Amanin的制备与活性检测

为解决蘑菇中毒的检测问题,从灰花纹鹅膏菌(Amanita fuliginea)中分离鹅膏肽类毒素Amanin,寻找该毒素的活性单体物质。利用反相高效液相色谱、紫外光谱、质谱等分离检测技术,以及毒素对绿豆种子萌发、小白鼠毒理试验及LD50等毒理分析方法。对保留时间为43.207 min的成分进行了纯化,纯度达到95%以上。紫外光谱测得其最大吸收波长为285.79 nm,质谱分析得到其分子量为903.390 0 Da,经初步鉴定为Amanin毒素,其对小白鼠的肝脏毒害明显,LD50为565μg/kg。可见用高效液相色谱法分离Amanin毒素是可行的,分离得到的毒素具有很好的生物学活性。

三羟鹅膏毒肽的反相高效液相色谱分离纯化

用反相高效液相色谱法,以0.02mol醋酸铵-乙腈为流动相和梯度洗脱模式,从灰花纹鹅膏菌中分离纯化出三羟鹅膏毒肽(amanin),产品纯度达96%以上,三羟鹅膏毒肽的分子量为903.3.

复合抗氧化剂对α-鹅膏肽毒素促 V79细胞凋亡的干预研究

目的研究α-鹅膏毒素对V79细胞的促凋亡作用,了解复合抗氧化剂维生素C(VC)与维生素E(VE)对α-鹅膏毒肽促V79细胞凋亡的干预作用。方法体外培养V79细胞,除对照组外,其余各组按终浓度5μg/mLα-鹅膏毒素染毒,早期干预组同时按终浓度100μmol/L加入VC和VE;后期干预组染毒24 h后加入同浓度VC和VE。检测细胞存活率、细胞线粒体膜电位,以及细胞MDA(丙二醛)及SOD(超氧化物歧化酶)含量并比较。结果与对照组相比,各组细胞存活率均降低,其中染毒组最低。细胞线粒体膜电位检测结果中,染毒组正常细胞数最少,早期干预组数接近对照组,而后期干预组数较少;染毒组细胞凋亡率明显高于对照组,早期干预组低于染毒组和阳性对照组。两个干预组MDA含量均低于染毒组,SOD含量均高于染毒组和对照组。结论α-鹅膏肽毒素可引起V79细胞凋亡,VC和VE的抗氧化组合可干预其致细胞凋亡作用;与后期干预相比,早期干预效果更加明显。