Pharmacological Action and Molecular Mechanism of Amentoflavone

Amentoflavone(AMF)is a natural active substance extracted from Chinese herbal medicine Selaginella tamariscina,and has good anti-inflammatory,antitumor,hypoglycemic and neuroprotective pharmacological effects.This paper reviews the pharmacological action and mechanism of AMF,in order to lay a theoretical foundation for in-depth research and drug development of AMF.

穗花杉双黄酮对人胃癌细胞株增殖、侵袭、迁移、粘附的影响及作用机制探讨

目的观察研究穗花杉双黄酮(AMF)在体外对人胃癌细胞株增殖、侵袭、迁移、粘附的影响,并探讨其作用机制。方法选择BGC-823人胃癌细胞株进行相关试验,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测AMF对BGC-823细胞增殖的影响,Transwell侵袭试验观察AMF对BGC-823细胞侵袭的影响,细胞划痕试验观察AMF对BGC-823细胞迁移的影响,细胞粘附试验观察AMF对BGC-823细胞粘附能力的影响,并采用Western bol法检测AMF对与BGC-823细胞侵袭、迁移、粘附相关的基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9及伴有Kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)表达,以及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路中PI3K、p-PI3K、Akt及p-Akt蛋白表达的影响。结果MTT试验结果显示,50、100、200、400μmol/L浓度的AMF对BGC-823细胞增殖均有抑制作用,与1‰二甲基亚砜(DMSO)组及空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),且随AMF浓度的增加抑制率逐渐升高,呈现浓度依赖性关系(P<0.05)。Transwell侵袭试验结果显示,与空白对照组相比,AMF 100、200、400μmol/L浓度组侵袭过去的细胞数目均明显低于空白对照组(P<0.05),且随AMF浓度的增加侵袭细胞数目逐渐减少(P<0.05),呈显浓度依赖关系。细胞划痕试验结果显示,与空白对照组相比,AMF 100、200、400μmol/L浓度组迁移至划痕区域内的BGC-823细胞数目均少于空白对照组(P<0.05),且随着AMF浓度增加迁移细胞数目逐渐减少(P<0.05),呈浓度依赖关系。细胞粘附试验结果显示,AMF 100、200、400μmol/L浓度组的AMF作用于BGC-823细胞20、40、60、80 min后,各浓度组在各时间点粘附于纤维粘连蛋白(FN)胶上的细胞数均低于空白对照组(P<0.05),且随着AMF浓度的增加,细胞粘附抑制率越大,随着作用时间的增加,细胞粘附抑制率亦越大,呈浓度、时间依赖关系(P<0.05)。Western bolt条带分析显示,与空白对照组比较,AMF 100、200、400μmol/L浓度组的RECK蛋白表达量均高于空白对照组(P<0.05),MMP-2及MMP-9蛋白表达量均低于空白对照组(P<0.05),且随着AMF浓度的增加RECK蛋白表达量明显增高,MMP-2及MMP-9蛋白表达量明显降低,呈浓度依赖关系(P<0.05);与空白对照组比较,AMF 100、200、400μmol/L浓度组的p-Akt及p-PI3K蛋白表达量均低于空白对照组(P<0.05),且随AMF浓度的增加表达量明显降低,呈浓度依赖关系(P<0.05)。结论AMF能抑制BGC-823人胃癌细胞株的增殖、侵袭、迁移、粘附能力,其机制可能与促进RECK蛋白表达,下调MMP-2及MMP-9蛋白表达,并抑制PI3K及Akt蛋白磷酸化从而抑制PI3K/Akt信号通路表达有关。

穗花杉双黄酮调节cGAS-STING信号通路对哮喘幼年大鼠气道炎症的影响

目的探讨穗花杉双黄酮(AF)对哮喘幼年大鼠气道炎症的影响并初步探讨其机制。方法采用腹腔注射联合雾化吸入卵白蛋白(OVA)法诱导幼年SD大鼠建立哮喘模型,将大鼠随机分为哮喘模型(M)组、地塞米松(DXMS)组、AF低(AF L)、中(AF M)、高(AF H)剂量组和正常对照(CT)组。给药结束后,无创肺功能仪检测气道反应性,通过吉姆萨(Giemsa)染色分析支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞类型并计数,使用苏木素-伊红(HE)染色评价肺组织和支气管组织病理特征,酶联免疫吸附剂实验(ELISA)检测血清炎症因子的含量,Western blot检测肺组织GMP-AMP合酶(cGAS)、干扰素基因刺激物(STING)、磷酸化-干扰素调节因子3(p-IRF3)和干扰素调节因子3(IRF3)蛋白表达。结果与CT组相比,M组幼年大鼠肺组织和支气管组织可见明显病理损伤,气道反应性、肺组织、支气管组织病理评分、BALF中炎性细胞总数及单核细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞的数量显著增加、血清炎症因子以及肺组织c GAS、STING、p-IRF3/IRF3蛋白表达显著增加(P<0.05);与M组相比,DXMS和高剂量AF治疗哮喘大鼠后肺、支气管组织病理损伤缓解,气道反应性、肺组织、支气管组织病理评分、BALF中炎性细胞总数显著降低、血清炎症因子以及肺组织c GAS、STING、p-IRF3/IRF3蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论AF可缓解哮喘幼年大鼠的气道炎症,其可能是通过抑制cGAS-STING信号通路实现的。

