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Comparison of direct fecal smear microscopy,culture,and polymerase chain reaction for the detection of Blastocystis sp.in human stool samples 被引量:3
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作者 Herbert J Santos Windell L Rivera 《Asian Pacific Journal of Tropical Medicine》 SCIE CAS 2013年第10期780-784,共5页
Objective:To compare the sensitivity and specificity of direct fecal smear microscopy,culture,and polymerase chain reaction in the detection of Blastocystis sp.in human stool.Methods:Human stool samples were collected... Objective:To compare the sensitivity and specificity of direct fecal smear microscopy,culture,and polymerase chain reaction in the detection of Blastocystis sp.in human stool.Methods:Human stool samples were collected from a community in San Isidro,Rodriguez,Rizal,Philippines.These samples were subjected to direct fecal smear microscopy,culture and polymerase chain reaction to detect the presence of Blastocystis sp.Results:Of the 110 stool samples collected,28(25%)were detected positive for the presence of Blastocystis sp.by two or more tests.Culture method detected the highest number of Blastocystis-positive stool samples(n=36),followed by PCR of DNA extracted from culture(n=26),PCR of DNA extracted from stool(n=10),and direct fecal smear(n=9).Compared to culture,the sensitivity of the other detection methods were 66.7%for PCR from culture and 19.4%for both PCR from stool and direct fecal smear.Specificity of the methods was high,with PCR from culture and direct fecal smear having97.3%,while PCR from stool at 95.9%.Conclusions:In this study,in vitro culture is the best method for detecting Blastocystis sp.in human stool samples. 展开更多
关键词 BLASTOCYSTIS sp. DIRECT FECAL smear CULTURE polymerase chain reaction(PCR) Human STOOL Sensitivity specificity
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Association of HLA-DRB1, DQB1 Alleles with Chronic Urticaria 被引量:2
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作者 陈静 谭志建 +1 位作者 李家文 熊平 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2005年第3期354-356,共3页
In order to investigate the association of genotypes of HLA-DRB1 and HLA-DQB1 alleles with the genetic susceptibility of chronic urticaria (CU), genotypes of HLA-DRB1 and HLA-DQB1 genes were detected by polymerase cha... In order to investigate the association of genotypes of HLA-DRB1 and HLA-DQB1 alleles with the genetic susceptibility of chronic urticaria (CU), genotypes of HLA-DRB1 and HLA-DQB1 genes were detected by polymerase chain reactions with sequence-specific primers (PCR-SSP) in 42 patients