解剖性肝切除术对肝癌患者的疗效及对MAGE-1、AFP mRNA水平的影响

目的探讨解剖性肝切除术对肝癌患者外周血黑色素瘤抗原-1(MAGE-1)mRNA、甲胎蛋白(AFP)mRNA的影响及临床疗效。方法回顾性选取2013年3月至2015年6月治疗的原发性肝细胞癌患者117例,根据患者最终选取的手术方式分为观察组(n=69)和对照组(n=48)。观察组采用解剖性肝切除术,对照组给予非解剖性肝切除术。观察两组手术情况,术前、术后7 d的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、胆碱酯酶(CHE),以及术前、术后28 d外周MAGE-1 mRNA和AFP mRNA变化,随访观察患者总体生存时间和无进展生存期。结果观察组手术时间和切缘有效率明显高于对照组(P<0.05);观察组术后7 d ALT和AST水平明显低于对照组(P<0.05);观察组和对照组术后7 d TBIL和CHE比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组术后28 d MAGE-1mRNA和AFP mRNA阳性率明显低于对照组(P<0.05);观察组中位总体生存时间和中位无进展生存期也明显高于对照组(P<0.05)。结论解剖性肝切除术有较好的临床效果,可改善肝功能,降低外周血MAGE-1 mRNA和AFP mRNA表达,改善患者预后。

AFP、APF-L3、GP73、AFP-mRNA联合检测在肝细胞癌诊断中的应用价值

目的探讨甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体(AFP-L3)、高尔基体蛋白(GP73)及AFP-mR-NA联合检测在HCC诊断中的价值。方法收集175例血清、其中肝细胞癌患者73例(HCC组)、肝硬化患者41例(肝硬化组)、慢乙肝患者36例(慢性肝炎组)、正常人25例(正常人组),采用酶联免疫法检测GP73,用化学发光法检测AFP,用亲和吸附离心法检测AFP-L3,采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测患者AFP-mRNA外周血的表达。结果 AFP、AFP-L3、GP73及AFP-mRNA在HCC组的含量与肝硬化组和正常组比较差异有统计学意义(P<0.01),通过ROC曲线评价,AFP、AFP-L3、GP73及AFP-mRNA的曲线下面积分别为0.691、0.859、0.816、0.762,敏感度分别为54.79%、76.71%、80.82%、53.42%,特异度分别为79.41%、95.10%、82.35%、99.02%,四者联合检测的ROC曲线下面积为0.958,联合检测的敏感度明显提高达95.8%,特异度为95.0%。结论 AFP、AFP-L3、GP73及AFP-mRNA四者联合检测可显著提高肝细胞癌诊断的灵敏度和特异度。优于AFP、AFP-L3、GP73和AFP-mRNA的单项检测。

Real time RT-PCR定量检测AFP mRNA表达水平方法的建立

目的 建立realtime逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测AFPmRNA表达水平方法。方法 提取BEL740 2细胞总RNA ,进行RT PCR扩增并纯化AFP基因片段 ,构建重组质粒 ,建立realtimeRT PCR检测AFPmRNA表达水平方法。结果 重组质粒的阳性克隆效率为 81.8% ,经酶切鉴定 ,目的基因片段已插入PMD 18T载体内 ,得到realtimeRT PCR动力学曲线。结论 成功建立了realtimeRT PCR定量检测AFPmRNA表达水平方法。

原发性肝癌患者外周血AFP mRNA的表达及其动态变化和意义

目的:探讨AFPmRNA在原发性肝癌患者外周血的表达及其动态变化和临床意义。方法:用巢式逆转录聚合酶链反应检测93例肝癌患者外周血AFPmRNA,并观察其中36例患者血AFPmRNA表达在治疗前后的动态变化。结果:血AFPmRNA阳性率为52.7%(49/93),阳性率与肝癌临床分期、门静脉癌栓、肝外转移、癌灶大小、HBV感染和肝硬化程度密切相关,并和癌组织中AFPmRNA的表达水平密切相关(P<0.05)。随访结果显示,外周血AFPmRNA呈阳性的病例发生肝内外转移率显著高于阴性病例,癌灶缓解期明显短于阴性病例(P均<0.05)。联合全身化疗和免疫治疗可显著降低肝癌患者外周血AFPmRNA的阳性率。结论:外周血AFPmRNA阳性表达是预示肝癌发生肝内外转移的重要标志。联合全身化学免疫治疗可显著降低血AFPmRNA阳性率,对预防肝癌细胞的血行播散、降低肝内外转移率和提高患者预后可能有积极作用。

