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可诱导高拷贝的正交琥珀抑制性tRNA筛选质粒的构建
被引量:
1
1
作者
姚东宁
徐晓威
+4 位作者
于涣冰
李尤
李星
高向东
田浤
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期174-178,共5页
为筛选获得对大肠杆菌氨酰合成酶具有高度正交性的琥珀抑制tRNA,建立了一种基于可诱导高拷贝质粒的筛选系统。利用乳糖操纵子对oriL复制子进行调控,有IPTG存在时使其携带的琥珀抑制性tRNA大量转录。正交性不高的琥珀抑制性tRNA大量转录...
为筛选获得对大肠杆菌氨酰合成酶具有高度正交性的琥珀抑制tRNA,建立了一种基于可诱导高拷贝质粒的筛选系统。利用乳糖操纵子对oriL复制子进行调控,有IPTG存在时使其携带的琥珀抑制性tRNA大量转录。正交性不高的琥珀抑制性tRNA大量转录时导致宿主菌死亡,只有携带高正交性的琥珀抑制性tRNA的克隆可以存活,从而达到筛选目的。利用这一筛选质粒,构建了琥珀抑制性tRNA突变文库,并进行了筛选,获得了与大肠杆菌氨酰tRNA合成酶具有高度正交性的突变体,并利用含琥珀抑制突变的半乳糖苷酶突变体进行了验证,证实利用可诱导高拷贝的筛选质粒可筛选出高正交性的琥珀抑制性tRNA突变体。
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关键词
可诱导高拷贝质粒
琥珀抑制性
trna
遗传密码扩充技术
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职称材料
题名
可诱导高拷贝的正交琥珀抑制性tRNA筛选质粒的构建
被引量:
1
1
作者
姚东宁
徐晓威
于涣冰
李尤
李星
高向东
田浤
机构
中国药科大学生命科学与技术学院
出处
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期174-178,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.31200694)
中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(No.JKQ2011043)
国家基础科学人才培养基金资助项目(No.J0630858)~~
文摘
为筛选获得对大肠杆菌氨酰合成酶具有高度正交性的琥珀抑制tRNA,建立了一种基于可诱导高拷贝质粒的筛选系统。利用乳糖操纵子对oriL复制子进行调控,有IPTG存在时使其携带的琥珀抑制性tRNA大量转录。正交性不高的琥珀抑制性tRNA大量转录时导致宿主菌死亡,只有携带高正交性的琥珀抑制性tRNA的克隆可以存活,从而达到筛选目的。利用这一筛选质粒,构建了琥珀抑制性tRNA突变文库,并进行了筛选,获得了与大肠杆菌氨酰tRNA合成酶具有高度正交性的突变体,并利用含琥珀抑制突变的半乳糖苷酶突变体进行了验证,证实利用可诱导高拷贝的筛选质粒可筛选出高正交性的琥珀抑制性tRNA突变体。
关键词
可诱导高拷贝质粒
琥珀抑制性
trna
遗传密码扩充技术
Keywords
inducible high-copy-number plasmid
amber suppressor trna
expanding genetic code
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
可诱导高拷贝的正交琥珀抑制性tRNA筛选质粒的构建
姚东宁
徐晓威
于涣冰
李尤
李星
高向东
田浤
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
1
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职称材料
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