with CU (19 men and 23 women, mean age 30.67±12.45 y old as well as 193 racially matched healthy persons in ethnic Han from Hubei provinece. Gene frequencies of HLA-DRB1*12, *0901 (RR=3.11, χ2=7.579, P=0.006; RR=2.47, χ2=5.684, P=0.017) were significantly increased in CU patients as compared with that in healthy people. Gene frequencies of HLA-DQB1*05 (RR=0.26, χ2=6.683, P=0.01) were significantly decreased in CU patients. It was suggested that CU was found strongly associated with HLA-DRB1*12, *0901 and HLA-DQB1*05, the former might be the genetic markers for susceptibility to CU, but the latter might play a resistive role. 展开更多
关键词 urticaria chronic genes MHC class polymerase chain reaction-sequence specific primer
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AS-PCR技术检测20个mtDNA SNP位点及单倍型频率 被引量:3
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作者 聂燕钗 张晨 +4 位作者 刘亚楠 黄江平 焦海涛 吴丹 周怀谷 《法医学杂志》 CAS CSCD 2014年第2期96-100,109,共6页
目的:基于等位基因特异性PCR(allele-specific PCR,AS-PCR)技术,建立一种三色荧光标记复合扩增检测线粒体DNA(mtDNA) SNP的方法。方法基于AS-PCR原理,选择20个mtDNA编码区SNP位点,分为两组,分别标记FAM和HEX荧光,每个位点设... 目的:基于等位基因特异性PCR(allele-specific PCR,AS-PCR)技术,建立一种三色荧光标记复合扩增检测线粒体DNA(mtDNA) SNP的方法。方法基于AS-PCR原理,选择20个mtDNA编码区SNP位点,分为两组,分别标记FAM和HEX荧光,每个位点设计具有长度差异的两条上游(下游)等位基因特异性引物以及一条下游(上游)通用引物。结合AS-PCR技术和毛细管电泳,检测200份无关个体血样。各位点随机选取至少3个样本进行直接测序验证,并进行单倍型频率调查。结果200份血样均得到清晰分型,各位点的检测结果与直接测序结果完全一致。10μL体系下,DNA最低检测浓度为0.2 pg,当模板量为0.5~5 pg时能得到较为理想的分型图谱。在200名无关个体中,共分出15种单倍型,单倍型多样性为0.9060。结论 AS-PCR技术是一种简单、快速且有效的mtDNA SNP分型方法,适用于法庭科学检验的需求。 展开更多
关键词 法医遗传学 多态性 单核苷酸 等位基因 聚合酶链反应 单倍型
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Identification of Shiga-like toxin Escherichia coli isolated from children with diarrhea by polymerase chain reaction
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作者 朱庆义 李连青 +1 位作者 郭兆彪 杨瑞馥 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2002年第6期815-818,147,共4页
Objective To evaluate the etiology of Shiga-like toxin-producing Escherichia coli (SLTEC) in children with diarrhea. Methods We designed and synthesized 3 pairs of primers located in the SLT1, SLT2, and eaeA genes of ... Objective To evaluate the etiology of Shiga-like toxin-producing Escherichia coli (SLTEC) in children with diarrhea. Methods We designed and synthesized 3 pairs of primers located in the SLT1, SLT2, and eaeA genes of enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC), while the virulent genes SLT1, SLT2, and eaeA from E.coli species were amplified by polymerase chain reaction (PCR). Results One strain of EHEC with SLT1, SLT2, and eaeA in 29 reference strains of diarrhea-causing E.coli (DCEC) and 10 strains of other