原发性肝癌患者外周血中AFPmRNA检测的临床意义

通过定量检测AFPmRNA在原发性肝癌(PHC)患者外周血中的表达,探讨AFPmRNA作为PHC患者早期诊断和微转移指标的可能性。建立荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR),检测58例外周血AFPmRNA的表达量。其中,30例PHC患者中19例AFP≥20ng/m l,23例外周血中AFPmRNA有表达;肝癌患者外周血中AFPmRNA的基因拷贝数与肝癌患者有肝内外转移有明显相关,而肝炎及健康对照组外周血中AFPmRNA均未表达,肝硬化组有一例表达。应用荧光定量PCR检测PHC外周血中AFPmRNA表达情况,可以作为早期反映PHC患者外周血中是否存在肝癌细胞和发生微转移的早期灵敏指标。

PCR辅助转录滴定系统定量检测AFP mRNA方法的建立

目的 :建立 PCR辅助转录滴定系统 (PATTY)定量检测 AFP m RNA的方法。方法 :采用 RT- PCR定点替代突变及体外转录技术合成单碱基突变 AFP m RNA内竞争模板 ,以竞争性 RT- PCR定量检测各肝癌细胞株 AFP m RNA。结果 :成功制备引入 Hind 酶切位点的单碱基突变 AFP m RNA内竞争模板 ,建立 PATTY定量检测 AFP m RNA的方法 ;检测 1μgHep G2 和 Huh7两株肝癌细胞总 RNA中 AFP m RNA含量皆为 10 1 0 copy/ μg,PL C/ PRF/ 5细胞株为 10 7copy/ μg。 结论 :PATTY检测 AFP m RNA能同步监控待检靶 m RNA逆转录过程 ,扩增效率不受 PCR诸因素干扰 ,检测结果可靠 ,适合微量循环肝癌细胞相关 AFP m RNA的定量检测研究。

肝癌肝动脉化疗栓塞术后外周血AFP mRNA变化及意义

通过对肝癌肝动脉化疗栓塞术 (TAE)治疗前后外周血AFPmRNA定量检测 ,探讨治疗前后外周血AFPmRNA定量变化规律 ,并分析其临床意义。采用分子生物学反转录竞争PCR技术 ,定量检测了 15例原发性肝细胞癌患者TAE治疗前及术后第 1、2、3、4、5、6、7、14、2 8日外周血AFPmRNA水平。结果显示TAE前后外周血AFPmRNA有不同程度的变化 ,其中术后第 3日呈最高水平 ,1周后基本恢复至术前水平 ,与术前比较 ,术后 4周 1例升高 ,8例基本相同 ,6例下降。提示TAE治疗后第 3日外周血AFPmRNA水平最高 ,临床可给予积极治疗 ,预防肝外转移的发生。

外周血中AFPmRNA检测对原发性肝癌高危人群监测的意义

目的 :探讨外周血中AFPmRNA检测对原发性肝癌 (以下简称肝癌 )高危人群监测的价值。材料和方法 :采取AFP升高 2次以上的慢性肝病患者 6 3例、12例肝癌、2 1例肝癌术后患者静脉血 5ml,用RT -PCR进行AFPmRNA检测。结果 :AFP定量与AFPmRNA阳性率无显著关系 (P >0 .0 5 ) ,AFP进行升高组、持续升高组和波动组间AFPmRNA阳性率无显著关系(6 4.71%、40 %、40 .5 8% ,P >0 .0 5 ) ,AFP进行升高组、持续升高组发癌率为 5 8.82 % (10 / 17) ,30 % (3/ 10 )显著高于AFP波动组 4.35 % (3/ 6 9,P <0 .0 1)。AFPmRNA阳性检出肝癌 41.6 7% (5 / 12 ) ,高危结节 6 0 % (6 / 10 )、肝癌术后复发 10 0 % (4/ 4)。AFP大于 2 0 0 μg/L能检出 5 8.82 % (10 / 17)肝癌和 2 5 % (1/ 4)的术后复发灶 ,AFP大于 2 0 0 μg/L、AFPmRNA阳性结合影像检测能检出 91.6 7% (11/ 12 )的肝癌和 10 0 % (4/ 4)的术后复发灶。结论AFP进行和持续升高是肝癌发生的高危人群 ,AFPmR NA阳性也是肝癌发生的高危人群 ,AFPmRNA能检测部分AFP阴性的肝癌患者 ,因此 ,AFP。

