期刊文献+
共找到130篇文章
< 1 2 7 >
每页显示 20 50 100
pAPN基因敲除的IPEC-J2介导的TGEV感染特征分析
1
作者 夏振涛 王楠 +3 位作者 王婉洁 周期律 黄雷 牟玉莲 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3395-3407,共13页
旨在探究猪氨基肽酶N(porcine aminopeptidase N,pAPN)基因敲除的猪空肠上皮细胞系(intestinal porcine epithelial cell line J2,IPEC-J2)介导猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)感染的特征,为深入了解pAP... 旨在探究猪氨基肽酶N(porcine aminopeptidase N,pAPN)基因敲除的猪空肠上皮细胞系(intestinal porcine epithelial cell line J2,IPEC-J2)介导猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)感染的特征,为深入了解pAPN基因在TGEV感染过程中的作用机制提供理论依据。研究分为pAPN基因敲除IPEC-J2组(IPEC-J2-KO组)、野生型IPEC-J2组(IPEC-J2-WT组)和未接种TGEV的野生型IPEC-J2组(Mock组)3组,每组设置3个重复。首先通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)确定IPEC-J2接种TGEV毒株后收取细胞样品的最佳时间节点;其次,对IPEC-J2-KO进行了脱靶效应检测;然后,通过qPCR、蛋白免疫印迹(western blot,WB)、间接免疫荧光分析(indirect immunofluorescence assay,IFA)和50%组织细胞感染量(50%tissue culture infective dose,TCID_(50))对接种TGEV的IPEC-J2-KO、IPEC-J2-WT及Mock进行感染特征分析;最后,通过WB检测IPEC-J2-KO、IPEC-J2-WT和Mock中NF-κB p65及其磷酸化蛋白pp65的表达情况。qPCR结果显示,接毒24 h是收集细胞样本以评估TGEV对IPEC-J2影响的最佳时间节点;脱靶分析结果显示,在IPEC-J2-KO中未检测到脱靶效应;病毒感染特征分析结果显示,与IPEC-J2-WT相比,IPEC-J2-KO内病毒拷贝数、病毒滴度均极显著降低(P<0.001),与Mock相比,IPEC-J2-KO内病毒拷贝数、病毒滴度均无显著差异(P>0.05),且IPEC-J2-KO内未检测到TGEV-N蛋白的表达;此外,与Mock相比,接种TGEV后,IPEC-J2-WT组NF-κB p65的磷酸化水平极显著上调(P<0.001),而IPEC-J2-KO组无显著差异(P>0.05)。本研究表明,IPEC-J2-KO可有效抵抗TGEV的感染,接种TGEV未影响IPEC-J2-KO中先天免疫相关信号通路中转录因子NF-κB的活性。该研究为IPEC-J2作为TGEV感染特征研究的细胞模型提供了理论依据,为阐明pAPN基因在TGEV入侵宿主细胞的机制及抗病猪新品种的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪氨基肽酶n IPEC-J2 TGEV nF-ΚB
下载PDF
Cloning and Sequencing of a Gene Encoding Aminopeptidase N in the Midgut of Helicoverpa armigera(Hubner)
2
作者 WANG Gui-rong, LIANG Ge-mei, WU Kong-ming and GUO Yu-yuan(State Key Laboratory of Plant Disease and Insect Pests , Institute of Plant Protection , Chinese Academy of Agricultural Sciences , Beijing 100094 , P.R.China) 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2003年第7期760-767,共8页
