黄芪对致敏大鼠气道壁转化生长因子β_1、Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白表达的影响

目的探讨黄芪在致敏大鼠气道重塑中的作用。方法Wistar雄性大鼠24只,随机分为对照组、致敏组和黄芪干预组,每组8只。采用卵蛋白腹腔注射致敏动物,2周后用1%卵蛋白雾化吸入激发。黄芪干预组在每日激发前给予黄芪注射液5g/kg腹腔注射。对照组以生理盐水代替卵蛋白雾化吸入和腹腔注射。分别采用免疫组化和原位杂交法测定大鼠气道壁Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白(FN)及上皮细胞TGF-β_1蛋白水平和TGF-β_1mRNA表达水平。结果(1)致敏组大鼠气道壁Ⅲ型胶原、FN表达分别为29．49±1．89、25．98±1．53,与对照组(16．53±1．20、9．37±1．11)比较,差异有显著性(P＜0．01)；黄芪干预组(21．24±1．38、19．57±1．36)与致敏组比较,差异有显著性(P＜0．01),但高于对照组(P＜0．01)。(2)致敏组大鼠气道上皮细胞TGF-β_1蛋白和mRNA表达分别为26．99%±2．90%、24．91%±2．88%,与对照组(12．02%±1．52%、5．45%±1．18%)比较,差异有显著性(P＜0．01)；黄芪干预组(19．89%±2．06%、12．33%±1．34%)与致敏组比较,差异有显著性(P＜0．01),但高于对照组(P＜0．01)。结论黄芪可能通过抑制哮喘气道炎症,部分下调TGF-β_1mRNA及其蛋白的表达,抑制ECM中Ⅲ型胶原、FN的过度沉积,延缓哮喘气道重塑的进程。

雷公藤多甙下调IL-1β诱导的呼吸道上皮细胞TGF-β_1的表达

目的研究雷公藤提取物(雷公藤多甙)对前炎症因子白介素-1β(IL-1β)诱导的气道上皮细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的调控,以探讨雷公藤在气道重塑中作用的分子机制。方法原代分离新西兰白兔气道上皮细胞,体外培养,随机分5组:正常对照组,IL-1β处理组(加入终浓度为10ng/ml的IL-1β),IL-1β+雷公藤共处理A、B、C组(分别加入终浓度为5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml的雷公藤溶液预处理半小时后再给予终浓度为10ng/ml的IL-1β),作用24h收集细胞爬片,采用免疫细胞化学染色方法,观察各组TGF-β1的表达。结果IL-1β处理组(0.511±0.012)TGF-β1表达较对照组(0.138±0·009)显著增强,差异有显著性(均P<0.01),IL-1β+雷公藤共处理A、B、C组(0.353±0.046,0.245±0.034,0.218±0·024)TGF-β1表达较IL-1β处理组减少,差异均有显著性(均P<0.01)。在5-20μg/ml浓度范围内,随雷公藤浓度的增加,气道上皮TGF-β1表达呈浓度依赖性减少。结论雷公藤多甙抑制由IL-1β诱导的气道上皮TGF-β1的过度表达,从而可减轻气道重塑的发生,为雷公藤防治哮喘气道重塑作用的分子机制之一。

慢性阻塞性肺疾病患者血清单核细胞趋化蛋白1、转化生长因子β_1水平及意义

目的探讨单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)发生发展中的作用及其之间的相互关系。方法COPD住院患者29例,入院时及治疗后达稳定期时分别抽取静脉血离心后用酶联免疫吸附试验法测定血清的MCP-1及TGF-β1水平,选取性别、年龄相匹配的29例健康人为正常对照。结果COPD组急性加重期与稳定期血清MCP-1水平[(30.96±13.43)pg/mL,(22.73±11.63)pg/mL]均高于正常对照组[(13.77±8.69)pg/mL,P<0.01,P<0.05],急性加重期高于稳定期(P<0.01)。COPD组急性加重期与稳定期血清TGF-β1水平[(130.93±33.29)pg/mL,(104.60±31.43)pg/mL]均高于正常对照组[(84.45±21.38)pg/mL,P<0.01,P<0.05],且急性加重期高于稳定期(P<0.01)。COPD患者血清MCP-1、TGF-β1水平与FEV1%预计值及FEV1/FVC均呈负相关。结论MCP-1及TGF-β1可能参与了COPD气道炎症和重构的发生发展,有可能成为未来干预的靶分子。