enterobacteria detected by PCR had positive reactions, while all other DCEC and enterobacteria were negative. Of 474 strains of E. coli isolated from 1032 children with diarrhea and detected by PCR, 20 strains of SLT1 producing E. coli (4.2%) positive, and 7 strains of SLT2 producing E.coli (1.5%) positive; while of 74 strains of entero-SLTs-producing and invasive Escherichia coli (ESIEC), 15 strains of SLT1 (20.3%) and 5 strains of SLT2 (6.8%) were positive. Conclusion Shiga-like toxin E. coli has been identified as a major etiologic agent of children with diarrhea in Taiyuan, China. 展开更多
关键词 CHILD DIARRHEA Escherichia coli FECES Humans polymerase chain reaction Sensitivity and specificity Shiga Toxins
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MAS-PCR法快速诊断分析Leber’s遗传性视神经病变原发性致病突变位点
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作者 阳菊华 童绎 +3 位作者 朱益华 林宇岚 陈贻锴 林建银 《眼视光学杂志》 CAS 2006年第6期349-351,355,共4页
目的探索一种简易、快速、高效的临床基因诊断分析原发性Leber’s遗传性视神经病变(Leber’s hereditaryoptic neuropathy,LHON)位点的新方法。方法根据已知的LHON患者线粒体DNA上的3个原发性LHON致病突变位点(G11778A、T14484C和G3460... 目的探索一种简易、快速、高效的临床基因诊断分析原发性Leber’s遗传性视神经病变(Leber’s hereditaryoptic neuropathy,LHON)位点的新方法。方法根据已知的LHON患者线粒体DNA上的3个原发性LHON致病突变位点(G11778A、T14484C和G3460A),设计3条突变位点特异性聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)引物,直接以全血样为模板的等位基因特异性多重PCR(multiplex allele-specific polymerase chain reaction,MAS-PCR)分析3个原发性LHON致病突变位点。以此方法检测24例确诊的LHON患者,其中18例为线粒体DNA G11778A突变,4例为T14484C突变,2例为G3460A突变;同时,以20份正常血样标本作阴性对照。结果优化的MAS-PCR条件为94℃/3min,94℃/30s、59.8℃/30s、72℃/30s,30个循环,72℃/3min;以此方法检测了44份血样标本,其结果与预期结果一致,表明利用该方法筛查3个原发性LHON致病突变位点是可行的。同时,混和血液样本模拟实验结果显示,该方法可检测含多个原发性LHON致病突变位点的血液样本,且整个分析过程只需约2h。结论该方法直接以全血样作为PCR的模板,不需从血样中纯化DNA;单管一次性行PCR,可同时筛查3个原发性LHON致病突变位点。因此,该方法具有快速、高效、费用低、特异性好以及只需微量血液样本等优点。 展开更多
关键词 Leber's遗传性视神经病变 脱氧核糖核酸 线粒体 等位基因特异性多重PCR 基因诊断
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Relationship between autoimmune hepatitis and HLA-DR4 and DRβ allelic sequences in the third hypervariable region in Chinese 被引量:6
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作者 Xiong Ma De-Kai Qiu Shanghai Institute of Digestive Disease,Shanghai Renji Hospital,Shanghai Second Medical University,Shanghai 200001,China 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2001年第5期718-721,共4页