A cDNA encoding aminopeptidase N was cloned by degenerated PCR combined with RACE technique in this paper. The full-length of APN-Harm is 3 043 bp. Open reading frame is 2 856 bp in length, encoding 951 amino acid res... A cDNA encoding aminopeptidase N was cloned by degenerated PCR combined with RACE technique in this paper. The full-length of APN-Harm is 3 043 bp. Open reading frame is 2 856 bp in length, encoding 951 amino acid residues. Its predicted molecular weight and isoelectric point are 108. 3 kDa and 5.29, respectively. This deduced amino acid sequence shares some common structural features with aminopeptidase N from several moth species, including the consensus zinc-binding motif HEXXHX18E and the GAMEN motif common to gluzincin aminopeptidases. The first 20 amino acid residues at N-termini is hydrophobic transmembrane helix. The sequence of APN-Harm was deposited in GenBank and the accession number is AY181026. 展开更多
关键词 Helicoverpa armigera aminopeptidase n Gene cloning
下载PDF
抗Bt棉棉铃虫幼虫Bt受体氨肽酶N(APN2)基因克隆 被引量:8
3
作者 苏建亚 周晓梅 沈晋良 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第10期59-62,共4页
通过对Bt棉抗性和敏感棉铃虫幼虫中肠氨肽酶N的克隆和测序 ,鉴定了氨肽酶N基因家族的 1个成员Haapn2 ,其cDNA序列具有 32 0 9个核苷酸 ,含有 30 96bp的开放阅读框 ,编码产生1 0 32个氨基酸的蛋白质。其推定氨基酸序列具有锌结合模体HEXX... 通过对Bt棉抗性和敏感棉铃虫幼虫中肠氨肽酶N的克隆和测序 ,鉴定了氨肽酶N基因家族的 1个成员Haapn2 ,其cDNA序列具有 32 0 9个核苷酸 ,含有 30 96bp的开放阅读框 ,编码产生1 0 32个氨基酸的蛋白质。其推定氨基酸序列具有锌结合模体HEXXHX18E ,N 末端具有 1 7个氨基酸的疏水性信号序列 ,C 末端还具有 2 2个氨基酸的糖基磷酯酰肌醇 (GPI)添加信号肽。比对抗性和敏感棉铃虫cDNA的开放阅读框 ,抗性品系的开放阅读框中 ,有 5 7个点突变 ,共导致了 1 5个氨基酸的改变 ,其中 2个突变 (谷氨酰胺13 7→谷氨酸、缬氨酸173 →苏氨酸 )位于Cry1A毒素结合区域 ,可能与棉铃虫对转Bt基因棉产生抗性有关。报道的氨肽酶cDNA序列已提交GenBank ,AY346383和AY2 795 35分别是Bt抗性和敏感品系的Haapn2。 展开更多
关键词 抗B 开放阅读框 氨肽酶n 氨基酸 受体 A毒素 apn 棉铃虫 BT棉 幼虫
下载PDF
猪传染性胃肠炎病毒特异性受体APN功能区的初步鉴定 被引量:12
4
作者 刘博奇 李广兴 +5 位作者 王衡 尹杰超 李一经 王君伟 张赟硕 任晓峰 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第6期21-23,共3页
试验为了构建猪氨肽酶N(pAPN)不同基因片段大小的重组质粒并进行原核表达及纯化,经Western—blot、ELISA方法初步鉴定猪氨肽酶N受体功能区。试验构建重组了质粒pET30a—pAPN1(106~669nt)、pET30a—pAPN2(670-1044 nt)、pET30a—... 试验为了构建猪氨肽酶N(pAPN)不同基因片段大小的重组质粒并进行原核表达及纯化,经Western—blot、ELISA方法初步鉴定猪氨肽酶N受体功能区。