏脂质代谢及炎性病变的作用机制。方法:将小鼠随机分为空白(Control)组、模型(Model)组、奥利司他(Orlistat)组和二陈汤(ECD)组。除Control组外,其他各组小鼠通过高脂饲料建立肥胖模型。Orlistat组和ECD组小鼠分别给予奥利司他胶囊和二陈汤,Control组和Model组小鼠给予等体积的生理盐水。计算小鼠体重、肝脏湿重和肝体比值;检测小鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C、HDL-C水平;HE染色和油红O染色分别用于观察肝组织病理形态及肝组织脂滴的变化;ELISA检测肝组织中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平;Western bolt检测肝组织中AMPK、ACC、SREBP1及其磷酸化的蛋白表达水平。结果:与Model组比较,Orlistat组和ECD组小鼠体重、肝脏湿重及肝体比值都有所降低(P<0.01,P<0.05),且肝组织病理结构和脂滴沉积得到明显改善。与Control组比较,Model组小鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C水平升高(P<0.01),而HDL-C水平下降(P<0.01)。与Model组比较,Orlistat组和ECD组小鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C水平下降(P<0.01,P<0.05),而HDL-C水平升高(P<0.01,P<0.05)。与Control组比较,Model组小鼠肝组织中p-AMPKα/AMPKα、p-ACC/ACC的表达水平显著降低(P<0.01),而IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、SREBP1的表达水平显著升高(P<0.01)。与Model组比较,Orlistat组和ECD组小鼠肝组织中p-AMPKα/AMPKα、p-ACC/ACC表达水平升高(P<0.01,P<0.05),而IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、SREBP1表达水平降低(P<0.01,P<0.05)。结论:二陈汤可通过调节AMPK/ACC/SREBP1信号通路改善肥胖小鼠肝脏脂代谢紊乱。

盐爪爪根际产ACC脱氨酶菌株筛选及促生特性研究

为探究盐碱区生态环境改良方式,丰富产1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶菌种资源,从新疆克孜勒苏柯尔克孜自治州盐碱地盐爪爪(Kalidium foliatum)根际土壤中筛选产ACC脱氨酶菌株,结合16S rRNA基因测序对优良菌株鉴定,通过盆栽接种试验验证其促生效果。结果从盐爪爪根际分离到26株产ACC脱氨酶菌株,酶活性为0.4~5.6 U·mg^(-1),以PM14、PM16和PM24活性最高。经鉴定,菌株PM14、PM16和PM24分别归属肠杆菌属(Enterobacter)、赖氨酸芽孢杆菌属(Lysinibacillus)和假单胞菌属(Pseudomonas)。盆栽试验表明,接种3株菌对非盐碱胁迫下拟南芥地上(株高、地上干重)和地下(根长、根干重)部分生长均有明显促进作用;对盐碱土栽培小麦的地上部分(株高、茎粗、鲜重和干重、叶绿素含量)和根干重也有积极影响,尤以PM16最显著。PM14和PM16兼具解磷、固氮和分泌吲哚-3-乙酸(indole-3-acetic acid, IAA)的能力,PM24兼具固氮和分泌IAA的能力,均具有多种促生功能。本研究结果为盐碱区微生物菌肥的开发提供了菌种资源和理论支持。

黄芪总皂苷配伍荷叶总生物碱对高脂血症大鼠肝脏AMPK/SREBP-1c/ACC通路的影响

目的 探讨黄芪总皂苷配伍荷叶总生物碱对高脂血症大鼠的防治作用及机制。方法 将60只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药(辛伐他汀,2.1 mg·kg^(-1))组和黄芪总皂苷+荷叶总生物碱低(17+40 mg·kg^(-1))、中(34+80 mg·kg^(-1))、高(68+160 mg·kg^(-1))剂量组;采用高脂饲料喂养复制高脂血症大鼠模型,同时给予药物灌胃治疗,每日1次,连续4周。检测大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平;采用HE染色法观察肝脏组织病理形态学变化;qRT-PCR法检测肝组织中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、肉碱棕榈酰转移酶1(CPT-1)m RNA表达情况;免疫荧光法检测肝组织中p-AMPK、SREBP-1c、ACC、CPT-1蛋白表达情况;Western Blot法检测肝组织中AMPK、p-AMPK、SREBP-1c、ACC、p-ACC、CPT-1蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清TG、TC、FFA、LDL-C、AST、ALT水平显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著下降(P<0.01);大鼠肝细胞内有大量的脂滴聚集,胞浆疏松,出现了大量脂滴空泡和气球样变,细胞核偏移;大鼠肝组织AMPK、CPT-1 mRNA表达显著下调(P<0.01),ACC、SREBP-1c mRNA表达显著上调(P<0.01);大鼠肝脏中p-AMPK、CPT-1蛋白阳性表达明显减少(P<0.05,P<0.01),SREBP-1c、ACC蛋白阳性表达显著增加(P<0.01);大鼠肝组织中AMPK蛋白表达未见明显变化(P>0.05),p-AMPK、p-ACC、CPT-1蛋白表达水平明显下降(P<0.01),SREBP-1c、ACC蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠血清TG、TC、FFA、LDL-C、AST、ALT水平明显下降(P<0.05,P<0.01),HDL-C水平明显升高(P<0.01);大鼠肝细胞内的脂肪沉积均有明显减轻,仅见少量的脂滴空泡;大鼠肝组织AMPK、CPT-1mRNA的表达明显上调(P<0.05,P<0.01),SREBP-1c、ACC mRNA表达明显下调(P<0.05,P<0.01);大鼠肝脏中p-AMPK、CPT-1蛋白阳性表达明显增加(P<0.05,P<0.01),SREBP-1c、ACC蛋白阳性表达显著减少(P<0.01);大鼠肝组织中AMPK蛋白表达未见明显变化(P>0.05),p-AMPK、p-ACC、CPT-1蛋白表达水平均明显升高(P<0.05,P<0.01),SREBP-1c、ACC蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论 黄芪总皂苷配伍荷叶总生物碱可能通过调节AMPK/SREBP-1c/ACC信号通路,抑制脂肪合成,促进脂肪酸氧化分解来防治高脂血症。

基于AMPK-ACC信号通路探究miR-543对肺癌细胞放疗敏感性的机制研究

目的:放射抗性是非小细胞肺癌(Non-small cell lung carcinoma,NSCLC)放疗的一个重要障碍。据报道,miR-543在包括NSCLC在内的各种类型的癌症中是一种肿瘤促进因子。本研究旨在探索miR-543在调节NSCLC细胞放射敏感性中的潜在作用。方法:qRT-PCR检测miR-543的表达;CCK8、集落形成实验和流式细胞术等手段探究miR-543对NSCLC细胞生物学功能的影响。WB检测AMPK-ACC信号通路相关蛋白的表达。利用回复实验和辐射处理实验进一步验证miR-543通过AMPK-ACC信号通路对NSCLC细胞的恶性进展和放疗抗性的影响。结果:miR-53在NSCLC组织和细胞中均表达上调。沉默miR-53可以抑制NSCLC细胞的增殖能力,促进细胞周期阻滞和凋亡的发生,减弱放疗抗性。此外,miR-53参与调控AMPK-ACC信号通路,而使用compound C(AMPK-ACC信号通路的抑制剂)可以减弱miR-53沉默对NSCLC细胞行为及放疗敏感性的影响。结论:本研究的结果表明,miR-53可以通过调控AMPK-ACC信号通路增强NSCLC细胞的放疗抗性的机制,提示靶向miR-53可能是改善NSCLC的放射治疗敏感性的潜在治疗靶点。