丹参注射液对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠转化生长因子β_1的影响

目的研究丹参注射液对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺气道重塑的干预作用及其作用机制。方法通过熏香烟加气管内注射内毒素方法建立大鼠COPD模型。同时设立模型组、丹参组和空白对照组,用HE染色观察肺组织病理形态学变化和胶原沉积情况,用ELISA检测试剂盒测定血清和肺组织匀浆中转化生长因子β1(TGF-β1)水平,用免疫组织化学染色法观察TGF-β1在肺组织中的表达。结果血清TGF-β1含量空白组最高,丹参组次之,模型组最低,3组之间差异无统计学意义(P均>0.05);肺组织匀浆总TGF-β1含量模型组高于空白组和丹参组,差异有统计学意义(P<0.05);丹参组含量高于空白组,但差异无统计学意义(P>0.05);肺组织中TGF-β1mRNA表达模型组最强,与空白组、丹参组比较差异有统计学意义(P<0.05);丹参组与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论TGF-β1参与了COPD气道重塑的发病过程,丹参注射液可以通过下调TGF-β1干预COPD气道重塑。

白细胞介素1β对气道上皮细胞表达转化生长因子-β_1和胰岛素样生长因子-1的影响

目的研究前炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)对体外培养的气道上皮细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的调控,以探讨其在气道重塑中的作用。方法分离新西兰白兔的气道上皮细胞并体外培养,分别收集IL-1β作用后不同时间点和不同浓度的IL-1β作用后的培养上清液及贴有细胞的盖玻片;用双抗体夹心ELISA法和免疫细胞化学染色法分别测定TGF-β1和IGF-1蛋白的表达。结果①经IL-1β1ng/ml处理后不同时间点,IGF-1的表达在16h、24h、48h均高于对照组,差异有显著性(P<0.05),而这三时间点之间比较无显著性;TGF-β1的表达在8h、16h、24h、48h均高于对照组,差异有显著性(P<0.05);其中24h点TGF-β1表达水平明显高于其余各时间点(P<0.05)。②不同浓度IL-1β处理气道上皮细胞后,IGF-1和TGF-β1的表达在IL-1β0.1ng/ml组、IL-1β1ng/ml组、IL-1β10ng/ml组均高于对照组,差异有显著性(P<0.05);IL-1β10ng/ml组TGF-β1和IGF-1表达水平均明显高于其余各组(P<0.05)。结论前炎症因子IL-1β可上调气道上皮细胞TGF-β和IGF-1的表达,当过度调节后可导致气道重塑。

caveolin-1和p42/p44MAPK在哮喘大鼠气道重塑中的作用及罗红霉素对其表达的影响

目的:探讨caveolin-1、p42/p44MAPK在哮喘大鼠气道重塑中的作用及罗红霉素对其的干预作用。方法:SPF级雄性SD级大鼠32只,随机分为对照组(C组)、哮喘组(A组)、地塞米松组(D组)、罗红霉素组(R组),每组8只。以卵白蛋白致敏和激发的方法复制大鼠哮喘气道重塑模型,图像分析软件测定支气管壁厚度和支气管平滑肌层厚度,Western blot法测定支气管平滑肌层caveolin-1、p-p42/p44MAPK蛋白相对含量。结果:A组大鼠支气管管壁总面积(Wat)/支气管基底膜周径(Pbm)、支气管平滑肌面积(Wam)/Pbm大于C组(P<0.01),D组、R组大鼠Wat/Pbm、Wam/Pbm小于A组(P<0.01),大于C组(P<0.01);A组caveolin-1表达量显著低于C组(P<0.01),D、R两组表达高于A组(P<0.01),但低于C组(P<0.05);A组p-p42/p44MAPK表达量显著高于C组(P<0.01),D、R两组表达低于A组(P<0.01),但高于C组(P<0.01);caveolin-1表达与大鼠Wam/Pbm呈负相关(r=-0.893,P<0.01);p-p42/p44MAPK表达与大鼠Wam/Pbm呈正相关(r=0.918,P<0.01);caveolin-1与p-p42/p44MAPK表达呈负相关(r=-0.873,P<0.01)。结论:caveolin-1与p42/p44MAPK通路在哮喘大鼠气道重塑中可能存在一定的内在联系,罗红霉素可能部分通过对两者之间的影响而发挥其抑制哮喘气道平滑肌重塑的作用。