试验构建重组了质粒pET30a—pAPN1(106~669nt)、pET30a—pAPN2(670-1044 nt)、pET30a—pAPN3(1045-1773nt)、pET30a—pAPN4(1774~2328 nt)、pET30a—pAPN5(2329—2889 nt)、pET30a—pAPN6(106—1044nt)、pET30a—pAPN7(1774—2889 nt);转化宿主菌BL21(DE3)细胞,IPTG诱导表达蛋白,包涵体经SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳回收纯化;用Western—blot、ELISA方法经抗pAPN多克隆抗体初步筛选出pAPN受体功能区。结果表明:pET30a—pAPN2、pET30a—pAPN3、pET30a—pAPN6、pET30a—pAPN7蛋白均以包涵体形式表达并纯化。pET30a—pAPN3、pET30a-6、pET30a-7能与抗pAPN多抗产生特异性反应。经抗pAPN多抗筛选初步鉴定出其主要抗原功能区在36—153aa、349—591aa、592~963aa内。 展开更多
关键词 猪氨肽酶n 蛋白表达 受体
下载PDF
小菜蛾中肠氨肽酶基因PxAPN5的克隆、原核表达及蛋白质同源建模分析 被引量:2
5
作者 许炼 高焕娟 +3 位作者 潘志针 朱育菁 陈清西 刘波 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1272-1280,共9页
【目的】克隆和表达小菜蛾Plutella xylostella氨肽酶基因,并进行基因序列分析和同源建模分析。【方法】以小菜蛾中肠c DNA为模板克隆分析氨肽酶基因序列,原核表达氨肽酶蛋白并进行酶活性测定,应用配体印迹分析氨肽酶与Cry2Ab蛋白的结合... 【目的】克隆和表达小菜蛾Plutella xylostella氨肽酶基因,并进行基因序列分析和同源建模分析。【方法】以小菜蛾中肠c DNA为模板克隆分析氨肽酶基因序列,原核表达氨肽酶蛋白并进行酶活性测定,应用配体印迹分析氨肽酶与Cry2Ab蛋白的结合,通过蛋白质建模对突变位点进行分析。【结果】从小菜蛾中肠c DNA扩增出氨肽酶基因,该基因全长2 853 bp,编码950个氨基酸,预测蛋白分子量为107.3871 k Da,等电点为5.24;进化树分析显示,克隆得到的氨肽酶基因属于APN家族5,将其命名为Px APN5(Gen Bank登录号:KM034756)。Px APN5蛋白具有鳞翅目昆虫氨肽酶蛋白的保守性特征,即含有N-糖基化位点、O-糖基化位点和GPI锚定位点,具有"HEXXH"锌蛋白酶结构域和C端跨膜区域。在大肠杆菌Escherichia coli中原核表达Px APN5,表达产物经SDS-PAGE电泳,在110 k Da附近出现特异性条带;酶活性测试显示菌体破碎上清液具有氨肽酶活性,比活力为1 047.2 U/g。配体印迹结果显示表达的Px APN5能与Cry2Ab蛋白特异性结合。多序列比对结果表明,与其他已报道的小菜蛾氨肽酶相比,Px APN5氨基酸序列有3个保守性位点发生了突变,并通过蛋白质建模的方式表征突变位点。【结论】本研究成功克隆和表达了具有氨肽酶活性的小菜蛾氨肽酶,并发现其能与Cry2Ab蛋白特异性结合;通过蛋白质建模对氨肽酶突变位点的特征及功能进行了预测。这些结果对小菜蛾氨肽酶的功能性研究提供了理论基础。 展开更多
关键词 小菜蛾 氨肽酶基因 基因分析 原核表达 酶活性 配体印迹 同源建模
下载PDF
以金属蛋白酶APN/CD13为靶点的抗癌药物的化学生物学研究 被引量:5
6
作者 张涛 徐文方 《中国药物与临床》 CAS 2004年第9期660-663,共4页
关键词 CD13 靶点 金属蛋白酶 抗癌药物 apn 肿瘤细胞 生理病理 化学生物学 氨肽酶n 多肽链
下载PDF
pEGFP-N1-pAPN-SPC段基因真核表达载体的构建及其在Vero细胞中表达 被引量:1
7
作者 杨震 左玉柱 +1 位作者 裴丽华 范京惠 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第4期15-18,共4页
为了构建能够表达猪pAPN-SPC段的真核细胞表达载体pEGFP-N1-pAPN-SPC,并在Vero细胞中进行表达,本试验从猪肠道黏膜组织基因组中扩增出pAPN-SPC段基因,插到带有EGFP基因的真核细胞表达载体pEGFP-N1中,经Bam HⅠ及EcoRⅠ酶切鉴定正确后转... 为了构建能够表达猪pAPN-SPC段的真核细胞表达载体pEGFP-N1-pAPN-SPC,并在Vero细胞中进行表达,本试验从猪肠道黏膜组织基因组中扩增出pAPN-SPC段基因,插到带有EGFP基因的真核细胞表达载体pEGFP-N1中,经Bam HⅠ及EcoRⅠ酶切鉴定正确后转染Vero细胞,用荧光显微镜检测细胞中EGFP的表达,用RT-PCR和Western blot检测pAPN-SPC段基因的表达情况。结果成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-pAPN-SPC,且pAPN-SPC段在Vero细胞中得到了有效表达,为研究pAPN-SPC段蛋白对病毒增殖效果的影响奠定了基础。 展开更多