AIM To analyze the association of HLA-DRBl with autoimmune hepatitis (AIH) in patients from China.``METHODS In .32 patients and 45 healthy controls,polymerase chain reaction amplification with sequencespecific primers... AIM To analyze the association of HLA-DRBl with autoimmune hepatitis (AIH) in patients from China.``METHODS In .32 patients and 45 healthy controls,polymerase chain reaction amplification with sequencespecific primers (PCR-SSP) was performed to examine the association of certain alleles or polymorphic sequences of HLA-DRB1 with AIH.``RESULTS HLA-DRB1 typing by PCFLSSP showed that DR4had a significantly increased frequency among patients with AIH versus healthy control (46.9% versus 20.8%;relative risk 3.35, P=0.014). In subtypes of DR4, there was a trend of increase in the gene frequency of DRB10405 in patients with AIH versus healthy controls (21.9%vs 6.3%, P=0.04, but Pc 0.08). In addition, asignificant increase was found in the alleles frequency encoding QRRAA from the third hyperpolymorphic region of DR4 in the patients with AIH (86.7% of DR4 positive patients vs 40.0% in DR4 positive controls, P 0.016, Pc =0.028. RR 9.75).``CONCLUSION AIH in Chinese is associated with HLADR4. There is a relationship between QRRAA sequence within the third hyperpolymorphic region of the DRB allele and AIH in Chinese. 展开更多
关键词 hepatitis autoimmune/immunology HLA-DR antigen/ genetics alleles sequence analysis polymerase chain reaction
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Meta-Analysis of Polymerase Chain Reaction in the Detection of Human Leptospirosis
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作者 MA Lina MA Ya +3 位作者 LUO Bailing MA Bishu YAN Jie LIN Xu'ai 《Wuhan University Journal of Natural Sciences》 CAS CSCD 2020年第5期387-394,共8页
Leptospirosis,a major zoonotic disease widespread in the world,would infect humans and other animals by direct contacting with the soil or water contaminated by the pathogenic leptospires.This report analyzes the accu... Leptospirosis,a major zoonotic disease widespread in the world,would infect humans and other animals by direct contacting with the soil or water contaminated by the pathogenic leptospires.This report analyzes the accuracy of polymerase chain reaction(PCR)assay used in the detection of leptospira specific genes in humans.Seventeen published articles which included 2526 samples satisfied all inclusion standards and were applied to meta-analysis.Pooled sensitivity and specificity were 0.73(95%CI 0.70-0.76)and 0.94(95%CI 0.93-0.95),respectively.Heterogeneity was statistically significant among studies,but none of the sources for heterogeneity(disease stage,PCR type,targeted genes)could adequately interpret this finding.Meta-regression advised that real-time PCR(qPCR)targeted 16 s rRNA would be the best choice for early detection of cases during the acute stage of the disease and was accounted as a good screening tool in all stages of the disease. 展开更多
