犬支气管败血波氏杆菌的分离鉴定和灭活疫苗初步应用

某实验比格犬养殖场部分犬出现咳喘和口鼻流血等症状,严重者死亡。为了调查发病原因并采取针对性措施,本试验采集临床发病犬的鼻腔拭子、死亡犬的肺脏和气管分泌物等,进行细菌分离培养;通过形态观察、革兰染色、16S rRNA和ptxA基因测序,对分离细菌进行鉴定,并对部分菌株进行药敏试验。选取1株致病性强的分离菌株制备支气管败血波氏杆菌蜂胶佐剂灭活疫苗,进行免疫保护试验,分别采用1.0和0.5 mL剂量免疫小鼠,免疫后21 d攻毒;对养殖场临床发病犬和同群健康犬进行紧急免疫接种,剂量为4月龄以上犬每只1.0 mL、2~4月龄犬每只0.5 mL。对临床病死犬和攻毒死亡小鼠进行组织病理学观察。结果显示,从临床发病犬的鼻腔拭子、肺脏、气管和鼻腔黏液状分泌物共分离鉴定获得30株支气管败血波氏杆菌。药敏试验结果显示,临床分离菌株对环丙沙星和米诺环素高度敏感,但临床治疗效果不明显。免疫保护试验中,1.0 mL和0.5 mL蜂胶佐剂灭活疫苗对小鼠的保护率均可达100%;紧急免疫接种后,临床发病犬逐渐恢复,同群健康犬无新发病个体,疫苗免疫效果良好。组织病理学观察发现,临床病死犬和攻毒死亡小鼠均表现典型的支气管肺炎和肺气肿病变,肝细胞呈水泡样变。结果表明,支气管败血波氏杆菌是导致该场部分犬出现呼吸道疾病的病原体,蜂胶灭活疫苗可有效防控实验用比格犬支气管败血波氏杆菌感染。

犬细小病毒细胞毒蜂胶佐剂灭活抗原对山羊的免疫效果研究

应用犬细小病毒(CPV)细胞毒,F81细胞系传代培养增殖病毒,以该细胞毒液经甲醛灭活后制备成蜂胶佐剂灭活抗原,用以免疫山羊,观察其免疫效果。结果显示,以5mL/只恒定剂量接种山羊,经4次连续免疫后CPV抗体水平整体较低,第28天测定HI效价在27(1:128),而以5mL/只递增剂量4次连续免疫山羊后,抗体水平整体较高,第28天测定,抗体HI效价在29(1:512),较恒定剂量免疫组高2个滴度水平。结果表明,采用犬细小病毒细胞毒蜂胶佐剂灭活抗原高免山羊可获得高效价的特异性抗血清。

粤北地区鸡致病性大肠杆菌蜂胶佐剂疫苗的免疫试验

从粤北地区分离到的鸡致病性大肠杆菌中选择6株优势致病性大肠杆菌菌株做为制苗菌种,制备制苗菌液,按相同比例混合灭活,加蜂胶乙醇浸液为佐剂制备多价菌苗.安全试验结果证实,该灭活菌苗对20日龄肉仔鸡安全,试验鸡无不良反应;在5～10℃保存12个月,疫苗物理性状稳定.免疫效力试验结果:疫苗保护率为100%;接种20日龄雏鸡0.5 ml/只,血凝试验检测结果为接种多价蜂胶灭活疫苗的试验鸡在免疫后第二周可检测出抗体,抗体滴度均数为3.10 log2;免疫后第四周达到最高峰,抗体滴度均数为3.60 log2;免疫后第五周抗体滴度开始下降,抗体滴度均数为2.10 log2,但抗体滴度仍高于对照组(1.25 log2).在大肠杆菌感染鸡场进行的多批区域试验结果表明,该多价灭活疫苗安全,具有良好的保护作用.

鸽新城疫(ND)蜂胶佐剂灭活疫苗免疫效果对比试验

采用鸽新城疫ND-GS 01株毒为种毒,分别研制出了尿囊液毒蜂胶佐剂灭活疫苗和四元材料(鸡胚尿囊液、羊水、尿囊膜、羊膜)混合病毒蜂胶佐剂灭活苗。对研制的两种灭活疫苗经安全性检验、急性毒性试验,免疫抗体消长水平与免疫持续期对比试验,结果表明,四元材料的疫苗与尿囊液疫苗性能一致。

兔出血症不同佐剂灭活疫苗的制备及免疫效果比较

本试验制备了3种兔出血症灭活苗,经对试验兔进行免疫对比试验,以1mL为免疫剂量,7d后检测,发现3种疫苗均可产生抗体。组织灭活苗、蜂胶佐剂苗、铝胶佐剂苗7d的抗体滴度分别为27.1、27.2、26.5;14d的抗体滴度分别为27.9、29.0、28.0;45d的抗体滴度分别为26.8、28.5、27.5;85d的抗体滴度分别为25.5、27.2、26.2;145d的抗体滴度普遍下降。在免疫攻毒试验中,第7、15、50、90d攻毒时,3种疫苗的保护率均为100%,对照组全部死亡;150d攻毒时,组织灭活苗、蜂胶佐剂苗、铝胶佐剂苗的保护率分别为25%、75%、50%。以上结果表明,3种疫苗都有很好的免疫效果,其中以蜂胶佐剂苗的抗体滴度更高,免疫保护期更长。