关键词 猪氨基肽酶 真核表达 猪流行性腹泻病毒 Vero细胞系
下载PDF
氨肽酶N(APN)与鳞翅目昆虫对Bt抗性的关系 被引量:3
8
作者 苗素丽 张少平 程红梅 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2008年第S1期12-17,共6页
使用Bt Cry毒素防治农业害虫是作物生产上的一个革命性的进步,受体与Bt杀虫蛋白结合能力的改变可能是昆虫对Bt产生抗性的主要原因。氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)是一类存在于昆虫中肠内的Bt毒素受体蛋白,通过讨论APN与Bt毒素的结合作... 使用Bt Cry毒素防治农业害虫是作物生产上的一个革命性的进步,受体与Bt杀虫蛋白结合能力的改变可能是昆虫对Bt产生抗性的主要原因。氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)是一类存在于昆虫中肠内的Bt毒素受体蛋白,通过讨论APN与Bt毒素的结合作用,综述了APN基因变异与鳞翅目昆虫Bt抗性相关的分子机理,并介绍了(Bt)Cry毒素与APN相关的作用方式新模型。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌(Bt) 氨肽酶n(apn) 受体 突变 抗性
下载PDF
一种基于聚集诱导发光机制的新型氨肽酶N荧光探针
9
作者 闫喜龙 张子卓 +3 位作者 李明瑞 沈华伟 陈立功 王博威 《天津大学学报(自然科学与工程技术版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第7期704-710,共7页
氨肽酶N(APN)在人体中广泛存在,在肿瘤细胞表面大量表达,并在癌症侵袭、转移和血管生产过程中具有重要作用;体液中的APN可作为炎症、癌症的早期生物标志物.鉴于此,发展高灵敏度、高选择性的检测手段对APN进行实时检测及可视化成像将为AP... 氨肽酶N(APN)在人体中广泛存在,在肿瘤细胞表面大量表达,并在癌症侵袭、转移和血管生产过程中具有重要作用;体液中的APN可作为炎症、癌症的早期生物标志物.鉴于此,发展高灵敏度、高选择性的检测手段对APN进行实时检测及可视化成像将为APN相关疾病的诊断及病理生理学说明提供可能性.荧光探针因其选择性好、灵敏度高的优势,近年来已被广泛应用于生物酶检测.然而已报道用于检测APN的荧光探针多基于平面分子,易受聚集荧光猝灭(ACQ)限制.与基于传统平面分子的ACQ荧光染料相比,具有聚集诱导发光(AIE)效应的荧光分子能更好地应用于高浓度与高含水量的检测环境,为荧光探针技术的发展开辟了新的路径,而基于AIE机制的APN荧光探针仍鲜有报道.喹啉-丙二腈(QM)类化合物具有长发射波长,且生物相容性好、光稳定性优异,目前已有多种基于QM母体的AIE探针应用于细胞成像与各种活性物质检测.基于此,设计合成了以QM为母体的AIE荧光探针QM-Ala,探针具有99 nm的大斯托克斯位移、良好的稳定性、抗干扰能力和较快的响应速度,检测限(LOD)低至1.22 ng/mL.QM-Ala在3~7区间对pH有即时响应,并在体液pH条件下对APN质量浓度有良好的线性响应,因此有望应用于酶抑制剂筛选以及体液中的APN质量浓度检测. 展开更多
关键词 荧光探针 氨肽酶n 聚集诱导发光 喹啉-丙二腈
下载PDF
利用CRISPR/Cas9编辑系统构建pAPN基因敲除的IPI-2I细胞系 被引量:6
10
作者 徐长江 王晓朋 +6 位作者 徐奎 张秀玲 向光明 赵海全 牟玉莲 林晓 李奎 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第7期2282-2290,共9页