A BIFLAVONOID AMENTOFLAVONE FROM GARCINIA XANTHOCHYMUS FRUIT EXHIBITEDANTI-ANGIOGENIC ACTIVITIES IN ZEBRAFISH EMBRYOS

Edible fruits of Garcinia xanthochymus were traditionally used to treat diarrhoea and dysentery.Our previous work showed that some components of G.xanthochymus fruits induced apoptosis in colon cancer cells.In this study,the aril(edible pulp of the fruit)and seed of G.xanthochymus fruits were further investigated for their

阿曼托双黄酮通过JAK2-STAT3通路影响甲状腺癌SW579细胞的增殖和凋亡

目的:探讨阿曼托双黄酮(AF)对甲状腺癌SW579细胞中JAK2-STAT3通路活化及其细胞增殖和凋亡的影响。方法:用0、50、100、150、200μmol/L的AF处理SW579细胞24、48、72 h,采用CCK-8和Celigo计数、FCM、WB及qPCR法检测AF对SW579细胞的增殖、凋亡、JAK2-STAT3通路活化及其下游调控基因c-Myc、Bcl2、survivin的mRNA及蛋白表达水平的影响。结果:AF处理后,SW579细胞增殖能力显著下降(P<0.05)且呈浓度依赖性,细胞凋亡呈浓度依赖性增多(P<0.05),细胞中JAK2-STAT3通路的活化受到显著抑制(P<0.05),其下游基因c-Myc、Bcl2、survivin的mRNA及蛋白表达均明显下降(均P<0.05)。结论:AF可通过抑制SW579细胞中JAK2-STAT3通路活化及其下游基因的表达而抑制SW579细胞的增殖并促进其凋亡,有望成为治疗甲状腺癌的有效药物。

穗花杉双黄酮通过NF-κB通路在放射性肠炎中的消炎、抗纤维化和抗菌作用

目的探讨穗花杉双黄酮(Amentoflavone,AF)在放射性肠炎中的消炎、抗纤维化和抗菌作用。方法选取雄性SD大鼠45只,随机分3组:空白组、辐射组(IR组)、辐射后AF干预组(IR+AF组)。采用高能X射线照射建立急性放射性肠炎大鼠模型,IR+AF组予60 mg·kg-1·d-1AF腹腔注射,空白组和IR组予生理盐水腹腔注射,分别于不同时段留取大鼠小肠组织、血清与粪便,观察肠黏膜组织病理学,采用ELISA法检测血清炎性因子TNF-α和IL-1β水平,qPCR检测组织NF-κB表达,应用16S rRNA测序方法对粪便样本进行测序及生物统计分析。另建立TNF-α诱导IEC6细胞损伤模型,采用qPCR法检测上皮细胞间质转化相关标志物:E-cadherin和Vimentin,采用划痕实验观察AF的修复作用。结果IR组大鼠肠上皮结构及黏膜屏障均被破坏,IR+AF组未见明显的肠道结构破坏,胶原纤维增生明显减少。与空白组、IR+AF组相比,IR组的菌群α-多样性更低,β-多样性更显著,而血清TNF-α和IL-1β的分泌增加(P<0.05)。AF干预后NF-κB表达下降,炎性因子明显减少(P<0.05),且大肠杆菌志贺菌、类杆菌的丰度下降,趋势一致,而普雷沃菌、乳酸杆菌属的丰度升高。TNF-α刺激后IEC6间质化,而AF可逆转这种变形,伴E-cadherin恢复、Vimentin表达下降。划痕实验提示AF促进上皮细胞修复。结论AF可抑制NF-κB信号通路,减少TNF-α等炎性因子刺激,抑制IEC6间质化,促进肠黏膜愈合,恢复肠道菌群多样性,起到消炎、抗纤维化和抗菌的多重作用。