甲胎蛋白mRNA检测方法

本文设计了两对特异性引物，用聚合酶链反应法（PCR）检测肝细胞癌病人静脉血中微量癌细胞的甲胎蛋白mRNA，PCR反应后出现与已知序列相符的101bp条带，并用Pstl限制性内切酶消化确认其特异性。该方法灵敏度达0．01fg重组DNA，在5ml静脉血中有1～10个癌细胞即可检出，且重复性好，可用于判断肝癌的早期转移。

外周血血浆中甲胎蛋白、丙酮酸激酶M2和白蛋白mRNA检测在乙型肝炎肝硬化患者早期诊断中的价值

目的:探究外周血血浆中甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)、丙酮酸激酶M2(pyruvate kinase M2,PKM2)和白蛋白(albumin,ALB)mRNA检测在乙型肝炎肝硬化患者诊断及预后中的价值分析.方法:选择2011-01/2013-12瑞安市人民医院收治的乙型肝炎肝硬化患者共102例作为观察组,并选取102例体检的健康人群作为对照组,所有受试者采用实时定量PCR方法,对AFP、P K M2和A L B基因的检出率、表达差异和mRNA与临床相关性进行分析.结果:计算AFP mRNA、PKM2 mRNA和ALB mRNA的2-??Ct,同时对AFP、PKM2及ALB的表达与临床生化指标的相关性,得到ALB mRNA和γ-谷氨酰基转移酶和血清白蛋白存在相关性.对所有患者经过联合检测后,乙型肝炎肝硬化组联合检测阳性率的最高,较为敏感,差异有统计学意义(P<0.05).结论:外周血AFP mRNA、PKM2 mRNA和ALB mRNA对乙型肝炎肝硬化患者的早期诊断具有一定的诊断价值,值得临床参考.

化学免疫治疗对肝癌患者血液甲胎蛋白mRNA表达的影响

目的:探讨肝动脉化疗栓塞(transcatheterarterialchemoembolizationTACE)联合静脉滴注化学免疫治疗(chemoimmunotherapyCI)对原发性肝癌患者外周血甲胎蛋白(AFP)mRNA表达的影响及其临床意义。方法:应用巢式逆转录聚合酶链反应(nestedRTPCR)检测36例肝癌患者血液AFPmRNA表达在TACE+CI前后的变化,并与单纯接受TACE的35例患者比较。结果:在治疗后1周和4周,TACE组血AFPmRNA阳性率分别为54.3%和57.1%,与治疗前的51.4%(18/35)比较,差异无显著性(P均>0.05);而TACE+CI组血AFPmRNA阳性率各为22.2%和33.3%,分别显著低于治疗前(58.3%,21/36)和TACE组(P<0.01和P<0.05)。经过6～12个月随访,TACE+CI组平均缓解期为5.8±2.8月,有6例出现门脉癌栓或肝外转移(16.7%),而TACE组为3.7±2.6月和13例(37.1%),差异均有显著性(P<0.001和P<0.05)。结论:应用RTPCR技术检测原发性肝癌患者外周血AFPmRNA的动态变化对判断TACE等方法治疗肝癌的疗效有重要参考价值。联合静脉化学免疫治疗能显著降低肝癌患者外周血AFPmRNA的阳性率,可能对防止肝癌细胞的血行播散有积极意义。

甲胎蛋白mRNA在肝癌组织中的表达及其意义

目的 :探讨甲胎蛋白 (AFP) m RNA在肝癌组织中的表达及其临床意义。方法 :用巢式逆转录聚合酶链反应 (nestedRT- PCR)检测 19例肝细胞癌患者癌组织 AFP m RNA。结果 :16例 (88.9% )患者癌组织 AFP m RNA呈阳性表达 ,其外周血 AFP m RNA亦为阳性 ;而阴性表达的 3例其外周血 AFP m RNA和血清 AFP亦为阴性。癌组织 AFP m RNA阳性率在血清 HBs Ag阳性组 (93.8% )、合并肝硬化组 (10 0 % )和血清 AFP≥ 2 5 μg/ L 组 (10 0 % )高于 HBs Ag阴性组 (33.3% )、无合并肝硬化组 (5 7.1% )和 AFP<2 5 μg/ L 组 (5 7.1% ) (P <0 .0 5 )。相关分析显示外周血 AFP m RNA阳性率和血清 AFP水平均与癌组织 AFP m RNA阳性表达呈正相关 (r =0 .6 413,P <0 .0 5 ;r=0 .6 0 2 4,P <0 .0 5 )。癌组织 AFP m RNA阳性表达和血清 HBs Ag阳性表达及合并有肝硬化呈正相关 (r =0 .6 5 0 3,P <0 .0 5 ;r =0 .5 90 8,P <0 .0 5 ) ,而与有无门静脉癌栓或肝外转移及癌灶大小无相关性 (P >0 .0 5 )。结论 :大多数肝细胞癌的 AFP基因处于活化状态。外周血 AFP m RNA阳性表达和血清 AFP水平均与癌组织 AFP m