试验旨在采用CRISPR/Cas9技术获得猪氨基肽酶N(porcine aminopeptidase N,pAPN)基因敲除的猪回肠上皮(immortal pig intestinal-2I,IPI-2I)细胞系,进而在细胞水平上研究pAPN在冠状病毒入侵过程中的作用及相互作用机制。本研究将已构建... 试验旨在采用CRISPR/Cas9技术获得猪氨基肽酶N(porcine aminopeptidase N,pAPN)基因敲除的猪回肠上皮(immortal pig intestinal-2I,IPI-2I)细胞系,进而在细胞水平上研究pAPN在冠状病毒入侵过程中的作用及相互作用机制。本研究将已构建好的靶向pAPN基因第2外显子上的2个sgRNA载体(pX330-GFP-g3和pX330-RFP-g5)共转染IPI-2I细胞。转染48 h后,荧光显微镜下观察IPI-2I细胞绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)的发光情况,并用流式细胞仪收集带有GFP和RFP荧光标记的细胞,用来筛选单克隆细胞。然后取少量单克隆细胞提取DNA,用PCR扩增打靶区域附近的序列,测序鉴定其基因型,以获得pAPN基因敲除的IPI-2I细胞株。选择野生型和pAPN基因纯合片段敲除的IPI-2I细胞,提取细胞总蛋白,通过Western blotting检测pAPN基因敲除前后IPI-2I细胞中pAPN蛋白的表达。结果表明,转染48 h后,通过荧光显微镜可以观察到IPI-2I细胞中大部分细胞能够同时表达GFP和RFP,说明pX330-GFP-g3和pX330-RFP-g5质粒载体已经转入IPI-2I细胞。PCR和测序结果表明,共获得48株片段敲除单克隆细胞(片段敲除效率为15.5%),其中16株为单等位基因敲除,32株为双等位基因敲除;在32株双等位基因敲除细胞中,有23株细胞为纯合片段敲除。Western blotting结果表明,pAPN基因纯合片段敲除的细胞中检测不到pAPN蛋白的表达。综上,本研究利用CRISPR/Cas9编辑系统成功构建了pAPN基因纯合敲除的IPI-2I细胞系,为阐明pAPN在冠状病毒入侵过程中的作用机制以及制备猪抗病新品种奠定了基础。 展开更多
关键词 猪氨基肽酶n CRISPR/Cas9 IPI-2I细胞
下载PDF
RNAi介导的棉铃虫氨肽酶N基因Haapn1和钙粘蛋白基因Ha_BtR沉默对Cry1Ac毒力的影响 被引量:5
11
作者 周慧丹 杨亦桦 吴益东 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1097-1103,共7页
氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)和钙粘蛋白(cadherin)是存在于鳞翅目昆虫中肠刷状缘膜囊(brush bordermembrane vesicles,BBMV)上Bt毒素Cry1A的受体。本实验将棉铃虫Helicoverpa armigera氨肽酶N1基因Haapn1和钙粘蛋白基因Ha_BtR双链RNA... 氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)和钙粘蛋白(cadherin)是存在于鳞翅目昆虫中肠刷状缘膜囊(brush bordermembrane vesicles,BBMV)上Bt毒素Cry1A的受体。本实验将棉铃虫Helicoverpa armigera氨肽酶N1基因Haapn1和钙粘蛋白基因Ha_BtR双链RNA(dsRNA)注入棉铃虫4龄幼虫体内,以研究这两种受体基因沉默后对Cry1Ac毒力的影响。结果表明:注射dsRNA(1μg/头)进行基因沉默后,Haapn1mRNA表达量比注射缓冲液(elution solution,ES)的对照下降了30%~49%,Ha_BtRmRNA表达量下降了30%~37%。注射Haapn1dsRNA的幼虫在40和70μg/cm2Cry1Ac活化毒素下的死亡率显著低于注射ES的幼虫,而在100和170μg/cm2Cry1Ac原毒素处理下两者死亡率无显著差异;Cry1Ac活化毒素以及原毒素对注射Ha_BtRdsRNA幼虫与注射ES幼虫的毒力均无显著差异。当同时注射Haapn1及Ha_BtRdsRNA后,干扰后的幼虫对Cry1Ac活化毒素和原毒素的敏感性均显著下降。本研究进一步证明了棉铃虫Haapn1和Ha_BtR均是Bt毒素Cry1Ac的功能受体,这两种受体蛋白共同参与Cry1Ac的毒杀作用过程。该结果也提示,Haapn1或Ha_BtR基因产生突变都可能导致棉铃虫对Cry1Ac产生抗性。 展开更多
关键词 棉铃虫 Bt毒素受体 原毒素 RnA干扰 基因沉默 氨肽酶n 钙粘蛋白
下载PDF
沉默APN对胶质瘤细胞U251增殖、侵袭和凋亡的影响 被引量:1
12
作者 董云朋 程远 陈晋 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期908-914,共7页