关键词 human leptospirosis polymerase chain reaction META-ANALYSIS sensitivity specificITY
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猪萨佩罗病毒聚合酶链式反应检测方法的建立及应用
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作者 张伟 韩寅卓 姜永厚 《浙江理工大学学报(自然科学版)》 2024年第5期718-724,共7页
猪萨佩罗病毒(Porcine sapelovirus,PSV)是引发猪腹泻的重要病毒之一。为开发一种能快速、准确检测PSV的聚合酶链式反应检测方法,针对PSV的保守区3D基因设计了一对特异性引物,优化了聚合酶链式反应退火温度,分析聚合酶链式反应检测方法... 猪萨佩罗病毒(Porcine sapelovirus,PSV)是引发猪腹泻的重要病毒之一。为开发一种能快速、准确检测PSV的聚合酶链式反应检测方法,针对PSV的保守区3D基因设计了一对特异性引物,优化了聚合酶链式反应退火温度,分析聚合酶链式反应检测方法特异性和灵敏度,并应用于猪场样品检测。结果表明:建立的聚合酶链式反应检测方法可特异性扩增出PSV目的片段,对其他非靶标猪腹泻病毒则无条带产生,检测低限为5拷贝/μL;在浙江地区采集的88个健康猪粪便样本中检测PSV阳性率为7.95%。该PSV聚合酶链式反应检测方法特异性强、灵敏度高,可应用于PSV前期诊断和防控。 展开更多
关键词 猪萨佩罗病毒 3D基因 聚合酶链式反应 特异性 灵敏度 阳性率
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广西道地药材肉桂及阴香的DNA分子鉴定研究 被引量:2
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作者 李立 吴桂凡 +3 位作者 罗轶 李丽莉 凌婕 马双成 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期191-196,203,共7页
建立一种能够准确鉴别肉桂及阴香的特异性聚合酶链式反应方法,以保障肉桂用药的安全性和有效性。通过对比分析肉桂及阴香的psbA-trnH序列差异找到特异性单核苷酸多态性位点,设计特异性引物,通过优化退火温度、循环次数,评估不同聚合酶... 建立一种能够准确鉴别肉桂及阴香的特异性聚合酶链式反应方法,以保障肉桂用药的安全性和有效性。通过对比分析肉桂及阴香的psbA-trnH序列差异找到特异性单核苷酸多态性位点,设计特异性引物,通过优化退火温度、循环次数,评估不同聚合酶种类和不同基因扩增仪等扩增条件对不同来源的肉桂及阴香进行特异性扩增,根据特异性扩增条带进行鉴别。结果表明退火温度为54℃,循环次数为35次时,肉桂经肉桂特异性引物扩增后在100~200 bp处出现特异性条带,阴香无条带;退火温度为56℃,循环次数为40次时,阴香经阴香引物扩增后在200~300 bp处出现特异性条带,肉桂无条带。该研究所建立的特异性PCR方法可以快速准确鉴别出肉桂及阴香,为控制肉桂的质量安全提供参考。 展开更多
关键词 肉桂 阴香 特异性聚合酶链式反应 特异性引物 质量安全
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马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种real-time PCR检测方法的建立与应用
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作者 吕厚姣 李欣媛 +3 位作者 白小佳 贾龙刚 耿伟涛 王艳萍 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第9期102-108,共7页
本研究建立了一种特异性实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测方法,根据模式菌株马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种ZW3的16S rDNA序列和全基因组序列设计筛选特异性引物,采用SYBR Green I荧光染料建立r... 本研究建立了一种特异性实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测方法,根据模式菌株马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种ZW3的16S rDNA序列和全基因组序列设计筛选特异性引物,采用SYBR Green I荧光染料建立real-time PCR方法,并对方法的特异性、灵敏度、重复性和混合体系等进行检测。结果表明,本研究所建立的方法特异性强、灵敏度高、重复性好,建立real-time PCR的标准曲线,其决定系数R2为0.965,具有良好的线性关系,且在马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种及混合体系中可以特异性检出。综上,本研究建立的real-time PCR法可以快速、准确地检测马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种,为马乳酒样乳杆菌的特异性定性定量检测提供了一种新的方法。 展开更多
关键词 马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种 实时聚合酶链式反应 特异性引物
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子宫内膜癌中DKK-1基因启动子低甲基化改变与其临床病理特征的关系
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作者 王淇 张晓颖 +6 位作者 姚丹 鲁容钶 贾东瑜 何源哈达 王静媛 宿瑞俊 郑健 《标记免疫分析与临床》 CAS 2024年第10期1865-1871,共7页