止喘胶囊对哮喘大鼠气道重建的TGF-β1及Smads蛋白表达的影响

目的:探讨止喘胶囊对哮喘大鼠气道重建TGF-β1及其胞内信号转导分子Smads蛋白的影响。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为5组:正常对照组、哮喘模型组、止喘胶囊组、地塞米松组和止喘胶囊+地塞米松组,每组8只。通过ip卵清蛋白及右腿im氢氧化铝凝胶致敏,并雾化吸入卯清蛋白,建立哮喘模型,在哮喘激发4 wk后检测肺组织TGF-β1蛋白及mRNA以及Smad-2、Smad-7 mRNA表达。计量资料用ANOVA程序进行分析,并用LSD进行两两比较。结果:哮喘模型组气道上皮TGF-β1以及TGF-β1 mRNA表达显著高于正常对照组(P＜0．05,P＜0．01)。哮喘模型组Smad-2 mRNA较正常对照组表达明显升高(P＜0．05),止喘胶囊组、止喘胶囊+地塞米松组和地塞米松组TGF-β1,TGF-β1 mRNA,Smad-2 mR- NA表达显著低于哮喘模型组(P＜0．01或P＜0．05),止喘胶囊组可显著上调Smad-7 mRNA表达水平,与哮喘模型组相比有显著的差异(P＜0．05)。结论:止喘胶囊可下调哮喘大鼠生长因子TGF-β1蛋白及mR- NA、Smad-2 mRNA表达,上调Smad-7 mRNA的表达,阻断TGF-β1的信号转导,从而减轻哮喘大鼠气道重建,为止喘胶囊的临床使用提供实验依据。

Caveolin-1在TGF-β1诱导人支气管上皮细胞间质化中的作用

目的:探究小窝蛋白1(caveolin-1)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人支气管上皮细胞(16HBE细胞)上皮-间充质转化(EMT)中的作用。方法:以16HBE细胞株为研究对象,免疫荧光、RT-q PCR和Western blot实验检测16HBE细胞EMT过程中caveolin-1的mRNA和蛋白表达;Western blot检测siRNA干扰caveolin-1对16HBE细胞EMT的影响。结果:Caveolin-1广泛存在于16HBE细胞膜上,TGF-β1刺激后,caveolin-1的mRNA和蛋白表达减少(P<0.05)。与TGF-β1组比较,caveolin-1 siRNA和TGF-β1共同作用促进了细胞形态的转化,抑制了E-钙黏蛋白的蛋白表达而促进了α-SMA的蛋白表达(P<0.05)。TGF-β1刺激16HBE细胞后,AKT和Smad3在30 min磷酸化水平最高,与0 min对照组比较显著增加(P<0.05);用siRNA干扰caveolin-1基因后再用TGF-β1刺激16HBE细胞30 min,下游信号蛋白分子AKT和Smad3的磷酸化水平增高,与TGF-β1组比较显著增加(P<0.05)。结论:TGF-β1能下调16HBE细胞的caveolin-1表达水平;caveolin-1可能参与了TGF-β1诱导的16HBE细胞EMT过程中TGF-β1/Smad通路和PI3K-AKT通路的活化。

Caveolin-1和p42/p44MAPK在哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的观察哮喘大鼠肺组织中Caveolin-1和p-p42/p44MAPK含量的变化,探讨Caveolin-1和p42/p44MAPK在哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用。方法 2009年4月～2010年6月间选择SPF级雄性SD大鼠24只,随机分为对照组(C组)、哮喘组(A组)和地塞米松组(D组),每组8只。以卵白蛋白(OVA)致敏和激发的方法复制大鼠慢性哮喘模型。观察肺组织病理超微结构变化,以图像分析软件测定支气管壁厚度(wat/pbm)和支气管平滑肌厚度(wam/pbm),免疫组化法检测气道平滑肌Caveolin-1、p-p42/p44MAPK蛋白的表达。结果 A组大鼠wat/pbm、wam/pbm大于C组(P<0.01);D组大鼠wat/pbm、wam/pbm小于A组(P<0.01),大于C组(P<0.01);免疫组化法测定A组Caveolin-1表达量显著低于C组(P<0.01),D组表达高于A组(P<0.01),但低于C组(P<0.01);A组p-p42/p44MAPK表达量显著高于C组(P<0.01),D组表达低于A组(P<0.01),但高于C组(P<0.05);Caveolin-1表达与大鼠wam/pbm呈负相关(r=-0.894,P<0.01);p-p42/p44MAPK表达与大鼠wam/pbm呈正相关(r=0.805,P<0.01);Caveolin-1与p-p42/p44MAPK表达呈负相关(r=-0.941,P<0.01)。结论 Caveolin-1与p42/p44MAPK对哮喘大鼠气道重塑有一定影响,其相互作用对哮喘大鼠的气道平滑肌细胞增殖有调节作用。