原发性肝细胞癌患者外周血AFP mRNA的表达及其临床意义

采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测78例原发性肝细胞癌(HCC)患者及109例其它疾病组患者外周血AFP mRNA的表达,同时用微粒子酶免疫法检测血清AFP水平。HCC外周血AFP mRNA的阳性率为61.5%,其它疾病组阳性率为1.8%,对照组均为阴性。HCC患者外周血中,AFP mRNA的阳性率与肝内静脉癌栓形成、肝内外转移以及与肿瘤分期、大小有关。作为肿瘤微转移检测的灵敏指标,外周血AFP mRNA能更好反映肿瘤的早期转移。

Detection of circulating hepatocellular carcinoma cells in peripheral venous blood by reverse transcription-polymerase chain reaction

Objective: To detect circulating hepatocellular carcino-ma by demonstrating hepatocellular carcinoma cells orhepatocyte-associated mRNA in the nuclear cell com-ponent of peripheral blood (PBL).Methods: Peripheral blood (5 ml) samples were ob-tained from 93 patients with hepatocellular carcinoma(HCC) and from 33 control subjects (9 with liver cir-rhosis after hepatitis B,14 with chronic hepatitis B,10with normal liver function). To identify HCC cells inperipheral blood, liver-specific human alpha-fetopro-tein (AFP) mRNA was amplified from total RNA ex-tracted from whole blood by reverse transcription-polymerase chain reaction.Results: AFPmRNA was detected in 50 blood samplesfrom the HCC patients (50/93, 53.8%). In contrast,there were no clinical control patients whose samplesshowed detectable AFPmRNA in PBL. The presence ofAFPmRNA in blood seemed to be correlated with thestage (by TNM classification) of HCC, the serum AFPvalue, and the presence of intrahepatic metastasis,portal vein thrombosis, tumor diameter and/or distantmetastasis. In addition, AFPmRNA was detected in theblood of 21 patients with metastasis at extrahepaticorgans (100%) in contrast to 29 (40.3%)of 72 pa-tients without metastasis.Conclusion: The presence of AFPmRNA in peripheralblood may be an indicator of malignant hepatocytes,which might predict hematogenous spreading metasta-sis of tumor cells in patients with HCC.

Detection of hepatocellular carcinoma cells in the peripheral blood with reverse--transcription polymerase chain reaction

In order to detect circulating cells of hepatocellular carcinoma(HCC) in the peripheral blood with reverse transcripition polymerase chain reaction (RT-PCR ), alpha-fetoprotein (AFP ) mRNA was tested in the blood samples of 113 cases of HCC and 69 controls (including 30 cases of liver cirrhosis, 9 cases of metastatic liver cancer and 30 normal subjects). 20/43 (46. 5% ) cases of HCC and 2/30 (6. 7% ) cases of liver cirrhosis are positive and the cases of nletastatic liver cancer and normal controls were negative for human AFP(hAFP) rnRNA. The presence of hAFP mRNA in the peripheral blood seems to be correlated with intrahepatic and distant nletastasls of HCC and portal vein thrombosis. It is concluded that the presence of hAFP mRNA in the peripheral hloocl is an indicator of circulating HCC cells and can be used to diagnose the rnetastasisof HCC through henlatogenous route and RT-PCR amplification of hAFP mRNA is a sensitive and specificprocedure for detecting circulating cells of HCC.