目的探索Dickkopf相关蛋白1(DKK-1)基因启动子区甲基化变化与子宫内膜癌临床病理特征的关系。方法采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)对52例子宫内膜癌、30例子宫内膜不典型增生患者及25例正常子宫内膜受试者进行DNA甲... 目的探索Dickkopf相关蛋白1(DKK-1)基因启动子区甲基化变化与子宫内膜癌临床病理特征的关系。方法采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)对52例子宫内膜癌、30例子宫内膜不典型增生患者及25例正常子宫内膜受试者进行DNA甲基化状态检测。免疫组织化学[链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(immunohistochemistry,streptomyces antibiotin protein-peroxidase binding,IHC S-P)]法测定雌激素受体、孕激素受体在子宫内膜癌细胞中的表达。结果检测到38例(73.08%)子宫内膜癌组织中DKK-1基因启动子区发生低甲基化改变,而子宫内膜非典型增生组织中为14例(46.67%)及正常子宫内膜组织为9例(36.00%)(χ^(2)=11.289,P=0.030)。DKK-1低甲基化阳性率在子宫内膜癌患者的不同国际妇产科联盟(FIGO)分期、病理类型和分级、雌、孕激素受体表达中差异具有统计学意义(P=0.043)。结论DKK-1基因启动子区低甲基化可能是子宫内膜癌发生中的早期且频发事件,且可能与子宫内膜癌的侵袭、迁移和不良预后密切相关。 展开更多
关键词 子宫内膜癌 DKK-1基因 低甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应 免疫组织化学
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PEAR1基因多态性与缺血性脑卒中复发易感性的关系研究
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作者 张云芳 聂晓改 +2 位作者 吉永 王祝君 彭传梅 《国际检验医学杂志》 CAS 2024年第7期776-779,784,共5页
目的分析血小板内皮聚集受体1(PEAR1)基因多态性与缺血性脑卒中复发的相关性,为防治缺血性脑卒中复发提供依据。方法选取该院神经内科门急诊和住院确诊为急性缺血性脑卒中的150例患者作为研究对象,根据是否为脑卒中复发分为初发脑卒中组... 目的分析血小板内皮聚集受体1(PEAR1)基因多态性与缺血性脑卒中复发的相关性,为防治缺血性脑卒中复发提供依据。方法选取该院神经内科门急诊和住院确诊为急性缺血性脑卒中的150例患者作为研究对象,根据是否为脑卒中复发分为初发脑卒中组(127例)和复发脑卒中组(23例)。应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)方法分析PEAR1基因rs12041331位点单核苷酸多态性,并测序验证基因型。结果初发脑卒中组和复发脑卒中组PEAR1基因rs12041331G>A位点GG、GA、AA基因型和G、A等位基因频率比较,差异有统计学意义(P<0.05);复发脑卒中组的年龄较初发脑卒中组高,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,年龄、PEAR1基因rs12041331位点AA基因型与缺血性脑卒中复发有关,是缺血性脑卒中复发的危险因素(P<0.05)。结论PEAR1基因rs12041331G>A位点多态性与缺血性脑卒中复发相关。PEAR1基因纯合突变可能是缺血性脑卒中复发的危险因素,PEAR1基因可能是缺血性脑卒中复发风险预测的候选基因。 展开更多
关键词 缺血性脑卒中 单核苷酸多态性 聚合酶链反应-限制性片断长度多态性 等位基因
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乌梢蛇配方颗粒与常见三种伪品的多重PCR鉴别研究
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作者 宋叶 罗宇琴 +6 位作者 李国卫 冼乐尧 谭斯尹 范耀耀 罗怡靖 陈向东 孙冬梅 《中国药品标准》 CAS 2024年第4期321-329,共9页
目的:建立乌梢蛇、王锦蛇、百花锦蛇、灰鼠蛇药材及水提物四重位点特异性聚合酶链反应(PCR)鉴别方法,为配方颗粒的掺伪鉴别提供依据。方法:以线粒体细胞色素C氧化酶1号(CO1)基因为靶基因,设计特异性引物,优化引物最适退火温度、循环次... 目的:建立乌梢蛇、王锦蛇、百花锦蛇、灰鼠蛇药材及水提物四重位点特异性聚合酶链反应(PCR)鉴别方法,为配方颗粒的掺伪鉴别提供依据。方法:以线粒体细胞色素C氧化酶1号(CO1)基因为靶基因,设计特异性引物,优化引物最适退火温度、循环次数、聚合酶种类,并用该方法进行混合样品的检测。结果:乌梢蛇、王锦蛇、百花锦蛇、灰鼠蛇聚合酶为Multiplex PCR 5×Master Mix,退火温度为60℃,循环次数为35次时分别扩增出133、180、247、197 bp的特异性条带,空白对照无条带。该方法能同时、准确地鉴定出混合样品的蛇源成分。结论:本方法可同时、准确、快速地鉴定乌梢蛇、王锦蛇、百花锦蛇、灰鼠蛇样品,并适合标准汤剂和配方颗粒样品鉴别。 展开更多
关键词 乌梢蛇 王锦蛇 百花锦蛇 灰鼠蛇 配方颗粒 多重位点特异性聚合酶链反应法
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中国北方汉族人群HLA-A、HLA-B、HLA-DR等位基因频率检测及其临床意义 被引量:10