促血管生成素-1及其受体Tie-2在哮喘大鼠气道中的表达

目的通过建立哮喘大鼠模型,观察气道结构改变,探讨促血管生成素-1(Ang-1)及其受体(Tie-2)在哮喘大鼠气道中的表达和意义以及地塞米松对其的影响。方法Sprague-Dawley大鼠45只,随机分为对照组,模型组和地塞米松干预组。采用腹腔注射10%卵清蛋白致敏和1%卵清蛋白雾化吸入激发复制哮喘模型,干预组每次激发前给予地塞米松。采用免疫组化检测Ang-1及其受体Tie-2在不同组间气道壁表达变化;采用计算机病理图像分析系统分析各组气道壁厚度。结果①模型组气道壁厚度较对照组明显增加(33.9333±8.3791μm2/μmvs21.1333±2.7740μm2/μm,P<0.01),干预组为(27.4000±4.6105μm2/μm)较对照组增加(P<0.01),但较模型组明显减轻(P<0.01)。②模型组气道壁Ang-1及其受体Tie-2在气道上皮表达较对照组明显增加(103.9487±8.2914vs76.0320±3.7728,99.2307±8.1913vs75.3153±3.7321,P<0.01),干预组为(90.6180±5.2339,86.6633±3.7321)较对照组增加(P<0.01),但较模型组明显下降(P<0.01)。③直线相关分析显示气道壁Ang-1及其受体Tie-2的表达同气道壁厚度呈正相关,Ang-1与其受体Tie-2间也呈明显正相关,均P<0.01。结论哮喘模型大鼠气道壁中Ang-1及其受体Tie-2表达上调,并与气道壁厚度呈正相关,提示Ang-1及其受体Tie-2可能参与哮喘气道重建过程。地塞米松可下调Ang-1与其受体Tie-2在气道壁的表达,并可减轻气道结构改变。

卡介苗对支气管哮喘大鼠气道重塑及血清HIF-1α表达的影响

目的:探讨卡介苗(BCG)干预下,支气管哮喘大鼠气道重塑以及血清缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达情况。方法:将30只清洁级健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组、哮喘组和BCG治疗组,每组10只。哮喘组大鼠采用腹腔注射10%卵白蛋白(OVA)+氢氧化铝混合液致敏,再用1%OVA超声雾化吸入的方法进行激发制作支气管哮喘模型;对照组大鼠采用相同的制模方法,但在相应的时间点使用0.9%氯化钠溶液替代致敏剂,进行腹腔注射和超声雾化吸入处理。BCG治疗组大鼠制模方法与哮喘组相同,每天雾化前半小时皮内注射BCG 0.025 mg进行干预治疗。3组大鼠在末次激发24 h后收集血清标本,采用ELISA法检测HIF-1α含量,采血后处死大鼠并制作气管和肺组织病理切片,观察大鼠气道炎症及气管重塑情况。运用图像分析软件测量支气管内径周长(Pi)、支气管管壁面积(WAt)、支气管平滑肌总面积(WAm)等指标,并与Pi比较进行标化。结果:对照组大鼠肺组织中肺泡、气管、血管结构均正常;哮喘组大鼠肺泡壁明显增厚,气管腔可见黏液残留,部分可见肺泡腔内出血;BCG治疗组大鼠肺组织整体结构趋于正常。哮喘组大鼠血清中HIF-1α含量较对照组升高,经BCG干预后,大鼠血清HIF-1α降低(P<0.01)。HIF-1α和支气管壁厚度(WAt/Pi)之间的相关性呈正相关,和支气管平滑肌厚度(WAm/Pi)之间的相关性呈正相关(P<0.01)。结论:支气管哮喘大鼠经过BCG干预治疗,气道重塑减轻,可能是通过抑制HIF-1α的表达来发挥作用。