穗花杉双黄酮对急性心肌梗死大鼠心肌纤维化的影响

目的探讨穗花杉双黄酮对急性心肌梗死大鼠心肌纤维化的影响。方法将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、穗花杉双黄酮低、高剂量组(50、100 mg/kg),每组15只;采用左前降支冠状动脉结扎法建立心肌梗死模型,待大鼠清醒后灌胃给药,连续28 d,模型组与假手术组给予同等剂量生理盐水。应用心脏超声仪进行心功能分析;利用苏木精-伊红(HE)和Masson染色观察心肌纤维化程度;利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)和Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNT)表达水平;利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测心肌纤维化相关生物标志物基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达水平;利用Western blotting检测MMP-2、TGF-β1蛋白水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠的左室射血分数(LVEF)和左室缩短分数(LVFS)明显降低,左心室收缩末期内径(LVESD)、舒张末期内径(LVEDD)显著升高,心肌细胞少量残存、结构紊乱、纤维化程度高,血清中PⅠCP和PⅢNP表达升高,心肌组织中MMP-2、TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平均明显升高;与模型组比较,穗花杉双黄酮低、高剂量组大鼠的LVEF和LVFS升高,LVESD和LVEDD降低,心肌细胞坏死数量减少,纤维化程度减轻,血清中PⅠCP和PⅢNP表达降低,心肌组织中MMP-2、TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低。结论穗花杉双黄酮能够改善急性心肌梗死大鼠心肌纤维化,进而改善心功能,其作用可能与抑制MMP-2和TGF-β1的表达有关。

HPLC法测定卷柏类药材中双黄酮成分的含量

目的:建立测定卷柏类药材中双黄酮成分的高效液相色谱方法。方法:色谱柱:Elite-ODS(5 μm,150 mm×4.6mm);流动相:甲醇-0.050 mol·L^(-1)磷酸二氢钠溶液系统,梯度洗脱,0→6 min,甲醇52.5％→70.0％;柱温:40℃;流速:1.5 mL·min^(-1),检测波长:330 nm。结果:穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮、银杏双黄酮加样回收率分别为97.05％,98.45％,96 88％(RSD=2.1％,2.8％,2.3％,n=3)。卷柏类药材均含有穗花杉双黄酮,但含量差异较大;另2种双黄酮成分在卷柏类药材中的分布与含量同样存在差异。结论:本法快捷、灵敏、准确,可作为评价卷柏类药材的参考依据。

穗花杉双黄酮通过影响caspase-3和β-catenin表达诱导结肠癌细胞SW480凋亡

目的观察穗花杉双黄酮对人结肠癌细胞SW480增殖及凋亡相关因子caspase-3、β-catenin的影响,初步探讨其诱导结肠癌细胞凋亡的作用机制。方法 MTT细胞增殖试验检测穗花杉双黄酮对SW480细胞活力的影响,流式细胞术检测其对SW480细胞凋亡的诱导作用,Western blot法检测穗花杉双黄酮作用细胞后caspase-3、β-catenin蛋白的表达。结果穗花杉双黄酮对SW480细胞生长有抑制作用,具有剂量依赖性。150μmol/L穗花杉双黄酮明显促进其凋亡,凋亡率显著高于对照组(P<0.01)。Western bolt结果表明,穗花杉双黄酮干预可以使caspase-3表达明显增强,β-catenin表达明显减弱。结论穗花杉双黄酮可诱导人结肠癌细胞SW480凋亡,并影响凋亡相关因子caspase-3、β-catenin的表达,从而达到抗肿瘤作用。

垫状卷柏中双黄酮药理活性的研究

目的观察穗花杉双黄酮和垫状卷柏双黄酮清除自由基的作用和对溶血性磷脂酰胆碱(LPC)诱导的血管内皮细胞损伤的保护。方法检测二苯代苦味肼基自由基(DPPH)反应;培养内皮细胞,测定乳酸脱氢酶(LDH)活性与MTT比色法测定细胞活性。结果穗花杉双黄酮和垫状卷柏双黄酮能清除DPPH自由基,能显著抑制LPC所致内皮细胞LDH的泄漏,抑制LPC所致细胞活性的降低。结论穗花杉双黄酮与垫状卷柏双黄酮均能浓度依赖性地清除DPPH自由基,并能显著减轻LPC所致的ECV304细胞损伤。