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作者 宋永红 史军 +3 位作者 朱传福 聂向民 戎志全 马春红 《山东医药》 CAS 北大核心 2005年第2期4-6,共3页
目的从基因水平了解中国北方地区汉族人群人类白细胞抗原HLA-A、HLA-B、HLA-DR位点的 等位基因(以下分别简称为A等位基因、B等位基因及DR等位基因)频率,获得更完整、准确的HLA群体遗传学 数据。方法 应用聚合酶链反应一序列特异性引物(P... 目的从基因水平了解中国北方地区汉族人群人类白细胞抗原HLA-A、HLA-B、HLA-DR位点的 等位基因(以下分别简称为A等位基因、B等位基因及DR等位基因)频率,获得更完整、准确的HLA群体遗传学 数据。方法 应用聚合酶链反应一序列特异性引物(PCR-SSP)方法对2000名北方汉族健康志愿者进行A、B、DR 等位基因分型。结果鉴定了17个A等位基因,32个B等位基因,13个DRB1等位基因。最常见的基因型分别 为A*02、B*13、DRB1*15,其相应基因频率范围分别为0.2400-0.2767、0.1330-0.1432和0.1557-0.1707。结 论 本结果可作为我国HLA多态性研究的群体资料和正常参考值,对群体遗传、疾病关联研究以及寻找HLA 相合的异基因造血干细胞供者具有重要意义。 展开更多
关键词 中国北方 汉族 HLA-A HLA-B HLA-DR 等位基因 基因频率 白细胞抗原 异基因造血干细胞
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中药材鳖甲的位点特异性PCR鉴定研究 被引量:19
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作者 刘忠权 王义权 周开亚 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2001年第8期736-738,共3页
目的 本研究旨在建立一种简便、实用的鳖甲 DNA分子鉴定方法。方法 根据中华鳖和鳖甲混淆品原动物的 12 S r RNA基因片段的序列数据库 ,找出中华鳖与其它鳖科动物有明显区别的位点 ,设计 1对能特异性鉴别中华鳖的引物 ,然后利用鳖甲... 目的 本研究旨在建立一种简便、实用的鳖甲 DNA分子鉴定方法。方法 根据中华鳖和鳖甲混淆品原动物的 12 S r RNA基因片段的序列数据库 ,找出中华鳖与其它鳖科动物有明显区别的位点 ,设计 1对能特异性鉴别中华鳖的引物 ,然后利用鳖甲中残存的 DNA,通过 PCR扩增 ,即可准确鉴别鳖甲。结果 用这对引物对不同来源的10块鳖甲进行鉴定结果表明 ,其中有 3块为伪品 ,结果与 DNA序列分析鉴定一致。还测定了斑鼋和鳖甲一伪品12 S r RNA基因片段序列。结论 该引物配置药材鉴定试剂盒可在鳖甲类药材鉴定使用。 展开更多
关键词 鳖甲 位点特异性引物 鉴别 中药 DNA PCR
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等位基因特异性引物PCR技术及其应用研究 被引量:25
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作者 马厚勋 牛永红 +1 位作者 李章勇 谢正祥 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第1期15-18,共4页
目的 :研究建立等位基因特异性引物PCR技术体系 ,并将其应用于基因单核苷酸多态性研究工作。方法 :通过美国国家生物信息中心 (NCBI)的genBank获取基因序列及其相应位点的SNP信息。利用Primer5 .0软件设计引物 ,并经NCBI的Blast2 .0软... 目的 :研究建立等位基因特异性引物PCR技术体系 ,并将其应用于基因单核苷酸多态性研究工作。方法 :通过美国国家生物信息中心 (NCBI)的genBank获取基因序列及其相应位点的SNP信息。利用Primer5 .0软件设计引物 ,并经NCBI的Blast2 .0软件检验其特异性。结果 :建立了单一等位基因特异性引物PCR(SASP -PCR)与嵌套式等位基因特异性引物PCR(NASP—PCR)两种技术 ,并应用于 β2 肾上腺素受体及内皮源性一氧化氮合酶基因单核苷酸多态性的研究 ,证实该技术的稳定性和优越性。结论 :等位基因特异性引物PCR技术是一种更为简便、特异性较高、费用少的、便于推广的SNP检测方法 。 展开更多
关键词 等位基因 单核苷酸多态性 特异性引物 PCR技术 SNP SASP Β2肾上腺素受体 位点 推广 群体
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多巴胺D4受体基因启动子区多态性与慢性抽动障碍的关联研究(英文) 被引量:9
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作者 卢瑶 麻宏伟 +6 位作者 郗春艳 张莹 王雁 姚璐 高建 汪薇 周末 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 2006年第5期357-360,共4页
目的探讨多巴胺D4受体(DRD4)基因启动子区的3个功能多态性与慢性抽动障碍是否存在相关性。方法选取无亲缘关系的慢性抽动障碍患儿84例以及无亲缘关系的健康个体100例,后者作为对照组。提取静脉血白细胞基因组DNA,采用聚合酶链反应及等... 目的探讨多巴胺D4受体(DRD4)基因启动子区的3个功能多态性与慢性抽动障碍是否存在相关性。方法选取无亲缘关系的慢性抽动障碍患儿84例以及无亲缘关系的健康个体100例,后者作为对照组。提取静脉血白细胞基因组DNA,采用聚合酶链反应及等位基因特异性扩增技术检测DRD4基因启动子区-1240L/S,-616C/G和-521C/T3个功能位点的基因型。用SHEsis在线统计软件分析各位点等位基因、基因型、单倍型频率及其组间差异。结果DRD4基因-616C/G的等位基因频率及其基因型频率在慢性抽动障碍组显著高于正常对照组(χ2=8.419,P<0.01;χ2=7.860,P<0.05),DRD4基因-1240L/S,-616C/G和-521C/T组成的单倍型LCT的频率在慢性抽动障碍组显著高于正常对照组(χ2=6.371,P<0.05)。结论DRD4基因-616C/G的等位基因可能与慢性抽动障碍相关联,携带有DRD4基因-1240L/S,-616C/G和-521C/T组成的单倍型LCT的个体可能更易患慢性抽动障碍。 展开更多