AFP-mRNA作为血中肝癌细胞的标志缺乏特异性

目的 评价甲胎蛋白信使RNA(AFP mRNA)作为外周血中肝癌细胞的标志是否具有特异性。方法 抽取 6 4份分别来自肝癌、肝炎肝硬化、健康人的外周血标本 ,提取血中有核细胞成分的总RNA ,以AFP特异性引物进行巢式逆转录 多聚酶链式反应 (nestedRT PCR)扩增 ,检测血中有核细胞中AFP mRNA的表达情况。结果 肝癌、肝炎肝硬化、健康人 3组外周血中AFP mRNA表达率分别为 6 0 % (18/ 30 )、5 0 % (10 / 2 0 )、5 0 % (7/ 14)。表达率 3组间无显著差异。结论 AFP mRNA不是血液中肝癌细胞的特异性标志。

大鼠移植骨髓细胞向肝细胞转化的实验研究

目的 探讨体内骨髓细胞向肝细胞转化的可行性。方法 将雌性 SD大鼠随机分为3组,每组15只。①R+BMT(全身照射+骨髓移植);②2-AAF+R+BMT:③2-AAF+PH(部分肝切)+BMT。进行交叉性别骨髓细胞移植,雄性骨髓植入雌性受体,分别于第5、10、20天处死雌鼠。以雄性性别决定基因sry作为细胞标记,用原位杂交和FISH作为检测方法对骨髓细胞的肝细胞转化进行分析。结果 PCR移植效果初步分析可见,R+ BMT组11例中有10例PCR阳性;2AAF+PH+BMT组11例中有7例阳性,2AAM+R+BMT组10例中有6例阳性。sry原位杂交染色发现,第5天各组雌性受体肝索中均未见sry阳性的肝细胞。第10天R+BMT组可见1例sry阳性的细胞位于肝细胞索,FISH染色可见这一细胞白蛋白mRNA阳性。第20天各组PCR阳性各例均可在肝索中检测到sry阳性的细胞。FICH染色可见白蛋白mRNA阳性。经统计学分析第20天各组sry阳性细胞数无明显差异。结论 在R+BMT、2-AAF+PH+BMT和2-AAF+R+BMT模型中移植的骨髓细胞均可以植入肝脏,并存在于肝细胞索。植入肝索的骨髓细胞最早可见于移植后第10天,并发生转分化,表达白蛋白mRNA。不经过全身照射的2-AAF+PH+BMT组,移植的骨髓细胞也可以进入肝脏发生转分化,因此全身照射并不一定是移植骨髓细胞活化、植入和转化的必须条件。

肝细胞肝癌患者外周血中AFP-mRNA检测的临床意义

目的探讨甲胎蛋白(AFP)-mRNA在原发性肝癌(HCC)患者外周血中的表达和临床意义。方法采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测25例HCC患者外周血中AFP-mRNA的表达。结果HCC患者外周血中AFP-mRNA表达率显著高于肝炎和肝硬化病人(P<0.01);HCC患者外周血中AFP-mRNA表达与病人的肝外转移有关(P<0.05),与病人的临床分期、肿瘤直径、数目、血清中AFP水平无关(P>0.05);HCC患者术后1周外周血AFP-mRNA检出率与术前相比明显降低(P<0.05)。结论AFP-mRNA可作为血循环中有肝癌细胞或肝癌细胞的标志物,手术前后的AFP-mRNA的监测有助于预测肿瘤复发的风险,可用于指导对患者的抗肿瘤治疗。

原发性肝癌患者血清AFP、AFU、CA199联合检测的临床意义

目的探讨原发性肝癌患者血清AFP、AFU、CA199含量及意义。方法分别应用放射免疫法和生化法对46例原发性肝癌患者血清AFP、AFU、CA199含量进行检测,并与42名肝炎肝硬化患者和40名正常人进行比较。结果原发性肝癌患者血清AFP、AFU、CA199含量显著高于肝炎肝硬化组及正常人组(P<0.01)。AFP、AFU、CA199三项指标在原发性肝癌中的阳性率分别为76.09%、71.74%、80.43%,AFP+AFU、AFP+CA199、AFP+AFU+CA199联合检测的阳性率分别为89.13%、84.78%、95.65%。结论联合检测血清AFP、AFU、CA199含量可以提高对原发性肝癌的诊断阳性率。

应用荧光定量PCR检测肝细胞癌微小转移

目的:探讨甲胎蛋白(AFP)-mRNA在肝细胞癌(HCC)患者外周血中的表达和临床意义。方法:采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-PCR)方法,检测25例HCC患者外周血中AFP-mRNA的表达。结果:HCC患者外周血中AFP-mRNA表达率显著高于肝炎和肝硬化患者(P<0.01)。HCC患者外周血中AFP-mRNA表达与患者的肝外转移可能相关,与患者的临床分期、肿瘤直径、数目、血清AFP水平无明显相关(P>0.05)。结论:AFP-mRNA可作为血液循环中肝癌细胞的标志物。