目的探究aminopeptidase N(APN)对胶质瘤细胞U251增殖能力、迁移侵袭能力和凋亡等生物学行为的影响及可能的作用机制。方法通过RNA干扰技术沉默胶质瘤细胞U251中APN的表达后,运用RT-qPCR的方法检测APN mRNA表达,采用Western blot检测AP... 目的探究aminopeptidase N(APN)对胶质瘤细胞U251增殖能力、迁移侵袭能力和凋亡等生物学行为的影响及可能的作用机制。方法通过RNA干扰技术沉默胶质瘤细胞U251中APN的表达后,运用RT-qPCR的方法检测APN mRNA表达,采用Western blot检测APN蛋白表达水平,CCK-8检测各组U251细胞的增殖活性;采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;采用细胞划痕实验检测U251细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力;采用Western blot检测STAT3通路蛋白t-STAT3、p-STAT3、Bcl-2和MMP-2的蛋白表达水平。结果与空白对照组和阴性对照组相比,沉默U251中APN的表达后APN在基因和蛋白表达水平下降(P<0.01),沉默APN后U251的增殖活性明显下降(P<0.05),细胞周期停滞在G0/G1期,并且凋亡率明显增加(P<0.01);另外沉默APN的表达后U251细胞的迁移能力和侵袭能力明显下降(P<0.01);沉默APN后STAT3磷酸化水平下降,引起下游蛋白Bcl-2和MMP-2等蛋白表达下降(P<0.05)。结论沉默APN可通过STAT3信号途径抑制胶质瘤细胞U251增殖、迁移和侵袭,诱导凋亡。 展开更多
关键词 胶质瘤 aminopeptidase n RnA干扰 STAT3 细胞凋亡 侵袭
下载PDF
美国白蛾hcapn3基因的克隆及HcAPN3蛋白与Cry1Ac结合特性分析 被引量:2
13
作者 王翠苹 赵丹 +3 位作者 李少雅 郭家萍 郭巍 陆秀君 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期62-67,共6页
通过比对分析已知昆虫氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)氨基酸序列并结合本实验室的美国白蛾(Hyphantria cunea)中肠iTRAQ结果,设计了hcapn3基因特异引物,获得hcapn3基因片段。通过RACE-PCR技术获得美国白蛾中肠氨肽酶N基因(hcapn3)全长序... 通过比对分析已知昆虫氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)氨基酸序列并结合本实验室的美国白蛾(Hyphantria cunea)中肠iTRAQ结果,设计了hcapn3基因特异引物,获得hcapn3基因片段。通过RACE-PCR技术获得美国白蛾中肠氨肽酶N基因(hcapn3)全长序列(GenBank登录号为KJ013598)。Blastp分析表明,获得的氨肽酶属于氨肽酶N3家族,命名为HcAPN3。序列分析显示HcAPN3包括952个氨基酸残基,具有典型的谷氨酸锌化氨肽酶(Gluzincin)结构域和羧基端(ERAP1_C)结构域。利用Bac to Bac表达系统在昆虫细胞中表达108kDa的HcAPN3蛋白。在原核表达系统中表达58kDa的Gluzincin结构域和49kDa ERAP1_C的结构域蛋白。Ligand Blot分析结果显示,HcAPN3蛋白及Gluzincin结构域可与Cry1Ac蛋白特异性结合,但ERAP1_C结构域未能与Cry1Ac结合。本研究首次克隆了美国白蛾氨肽酶基因并分析了HcAPN3与Cry1Ac的结合特性,为下一步功能研究提供基础。 展开更多
关键词 美国白蛾 氨肽酶n Hcapn3 Gluzincin结构域 LIGAnD BLOT分析
下载PDF
APN/CD13抑制剂乌苯美司:一个抗肿瘤化疗药物分子伴侣 被引量:4
14
作者 马玉倩 邢晓燕 +5 位作者 葛彬彬 李玉天 姜文妍 贾海永 徐文方 王学健 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1497-1502,共6页
细胞毒类抗肿瘤药物是目前治疗恶性肿瘤的主要手段之一,然而此类药物在杀死肿瘤细胞的同时,会对人体正常细胞(尤其是分裂增殖旺盛的细胞)产生毒副作用,其临床应用受到一定的限制。近年发现氨肽酶N抑制剂乌苯美司与抗肿瘤化疗药物有显著... 细胞毒类抗肿瘤药物是目前治疗恶性肿瘤的主要手段之一,然而此类药物在杀死肿瘤细胞的同时,会对人体正常细胞(尤其是分裂增殖旺盛的细胞)产生毒副作用,其临床应用受到一定的限制。近年发现氨肽酶N抑制剂乌苯美司与抗肿瘤化疗药物有显著协同作用,能增强药物的治疗效果、减少化疗药物的毒副作用。该文概括了乌苯美司增强化疗药的抗肿瘤作用,通过抑制肿瘤干细胞自我更新、抑制自噬、诱导凋亡、增加宿主免疫力等途径逆转耐药的机制,论述了临床实验进展,进一步说明乌苯美司在治疗恶性肿瘤中可作为有效的辅助用药,为临床合理应用提供依据。 展开更多