microRNA-22-3p低表达上调幼年哮喘气道重塑大鼠的NK1R表达

目的探讨幼年哮喘气道重塑大鼠的microRNA-22-3p(miR-22-3p)表达水平和神经激肽受体1(NK1R)表达水平的相关性。方法将48只Wistar大鼠分为对照组、模型组、模型+mimic组、模型+mimic-NC组、模型+inhibitor组、模型+inhibitor-NC组。对照组注射生理盐水并吸入空气;模型组应用卵白蛋白(OVA)雾化吸入法建立哮喘大鼠模型;模型+mimic组、模型+mimic-NC组、模型+inhibitor组、模型+inhibitor-NC组,在大鼠每次激发前1 h内分别尾静脉注射1 mL的mimic、mimic-NC、inhibitor、inhibitor-NC。H&E染色法观察小鼠气道重塑变化,RT-qPCR检测miR-22-3p的水平变化。荧光素酶基因报告检测方法在大鼠气道平滑肌细胞RASMCs中验证miR-22-3p靶向NK1R。使用Western blot和免疫组织化学法检测NK1R的表达水平。结果与对照组比较,模型组发生明显的气道重塑现象,且气道组织中miR-22-3p水平降低(P<0.05)。在RASMCs细胞中,NK1R的3′UTR和miR-22-3p的直接结合,导致荧光素酶活性强度降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组的NK1R的mRNA和蛋白的表达水平明显上调(P<0.01)。与模型+mimic-NC组比较,模型+mimic组miR-22-3p的水平上调,而NK1R的表达下调(均P<0.05)。与模型+inhibitor-NC组比较,模型+inhibitor组miR-22-3p的水平下调,而NK1R水平上调(均P<0.05)。结论哮喘诱发大鼠气道NK1R的表达增加,miR-22-3p直接靶向调节抑制哮喘大鼠气道重塑中NK1R的表达水平,下调miR-22-3p解除对NK1R的抑制从而上调NK1R水平。

哮喘大鼠肺组织中Cyclin D1的表达对气道重塑的影响

目的探讨哮喘大鼠肺组织中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达对气道重塑的影响。方法将20只大鼠随机分为正常组(10只)和哮喘组(10只)。哮喘组分别于1 d和8 d用卵蛋白(OVA)10 mg、氢氧化铝20 mg和生理盐水2 ml制成悬液腹腔注射致敏。15 d开始用1%OVA雾化吸入激发,每周3次,共8周。末次激发24 h后处死,取右下肺组织用10%甲醛固定、石蜡包埋和切片。用图像分析仪测定气道内周径(Pi)、外周径(Pe),并计算管壁面积(WA)、气道平滑肌面积(SMC-A)、气道平滑肌细胞数(N),且WA、SMC-A、N均用Pi进行标准化。免疫组化检测肺组织中CyclinD1的表达。正常组大鼠用生理盐水替代卵蛋白,余同哮喘组。结果哮喘组肺组织中Cyclin D1的表达、WA/Pi、SMC-A/Pi和N/Pi均高于正常组,差异均有统计学意义。CyclinD1与WA/Pi、SMC-A/Pi和N/Pi均呈正相关性。结论哮喘大鼠肺组织中cyclin D1高表达参与气道平滑肌细胞增殖,从而导致哮喘气道重塑。

宣肺解痉方治疗支气管哮喘疗效及对血清TGF-β_(1)、MMP-9、VEGF的影响

目的观察宣肺解痉方联合布地奈德福莫特罗粉吸入剂治疗支气管哮喘慢性持续期临床疗效及对血清中转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法选择2019年10月—2020年11月河北省中医院诊治的支气管哮喘慢性持续期患者64例,随机分为治疗组和对照组,每组32例。对照组给予布地奈德福莫特罗粉吸入剂(160μg/4.5μg)吸入,每次1吸,每日2次;治疗组在对照组治疗的基础上给予宣肺解痉方加减口服,每日1剂连服30 d。观察2组治疗前后临床症状体征评分、哮喘控制测试(ACT)评分、肺功能指标[第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV_(1)%)、第1秒用力呼气容积与用力肺活量比值(FEV_(1)/FVC)]、圣·乔治医院呼吸问题调查问卷(SGRQ)评分及血清中TGF-β_(1)、MMP-9、VEGF水平变化,比较2组临床疗效。结果治疗后2组ACT评分明显提高,临床症状体征评分、SGRQ评分明显降低,差异均有统计学意义(P均<0.05),且治疗组各评分改善情况均明显优于对照组(P均<0.05);治疗后2组FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC均明显提高(P均<0.05),且治疗组均明显高于对照组(P均<0.05);治疗后2组血清中TGF-β_(1)、MMP-9、VEGF水平均明显降低(P均<0.05),且治疗组均明显低于对照组(P均<0.05);治疗组总有效率为90.6%(29/32),明显高于对照组的80.0%(24/32),差异有统计学意义(P<0.05)。结论宣肺解痉方联合布地奈德福莫特罗粉吸入剂可有效缓解支气管哮喘慢性持续期患者的临床症状,改善肺功能,降低血清炎症因子水平,改善气道重塑,提高患者生活质量。