禽霍乱与大肠杆菌病多价蜂胶二联灭活疫苗的研究

为研制绿色环保型的禽霍乱与大肠杆菌病多价二联灭活疫苗 ,本研究以禽多杀性巴氏杆菌强毒株C4 8_1、C4 8_2和禽致病性大肠杆菌常见血清型 0 1/ 0 15 4、0 2 / 0 86、0 78、0 18、0 8/ 0 93等为制苗菌株 ,分别以改良马丁琼脂和马丁肉汤进行固体表面培养和高密度发酵培养制备抗原 ,将灭活的抗原铺以具有广谱生物学活性的天然物质_蜂胶为免疫增强剂 ,已拥有完全自主知识产权的纳米蜂胶疫苗制造工艺技术平台制备禽霍乱与大肠杆菌病多价蜂胶二联灭活疫苗。试验结果表明 ,疫苗安全可靠 ,无明显的干扰现象 ,免疫后 5～ 7d产生坚强保护力 ,对禽霍乱和鸡大肠杆菌病的近期保护率均为10 0 %。以实验动物小鼠代替本动物进行二联疫苗效检取得成功 ,本效检方法可缩短检验期限 7d ,降低检验成本 ,具有更敏感、更特异、更客观、更简便等特点。禽霍乱采用攻毒法 ,大肠杆菌采用改良微量凝集试验测定抗体效价法测定禽_大二联疫苗的免疫期与保存期。结果表明 ,该疫苗的免疫期为 6个月以上 ,- 10℃保存期为 18个月 ;4℃～ 8℃为 12个月 ;15℃～ 30℃为 6个月。田间免疫试验表明 ,疫苗安全可靠 ,现场应用已逾 2亿羽份 。

IBDV地方野毒株不同毒源二价灭活油乳苗免疫效果的比较研究

对利用IBDV地方野毒株所制备的囊毒和胚毒二价灭活油乳苗免疫效果进行了比较研究。结果表明,所制备的囊毒灭活苗免疫效果显著优于胚毒灭活苗和活疫苗,在接种后各个时期所产生的抗体效价均显著高于其它两种疫苗(P<0.01),最高AGP效价可达4.8log2;胚苗的免疫效果虽然差于囊苗,但明显优于活疫苗,当活苗免疫组鸡血清中已无可测性抗体时,胚苗组仍具有1.0log2的AGP效价。在攻毒试验中,囊苗组鸡对IBDV标准毒、两株野毒株的攻击均100%地获得了保护;胚苗组也均可获得80%的保护,这两种由地方毒株所制备的疫苗均未呈现出对不同毒株抵抗性的不同,而活苗组对不同毒株的攻击则分别只有53.3%、40%和46.7%的保护率,呈现出一定的差异性。

蜂胶佐剂鸡毒支原体灭活疫苗的研制

收获鸡毒支原体培养液,甲醛灭活后加入一定比例蜂胶并进行乳化,制备3批蜂胶佐剂灭活疫苗。3批疫苗的物理性状、无菌检验、甲醛、硫柳汞含量等均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》(2000年版)中同类疫苗的基本要求;安全检验结果表明,受试鸡群无局部和全身反应,体温及采食量正常;效力检验结果表明,在免疫30d后攻毒,3批疫苗的免疫保护率均在60%以上。上述各指标显示,蜂胶佐剂鸡毒支原体灭活疫苗达到国家相关规定,为免疫预防鸡毒支原体病提供了新的方案。

猪链球菌病C、D、E三价灭活蜂胶疫苗的研制

以C、D、E群猪链球菌强毒株经培养后灭活、浓缩、混合,用蜂胶作佐剂(10mg/头剂),制成C、D、E三价蜂胶灭活疫苗,并在实验室内进行安全性试验及免疫效果实验。结果表明,该疫苗对实验猪、小鼠及家兔均安全;小鼠免疫21天后攻毒,对C55138株的保率护分别是4/5、5/5、4/5;C55938株的保护率分别是3/5、4/5、4/5;C55914株的保护率分别是4/5、3/5、3/5,对照组均5/5死亡;猪免疫21天后以C55138株攻毒,0401试制疫苗保护率为3/4外,其余均4/4保护;对C55938株攻毒保护率三批分别为4/4、2/4、3/4。对照猪均4/4死亡,疫苗免疫保护效果良好。

禽霍乱蜂胶灭活疫苗对雏鸡免疫试验

本文报告不同剂量禽霍乱蜂胶灭活疫苗对雏鸡免疫的安全性和效果。按雏鸡的日龄分成Ⅰ组（３０～４０日龄）、Ⅱ组（４０～５０日龄）、Ⅲ组（５０～６０日龄）、Ⅳ组（６０日龄以上）共４组。结果，Ⅰ组接种０．３ｍｌ、０．４ｍｌ、０．５ｍｌ苗的鸡反应率分别为１６．７４％、１６．７６％、１７．７９％，免疫后３个月统计，死亡率分别为３．０９％、２．８５％、２．８９％。Ⅱ组接种０．３ｍｌ、０．５ｍｌ、０．７ｍｌ苗的反应率分别为１２．８２％、１３．８３％、１６．２６％，死亡率分别为４．２９％、３．２３％、３．２１％。Ⅲ组接种０．８ｍｌ、１．０ｍｌ苗的反应率分别为１１．８２％、１２．２７％，死亡率分别为３．５８％、２．９３％。第Ⅳ组接种１．０ｍｌ、１．５ｍｌ苗的反应率分别为９．５９％、１０．１１％，死亡率分别为２．６１％、２．６０％。各组对照鸡群的死亡率依次为８．７６％、８．８９％、１０．３２％、１０．１４％。免疫后３０天攻毒结果，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组的保护率分别为１００％（５／５）、８０％（４／５）、１００％（５／５）、１００％（５／５），对照组鸡全部死亡。