关键词 氨肽酶n 乌苯美司 细胞毒类药物 抗肿瘤 逆转耐药
下载PDF
棉铃虫APN基因家族系统进化与功能分析 被引量:1
15
作者 牛琳琳 ZAW Lin Naing +2 位作者 张彩虹 EI Thinzar Soe 梁革梅 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2021年第1期91-101,共11页
氨肽酶N(APN)是锌金属蛋白酶M1家族的成员,鳞翅目昆虫中肠刷状缘膜囊泡(brush border membrane vesicles,BBMV)细胞膜上的APN不仅在蛋白消化吸收过程中起着重要的作用,而且是Bt的重要受体蛋白。本研究通过PCR技术克隆得到7条棉铃虫APN... 氨肽酶N(APN)是锌金属蛋白酶M1家族的成员,鳞翅目昆虫中肠刷状缘膜囊泡(brush border membrane vesicles,BBMV)细胞膜上的APN不仅在蛋白消化吸收过程中起着重要的作用,而且是Bt的重要受体蛋白。本研究通过PCR技术克隆得到7条棉铃虫APN基因全长序列,HaAPN1~7(Genbank登录号为MT002819~MT002825)。经生物信息学分析,HaAPN1~7全长为2592~3099 bp,编码863~1032个氨基酸,分子量为110~115 kDa,等电点为4.7~6.4,N端信号肽为15~20 aa。系统进化分析结果表明,HaAPN1~7分属于Class 1~7类别。RT−qPCR结果表明,在敏感棉铃虫5龄幼虫中肠中APN2的表达量最高,APN7的表达量最低;Cry1Ac抗性品系棉铃虫中各类APN的表达趋势与敏感品系一致。取食Cry1Ac、Cry2Ab和Vip3Aa蛋白后棉铃虫中肠APN活性显著降低,取食Cry1Ac和Vip3Aa蛋白后中肠液和BBMV中APN活性都显著降低,而取食Cry2Ab蛋白后只有BBMV上APN活性显著降低;棉铃虫对Cry1Ac、Cry2Ab和Vip3Aa产生耐受性后,中肠液和BBMV中APN活性也都发生显著变化。因此,不同类别的棉铃虫APN在Bt的杀虫机制中可能起到不同的作用,APN活性变化可能与Bt蛋白的降解及抗性演化相关。 展开更多
关键词 氨肽酶n 棉铃虫 系统进化 功能分析
下载PDF
敲除CRFK细胞氨基肽酶N对猫传染性腹膜炎病毒复制影响的研究 被引量:1
16
作者 陈晓彤 郭慧娟 +6 位作者 田进 王洪峰 史鑫琪 陈洪岩 夏长友 王金泉 孟庆文 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期306-313,共8页
猫氨基肽酶N(fAPN)参与猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的感染过程,为研究f APN对FIPV复制的影响,本研究针对f APN第14外显子设计了1对sg RNA,将sg RNA退火后克隆至p X458质粒中,构建同时含有Cas9蛋白和sg RNA的重组质粒。重组质粒经PCR及测... 猫氨基肽酶N(fAPN)参与猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的感染过程,为研究f APN对FIPV复制的影响,本研究针对f APN第14外显子设计了1对sg RNA,将sg RNA退火后克隆至p X458质粒中,构建同时含有Cas9蛋白和sg RNA的重组质粒。重组质粒经PCR及测序鉴定正确后,瞬时转染猫肾细胞(CRFK)中,24 h后通过流式细胞仪分选带有绿色荧光的单克隆细胞。单克隆细胞经稳定传代培养后,细胞中的绿色荧光消失,对细胞进行PCR和测序,结果显示:3株单克隆细胞在f APN第14外显子有1个碱基的插入,造成移码突变,导致f APN不能正常表达,表明敲除f APN蛋白的CRFK细胞系正确构建,命名为KO-APN14。将FIPV分别感染CRFK细胞及培养20代的KO-APN14细胞,48 h后通过间接免疫荧光试验(IFA)检测FIPV N蛋白的表达;将FIPV分别感染CRFK细胞及KO-APN14细胞,在感染4 h、12 h、24 h、36 h时采用RT-q PCR分别检测FIPV N基因、视黄酸(维甲酸)诱导基因I(RIG-I)、黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)、Toll样受体3(TLR3)、干扰素β(IFN-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)的转录水平。