五虎汤通过调控miRNA-146a改善幼龄哮喘大鼠气道重塑

目的探讨五虎汤通过调控miRNA-146a对幼龄哮喘大鼠气道重塑的影响。方法SPF级幼龄雌性SD大鼠80只,先随机将20只作为空白组,60只作为造模组。造模组采用卵清白蛋白联合氢氧化铝五点注射法致敏以及卵清白蛋白雾化激发哮喘。两组各随机抽取10只检测气道反应性,评判造模是否成功。造模成功后,剩下的10只空白组大鼠作为正常组,50只造模组大鼠随机分为5组(模型组、五虎汤低剂量组、五虎汤中剂量组、五虎汤高剂量组、地塞米松组),每组10只。五虎汤高、中、低剂量组分别灌胃五虎汤4.428、2.214、1.107 g/kg,地塞米松组灌胃地塞米松0.075 mg/kg,正常组及模型组灌胃等容积生理盐水,1次/d,连续2周后处理大鼠。气道反应性检测大鼠气道阻力;HE、PAS及Masson染色法分别观察大鼠肺组织气道炎症细胞浸润、气道黏液储备和气道胶原沉积情况;Western blot法检测基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases-1,TIMP-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)蛋白表达水平;qPCR法检测miRNA-146a及MMP-9、TIMP-1 mRNA含量,并对miRNA-146a与MMP-9、TIMP-1 mRNA进行相关性分析。结果与空白组比较,造模组气道阻力显著升高(P<0.01),提示造模成功。与正常组比较,模型组大鼠肺组织周围炎性细胞浸润,上皮细胞化生,炎性黏液较多,气道壁增厚,气道胶原广泛沉积;肺组织α-SMA、TGF-β1、MMP-9、TIMP-1、miRNA-146a、MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA均显著升高(P<0.01)。与模型组相比,五虎汤高、中、低剂量组及地塞米松组气道阻力明显降低(P<0.01),肺组织病理情况明显缓解,且五虎汤高剂量组及地塞米松组改善更加明显;α-SMA、TGF-β1、MMP-9、TIMP-1、miRNA-146a、MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA均显著下降(P<0.01)。五虎汤中、低剂量组α-SMA、TGF-β1、miRNA-146a、MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA及五虎汤低剂量组TIMP-1显著高于地塞米松组(P<0.05、P<0.01);五虎汤高、中剂量组α-SMA、TIMP-1、miRNA-146a、MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA及五虎汤高剂量组TGF-β1低于五虎汤低剂量组(P<0.05、P<0.01);五虎汤高剂量组α-SMA、TGF-β1、miRNA-146a、TIMP-1 mRNA低于五虎汤中剂量组(P<0.05、P<0.01)。Pearson相关性分析显示,大鼠肺组织miRNA-146a与MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA均有极强正相关性(r分别为0.956、0.973,P<0.01)。结论五虎汤能够有效改善哮喘大鼠气道重塑,这可能与五虎汤抑制miRNA-146a表达,降低MMP-9、TIMP-1及其mRNA,以及减少α-SMA、TGF-β1相关。