HPLC法同时测定侧柏叶中杨梅苷等4种黄酮的含量

目的建立同时测定侧柏叶中杨梅苷、槲皮苷、穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮含量的方法，为侧柏叶的质量控制和开发利用提供依据。方法采用HPLC法。色谱柱为WatersODSC18柱（150mm×4．6mm,5μm），流动相为甲醇-体积分数为0．5％乙酸溶液，梯度洗脱，流速为0．8mL·min-1，检测波长为340nm，柱温为室温。结果杨梅苷、槲皮苷、穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮质量浓度分别在61．2-122．4mg·L-1（r=0．9998）、10．56—211．2mg·L-1（r=0．9998）、2．85～57．0mg·L-1（r=0．9999）和7．54—150．8mg·L-1（r=0．9998）内与峰面积呈良好的线性关系；平均加样回收率分别为97．0％（RSD=2．5％）、97．1％（RSD=2．3％）、96．8％（RSD=2．1％）和97．4％（RSD=3．4％）。结论此法操作简便、快速、灵敏、准确，样品处理简便易行，适于侧柏叶的质量控制。

HPLC法同时测定中药五灵脂中3种成分的含量

目的建立同时测定五灵脂中原儿茶酸、穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮含量的方法,为五灵脂的质量控制和开发利用提供依据。方法采用HPLC法,色谱柱：Diamonsil ODS C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相：乙腈（A）-体积分数为0.5%的冰醋酸溶液（B）,梯度洗脱程序：0-15 min：85%-65%（B）、15-35 min：65%-40%（B）、35-40 min：40%-25%（B）、40-60 min：25%-10%（B）、60-65 min：10%-0%（B）,流速：0.8 mL.min-1,检测波长：265 nm,柱温：室温。结果原儿茶酸、穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮其质量分别在0.0496-0.4960（r=0.9998）、0.1260-1.2600（r=0.9999）和0.0985-0.9850μg（r=0.9996）内与其峰面积呈良好线性关系,平均回收率分别为100.4%、99.7%和101.2%,RSD分别为2.3%、2.1%和2.0%。结论所建立的方法可用于五灵脂的质量控制。

穗花杉双黄酮在大鼠体内的药动学研究

目的建立测定大鼠血清中穗花杉双黄酮含有量的方法,并计算其药动学参数。方法血清样品甲醇液HPLC分析采用C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈-水（含0.1%三氟乙酸）,梯度洗脱;体积流量1.0m L/min;检测波长330 nm;柱温30℃;进样量20μL。大鼠灌胃给予穗花杉双黄酮（60 mg/kg）后,在不同时间点取血,测定血清中该成分的含有量,并计算其药动学参数。结果穗花杉双黄酮在0.010 04~0.803 2μg/m L范围内的线性关系良好（r^2=0.999 1）,血清中该成分在各质量浓度下的回收率均大于80%,Tmax为90 min,Cmax为（0.469±0.046）μg/m L,AUC0-t为（27.731±1.128）mg/（L·min）,AUC0-∞为（24.944±1.093）mg/（L·min）,t1/2为（57.008±2.765）min,V/F为（198.36±17.422）L/kg,CL/F为（2.408±0.103）L/（min·kg）。结论该方法准确、可靠,可用于大鼠血清中穗花杉双黄酮的测定及药动学研究。

卷柏酸性成分提取工艺及活性研究

用碱提酸沉法,以HPLC法测定穗花衫双黄酮的质量分数为指标,设计单因素和正交实验,确定了从卷柏中提取酸性成分的最佳工艺条件:ρ(NaOH)=2mg/mL水溶液为提取溶液、m(提取溶液):m(卷柏)=40:1、提取温度50℃、提取时间30min、沉降pH=3、提取1次,所得提取物中穗花衫双黄酮的质量分数稳定为10～12。该文首次报道了卷柏具有体内降血脂和体外抑制α-葡萄糖苷酶活性的功效。与模型组比较,酸性提取物能显著降低高脂血症小鼠的TC和LDL,极显著升高HDL;体外抑制α-葡萄糖苷酶活性(IC50=154.49μg/mL)高于对照阿卡波糖(IC50=1081.27μg/mL)。该文报告工作的新颖性已为河南大学图书馆2008年7月2日出具的第CX2008004号《科技查新报告》所证实。

HPLC法测定11种卷柏属药材中穗花杉双黄酮的含量

采用HPLC法测定11种卷柏属药材中穗花杉双黄酮的含量。色谱柱：Kromasil（250×4．6mm，5μm）；流动相：甲醇旬．05mol／L磷酸二氢钠溶液系统，梯度洗脱，0～28min，甲醇50％～58％，30～35min，甲醇58％～70％；柱温：400C；流速：1．0ml／min；检测波长：330nm。结果表明，穗花杉双黄酮在153～767ng范围内峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为97．03％，RSD为0．80％（n=5）。

