益髓生血颗粒对不同发育阶段小鼠α-血红蛋白稳定蛋白表达的影响

目的:探讨益髓生血颗粒对不同发育阶段小鼠α-血红蛋白稳定蛋白(alpha-hemoglob in stabilizing pro-te in,AHSP)表达的影响。方法:分别提取正常成年小鼠骨髓、孕鼠(孕21 d)和胎鼠(孕14 d)胎肝胎脾有核细胞总RNA,采用real-time RT-PCR方法检测中药益髓生血颗粒干预后对不同发育阶段小鼠的α-珠蛋白稳定蛋白基因表达的影响。结果:中药干预后,胎鼠(孕14 d)、孕鼠(孕21 d)的AHSP基因表达无明显改变,而成年鼠骨髓AHSP基因表达明显上调。结论:益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血的可能分子机制之一,是通过促进AHSP基因的表达,减少游离α-珠蛋白的沉积,遏止其对红细胞的毒害作用,减少溶血发生而达到治疗效果。

变性高效液相色谱法在α-血红蛋白稳定蛋白基因检测中的应用

建立了采用变性高效液相色谱（DHPLC）对α-血红蛋白稳定蛋白（AHSP）基因进行基因分型和突变筛查的新方法。将AHSP基因序列分成6个片段,因第一、二、四、六个片段均含有1~2个常见单核苷酸多态性（single nu-cleotide polymorphism,SNP）位点,需单个标本分别进行检测;第三、五个片段不含有常见SNP位点,采用DHPLC结合DNA（脱氧核糖核酸）池的方法进行检测。以基因测序为金标准对所建立的AHSP基因检测方法进行方法学评价,结果显示：40个样品的DHPLC检测结果与测序结果之间完全吻合,说明所建立的检测方法能对AHSP基因6种常见SNP进行准确基因分型。应用DHPLC对365个样品的AHSP基因进行检测,发现2个罕见SNP（11 810G〉A和12 802C〉T）;同时还发现2个错义突变（AHSP D29V和AHSP V56G）,AHSP D29V突变为新突变,AH-SP V56G为罕见突变。结果表明采用DHPLC法可有效地对AHSP基因进行基因分型和突变筛查。