宣肺解痉方治疗支气管哮喘的临床疗效及对血清TGF-β_(1)、MMP-9、TNF-α水平的影响

目的观察宣肺解痉方治疗支气管哮喘患者的临床疗效,及对肺功能和血清嗜酸性粒细胞(EOS)计数、免疫球蛋白E(IgE)、TGF-β_(1)、MMP-9、TNF-α表达水平的作用,探究宣肺解痉方对哮喘气道重塑的影响。方法将纳入的60例支气管哮喘患者随机分为对照组和治疗组,每组各30例;对照组予布地奈德福莫特罗粉吸入剂(160μg/4.5μg)治疗;治疗组在对照组基础上给予宣肺解痉方加减治疗;两组均持续治疗4周。观察两组临床疗效及治疗前后哮喘临床症状体征评分、ACT评分、SGRQ评分,肺功能指标FEV_(1)、FEV_(1)/FVC、PEF变异率,以及血清EOS计数、IgE、TGF-β_(1)、MMP-9、TNF-α水平。结果治疗组临床疗效显著优于对照组(P<0.05);治疗后两组ACT评分、FEV_(1)、FEV_(1)/FVC较治疗前明显升高(P<0.05),且治疗组明显高于对照组(P<0.05);治疗后两组临床症状体征评分、SGRQ评分以及PEF变异率、血清EOS计数、IgE、TGF-β_(1)、MMP-9、TNF-α水平较治疗前明显降低(P<0.05),且治疗组明显低于对照组(P<0.05)。结论宣肺解痉方联合布地奈德福莫特罗粉吸入剂可有效降低哮喘气道重塑相关炎症因子水平,改善哮喘患者肺功能,控制哮喘发作,提高临床治愈率并有效改善哮喘患者生活质量。

基于SIRT1通路茶黄素对慢性间歇低氧幼鼠气道损伤及重塑的作用机制研究

目的:探讨基于沉默信息调节因子1(SIRT1)通路茶黄素对慢性间歇低氧幼鼠气道损伤及重塑的作用机制。方法:38只SD健康幼鼠留取8只作为空气对照组,其余建造慢性间歇低氧幼鼠模型,造模4周,将造模成功幼鼠随机分为模型组、抑制剂组、茶黄素组,每组10只。造模当天,抑制剂组幼鼠腹腔注射茶黄素+SIRT1抑制剂Nicotinamide,茶黄素组幼鼠腹腔注射茶黄素,空气对照组、模型组幼鼠腹腔注射等体积生理盐水,1次/d,连续给药2周。观察大鼠一般状况;检测肺泡灌洗液中(BALF)中细胞计数;测定肺组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力;HE染色观察肺组织病理变化;ELISA法测定血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)、血管内皮生长因子(VEGF)水平;Western blotting检测肺组织中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、SIRT1、过氧化酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)蛋白表达水平。结果:与空气对照组比较,模型组幼鼠BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞计数增多,肺组织中MDA含量升高、SOD活力降低,肺组织炎症评分升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,抑制剂组、茶黄素组幼鼠BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞计数减少,肺组织中MDA含量降低、SOD活力升高,肺组织炎症评分降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与抑制剂组比较,茶黄素组幼鼠BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞计数减少,肺组织中MDA含量降低、SOD活力升高,肺组织炎症评分降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组可见大量上皮细胞脱落,气管壁增厚,大量炎症细胞浸润。与模型组比较,抑制剂组、茶黄素组气管壁增厚、上皮细胞脱落、炎症细胞浸润程度等有所减轻。与空气对照组比较,模型组幼鼠血清VEGF、MMP-9、TIMP-1含量升高,肺组织中p-AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白相对表达量降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,抑制剂组、茶黄素组幼鼠血清VEGF、MMP-9、TIMP-1含量降低,肺组织中p-AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05);与抑制剂组比较,茶黄素组血清VEGF、MMP-9、TIMP-1含量降低,肺组织中p-AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:茶黄素可抑制慢性间歇低氧幼鼠气道损伤及重塑,可能是通过上调SIRT1通路发挥作用。