兖州卷柏化学成分及体外抗菌活性研究

本文研究兖州卷柏Selaginella involvens Spring.的化学成分及体外抗菌活性。运用反复色谱层析进行纯化分离得到7个化合物,经波谱解析结合理化鉴定确定化合物结构为:正十六烷酸(1),正十八烷酸(2),β-谷甾醇(3),豆甾醇(4),穗花杉双黄酮(5),β-D-glucopyranoside,(3β)-cholest-5-en-3yl(6),β-香树脂醇(7)。化合物1～7均首次从该植物中分离得到,6和7首次从该属植物中分离得到。此外研究了化合物5、6和7的体外抗菌活性。化合物5、6和7可能为兖州卷柏抗肺炎病菌的主要物质基础。

云南山竹子果实的化学成分研究

目的分离和鉴定云南山竹子(Garcinia cowa)果实的化学成分。方法体积分数为95%乙醇提取,用硅胶柱色谱和凝胶柱(LH-20)色谱分析,采用IR,NMR,MS等谱学方法及化学方法确定结构。结果分得6个化合物,经光谱数据的分析,分别鉴定为β-谷甾醇(Ⅰ),cirsiumaldehyde(Ⅱ),对羟基桂皮酸(Ⅲ),穗花杉双黄酮(Ⅳ),胡萝卜苷(Ⅴ),morelloflavone(Ⅵ)。结论化合物Ⅰ～Ⅵ系首次从该种植物中分离得到。

加速溶剂萃取分离-液相色谱法测定五灵脂药材中3种成分的含量

取五灵脂药材(1.0g)与海沙3.0g混匀,置于加速溶剂萃取(ASE)仪中,加入萃取溶剂[乙醇-水(75+25)]静态萃取循环3次,每次10min,萃取温度为100℃,压力为15 MPa。萃取液蒸缩至3mL,加C2H5OH-H2O(75+25)至5.0mL,过滤后供液相色谱分析。在色谱分离中,以Diamosil ODS C18色谱柱为固定相,用(A)甲醇和(B)乙酸(0.5+99.5)溶液以不同比例的混合液作为流动相进行梯度淋洗。在波长360nm处进行检测。药材中的芦丁、山奈酚和穗花杉双黄酮的质量浓度与相应的峰面积之间呈线性关系,3种组分的检出限(3S/N)在0.3~0.6mg·kg-1之间。在3个浓度水平条件下用标准加入法进行回收试验,测得回收率在80.0%~95.0%之间,测定值的相对标准偏差(n=5)在3.2%~9.6%之间。

卷柏及垫状卷柏的HPLC指纹图谱及穗花杉双黄酮的含量测定研究

目的建立卷柏及垫状卷柏的HPLC指纹图谱分析方法并进行穗花杉双黄酮的含量测定。方法采用HPLC方法测定24批不同产地的卷柏及垫状卷柏药材,分析两者的指纹图谱特征及穗花杉双黄酮的含量。结果以穗花杉双黄酮为主的不同的7个特征峰分别共同构成卷柏及垫状卷柏的HPLC指纹图谱概貌,卷柏及垫状卷柏中穗花杉双黄酮的含量分别为1.77～3.82%和0.45～0.85%。结论卷柏及垫状卷柏的HPLC指纹图谱相似,主要成分穗花杉双黄酮的含量相差较大。

侧柏叶炮制前后成分的对比

目的建立HPLC法测定侧柏叶及其炮制品中杨梅苷、槲皮苷、杨梅素、槲皮素、山柰酚、穗花杉双黄酮及扁柏双黄酮的含量,对比侧柏叶炮制前后7种成分的含量变化。方法采用药典法进行炮制。色谱柱为Welch Ultimate LP-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.2%磷酸水梯度洗脱,检测波长为330 nm,流速1 m L/min。结果杨梅苷、槲皮苷、杨梅素、槲皮素、山柰酚、穗花杉双黄酮及扁柏双黄酮的标准曲线呈良好的线性关系（r≥0.999 5）,各组分平均回收率在97.6%~101.1%之间,RSD≤1.14%（n=6）。炮制后,杨梅苷、槲皮苷、穗花杉双黄酮及扁柏双黄酮含量降低,而杨梅素、槲皮素及山柰酚含量相对升高。结论所建立的HPLC法简便易行,可用于侧柏叶、侧柏炭的含量测定。侧柏叶炮制前后成分种类和量的改变,表明其炮制过程存在着成分转化过程。