关键词 慢性抽动障碍 多巴胺D4受体 聚合酶链反应 等位基因特异性扩增 单倍型
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番茄Mi-1基因的SNP分型 被引量:11
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作者 李亚玲 李景富 +3 位作者 康立功 张贺 董晓慧 许向阳 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期36-42,共7页
SNP分型是SNP分子标记辅助育种,以及分子遗传作图等研究的重要基础技术。试验利用在番茄Mi-1基因中开发出的一个A/T型SNP位点,应用等位基因聚合酶链式反应技术,成功的对438个F2群体进行了SNP分型。结果表明,这一F2群体中有72个纯合T/T... SNP分型是SNP分子标记辅助育种,以及分子遗传作图等研究的重要基础技术。试验利用在番茄Mi-1基因中开发出的一个A/T型SNP位点,应用等位基因聚合酶链式反应技术,成功的对438个F2群体进行了SNP分型。结果表明,这一F2群体中有72个纯合T/T基因型,175个杂合A/T基因型,70个纯合A/A基因型,以及121个不明原因缺失的F2单株,已得基因型经卡方测验符合1:2:1分离比例;同时,试验通过在下游引物3′末端第二、三位点引入错配碱基,以及优化PCR反应体系为Mg2+1.875 mmol.L-1,dNTP 100μmol.L-1,提高了反应的准确性,为番茄抗根结线虫辅助育种打下了基础。 展开更多
关键词 SNP 等位基因PCR(as-pcr) 碱基错配 分型 番茄
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转基因玉米59122品系的特异性检测 被引量:8
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作者 许文涛 杨蓉 +4 位作者 陆姣 张南 罗云波 何景 黄昆仑 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第4期139-142,共4页
使用反向聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了转基因玉米59122的外源基因与玉米基因组之间的两段侧翼序列,并据其左侧侧翼序列设计了具品系特异性的引物,运用半巢式PCR技术建立了59122的品系特异性二重PCR检测方法,扩增片段100bp,横跨pat终... 使用反向聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了转基因玉米59122的外源基因与玉米基因组之间的两段侧翼序列,并据其左侧侧翼序列设计了具品系特异性的引物,运用半巢式PCR技术建立了59122的品系特异性二重PCR检测方法,扩增片段100bp,横跨pat终止子与转基因玉米侧翼基因之间。以转基因玉米59122、MON863、MON810、GA21、NK603,转基因大豆Roundup Ready和转基因油菜GT73等为材料,证明本方法与其他转基因作物具有高特异性。本方法在检测59122时,确定出连接体系中线性DNA的最佳质量浓度为1ng/μL左右,检出限达到0.1%,灵敏度为38个单倍体基因组拷贝数。因此可准确、快速、高效地检测转基因玉米及其产品,或作为常规PCR定性检测后的验证方法。 展开更多
关键词 转基因作物 品系特异性检测 半巢式聚合酶链式反应 反向聚合酶链式反应 二重聚合酶链式反应
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16S rDNA序列分析法快速鉴定西藏地区传统乳制品中的乳酸菌 被引量:20
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作者 夏雪娟 陈芝兰 +2 位作者 陈宗道 阚建全 杨吉霞 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第14期245-249,共5页
对14株乳酸菌进行菌种鉴定。提取基因组DNA,采用属特异性聚合酶链式反应(PCR)、16S rDNA序列同源性分析、种特异性PCR与NEBcutter分析相结合的方法对乳酸菌进行鉴定。结果表明,14株菌中,除123-2和23-3外,其余12株菌均属于乳杆菌属;11-2... 对14株乳酸菌进行菌种鉴定。提取基因组DNA,采用属特异性聚合酶链式反应(PCR)、16S rDNA序列同源性分析、种特异性PCR与NEBcutter分析相结合的方法对乳酸菌进行鉴定。结果表明,14株菌中,除123-2和23-3外,其余12株菌均属于乳杆菌属;11-2、13-3、14-3、16-4、23-3、24-3、26-1、122-1、123-4为干酪乳杆菌或副干酪乳杆菌,17-5、20-2、28-1属于植物乳杆菌,123-2为肠膜状明串株菌,125-2为类布氏乳杆菌,除23-3外均与属特异性PCR结果相匹配;11-2、13-3、14-3、16-4、23-3、24-3、26-1、122-1、123-4均为副干酪乳杆菌。NEBcutter分析结果进一步验证了菌株划分的准确性。该方法快速可靠,且误差较小。 展开更多
关键词 乳酸菌 鉴定 属特异性聚合酶链式反应 16SrDNA 种特异性聚合酶链式反应 NEBcutter
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