基于上皮细胞-间充质转化的搜风愈喘方调控哮喘大鼠气道重塑的机制研究

目的探讨搜风愈喘方通过调控上皮细胞-间充质转化(EMT)抑制哮喘气道重塑的作用机制。方法将60只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松组及搜风愈喘方高、中、低剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组均采用卵清白蛋白(OVA)注射和雾化复制哮喘大鼠模型。各组大鼠给予相应药物灌胃21 d后处死大鼠,苏木素-伊红(HE)染色,观察肺组织病理形态学变化;透射电镜观察大鼠肺组织中上皮细胞超微结构情况;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中的转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素17(IL-17)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测肺组织匀浆中TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的mRNA表达。蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测肺组织中TGF-β1、α-SMA、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清中TGF-β1、IL-17含量明显升高(P<0.01),肺组织中TGF-β1、α-SMA和N-cadherin mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.01),E-cadherin mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.01);HE染色显示气道壁及肺泡壁增厚,视野内可见大量炎症细胞浸润,炎症评分明显升高(P<0.01);透射电镜显示肺组织中上皮细胞水肿程度严重,胞内基质局部溶解、变淡,细胞器肿胀明显。与模型对照组比较,地塞米松组和搜风愈喘方各剂量组大鼠血清中TGF-β1、IL-17含量明显降低(P<0.05,P<0.01),TGF-β1、α-SMA和N-cadherin mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),E-cadherin mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01);肺组织炎症细胞浸润减轻,支气管壁及肺泡壁增厚程度减轻,地塞米松组和搜风愈喘方高剂量组炎症评分降低(P<0.05);超微结构显示上皮细胞水肿程度明显减轻,细胞膜完整,胞内基质均匀,细胞器大多轻微肿胀。结论搜风愈喘方可降低TGF-β1水平,从而改善肺组织EMT,达到防治哮喘气道重塑的目的。

阿奇霉素对哮喘大鼠气道重塑及HIF-1a、TGF-β1表达的影响

目的探讨阿奇霉素对哮喘大鼠气道重塑及缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法将32只雄性Sprauge-Dawley大鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、阿奇霉素哮喘组(C组)、地塞米松哮喘组(D组),每组8只,采用卵清蛋白和氢氧化铝混合液腹腔致敏大鼠,2mg·ml-1卵清蛋白滴鼻激发大鼠,各组于末次激发后24小时内麻醉,留取右肺组织行苏木素-伊红染色观察大鼠肺组织病理变化;医学图像分析系统测量气道重塑参数;免疫组织化学检测肺组织HIF-1a及TGF-β1的表达情况,ELISA检测血清HIF-1a及TGF-β1的表达。结果与A组相比,B组可见黏膜上皮局部脱落,黏液栓形成,气道壁及肺组织内可见大量炎性细胞浸润,C、D组上述改变明显减轻;B组支气管壁厚度、平滑肌厚度较A组升高(P<0.05),C、D组支气管壁厚度低于B组(P<0.05);C、D组肺组织及血清HIF-1a的表达较A组升高(P<0.05),TGF-β1的表达较B组降低(P<0.05)。结论 HIF-1a及TGF-β1可能参与了哮喘气道重塑,阿奇霉素不能有效抑制HIF-1a的表达来改善哮喘大鼠气道重塑,但它可能通过抑制TGF-β1的表达来改善哮喘大鼠气道重塑。

姜辛夏颗粒对支气管哮喘大鼠肺组织基质金属蛋白酶及其抑制剂含量的影响

目的观察姜辛夏颗粒对哮喘大鼠肺组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其抑制剂-1(TIMP-1)含量的影响,探讨该方对哮喘气道重建的机制。方法将52只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组、姜辛夏颗粒组。通过皮下和腹腔注射0.2 mL抗原液及反复雾化吸入卵蛋白溶液建立哮喘气道重建动物模型。在哮喘激发2周后行肺组织HE染色观察并检测肺组织MMP-9、TIMP-1含量的变化。结果大鼠肺组织HE染色显示:模型组肺内支气管黏膜下可见大量炎细胞浸润,气道壁明显增厚,管壁周围及小血管周围有炎细胞浸润,上皮脱落,黏膜上皮增生活跃,管腔狭窄,基底膜及气道平滑肌层增厚明显,有部分肺泡壁变薄或断裂,融合成肺大泡;地塞米松组、姜辛夏颗粒组接近正常组,仅有轻度的炎症反应,与模型组相比,支气管及肺泡炎性浸润不明显,黏膜结构完整,肺泡间隔仅有部分断裂。模型组MMP-9和TIMP-1表达量明显增加,与正常组及地塞米松组和姜辛夏颗粒组比较差异有统计学意义(P<0.01);地塞米松组和姜辛夏颗粒组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论姜辛夏颗粒可明显改善哮喘大鼠的一般状况,改善肺组织病理变化,并能调节MMP-9和TIMP-1的表达,减轻气道炎症及气道重建的发生和发展,降低气道高反应性,从而发挥治疗哮喘的作用。