IFA结果显示:感染FIPV的CRFK细胞出现绿色荧光,未感染FIPV的CRFK细胞、未感染FIPV的KO-APN14细胞及感染FIPV的KO-APN14细胞均无绿色荧光;RT-q PCR检测FIPV感染各细胞后病毒N基因的转录水平,结果显示:与感染FIPV的CRFK细胞相比,感染FIPV的KO-APN14细胞能够极显著抑制FIPV N基因的转录(P<0.0001);RT-q PCR检测FIPV感染各细胞后上述各细胞因子的转录水平,结果显示:与感染FIPV的CRFK细胞相比,感染FIPV的KO-APN14细胞能够抑制RIG-I、MDA5、TLR3、IFN-β、IL-6、IL-10、TNF-α及f APN的转录。综上所述,f APN是FIPV在侵入细胞及病毒复制过程中发挥重要作用,并在FIPV引起的炎症反应过程中起关键作用。本研究为f APN在免疫炎症反应中作用的研究提供科学依据,并为培育基因编辑抗病育种猫奠定实验基础。 展开更多
关键词 氨基肽酶n 猫传染性腹膜炎病毒 猫肾细胞
下载PDF
棉铃虫中肠氨基氨肽酶N基因的克隆及序列分析 被引量:10
17
作者 王桂荣 梁革梅 +1 位作者 吴孔明 郭予元 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1293-1300,共8页
通过简并引物PCR结合RACE技术 ,从棉铃虫中肠中克隆了 1个氨基氨肽酶N基因 ,该基因全长 30 4 3bp ,阅读框包括 2 85 6bp ,编码 95 1个氨基酸。预测蛋白分子量为 10 8.3kD ,等电点为 5 .2 9。序列中具有谷氨酸锌化氨肽酶的保守结构GAMEN... 通过简并引物PCR结合RACE技术 ,从棉铃虫中肠中克隆了 1个氨基氨肽酶N基因 ,该基因全长 30 4 3bp ,阅读框包括 2 85 6bp ,编码 95 1个氨基酸。预测蛋白分子量为 10 8.3kD ,等电点为 5 .2 9。序列中具有谷氨酸锌化氨肽酶的保守结构GAMEN以及锌结合位点HEXXHX18E。N 末端 2 0个氨基酸具有信号肽的特征 ,C 末端 2 5个氨基酸具有明显的亲脂性 ,并且具有跨膜特征。该基因已经在GenBank中登记 ,序列号为 :AY1810 2 6。 展开更多
关键词 棉铃虫 中肠 氨基氨肽酶 n基因 基因克隆 序列分析
下载PDF
冠状病毒的氨基肽酶N受体的研究进展 被引量:5
18
作者 陈杰 黄小波 +6 位作者 张雨迪 卿盈 李亚青 文心田 曹三杰 文翼平 伍锐 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期89-94,共6页
氨基肽酶N(Aminopeptidase N,APN)是一种锌离子依赖性膜结合II型的金属跨膜糖蛋白,其广泛存在于人和哺乳动物的多种组织细胞中。APN是多种冠状病毒的黏附性受体,参与冠状病毒的粘附与侵袭,与病毒感染密切相关。本文对多种冠状病毒(HCoV-... 氨基肽酶N(Aminopeptidase N,APN)是一种锌离子依赖性膜结合II型的金属跨膜糖蛋白,其广泛存在于人和哺乳动物的多种组织细胞中。APN是多种冠状病毒的黏附性受体,参与冠状病毒的粘附与侵袭,与病毒感染密切相关。本文对多种冠状病毒(HCoV-229E、FCoV、CCoV、TGEV、PEDV)的APN受体的结构、功能、抑制剂等研究进展进行了总结,重点介绍了其作为人和猪冠状病毒功能受体的进展。本文为深入研究和应用冠状病毒APN受体提供参考。 展开更多
关键词 氨基肽酶n 冠状病毒 受体
下载PDF
氨肽酶N的表达及其与结石形成的关系(英文) 被引量:6
19
作者 李月廷 祝学光 +2 位作者 赵昕亮 安国顺 贾弘禔 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期425-429,共5页
为研究大鼠高胆固醇饮食时 ,肝脏氨肽酶N(APN)在实验结石形成中可能的结石发生作用 ,采用 1.2 %胆固醇饮食 4周 ,诱发新西兰兔胆囊结石形成 .根据兔APN基因cDNA序列设计引物 ,提取肝脏总RNA .利用RT PCR检测肝脏APNmRNA水平的变化 ,用... 为研究大鼠高胆固醇饮食时 ,肝脏氨肽酶N(APN)在实验结石形成中可能的结石发生作用 ,采用 1.2 %胆固醇饮食 4周 ,诱发新西兰兔胆囊结石形成 .根据兔APN基因cDNA序列设计引物 ,提取肝脏总RNA .利用RT PCR检测肝脏APNmRNA水平的变化 ,用组织化学方法观察肝脏毛细胆管膜上APN的表达 .观察新西兰兔胆囊结石形成过程中肝脏APN的mRNA水平的变化、APN表达及胆汁中APN活性、胆脂、总蛋白含量的变化 ,探讨APN在胆石形成中可能的作用 .经成石饲料饲养后 ,随着胆汁饱和度增加和APN活性加强 ,胆囊结石组肝脏APNmRNA水平较对照组明显增高 ,胆囊结石组胆汁中总胆固醇、CSI、总蛋白浓度及APN活性均明显高于对照组 ,且胆汁中APN活性与肝脏APN的表达及胆汁CSI增高呈正相关 .结果提示 ,当存在胆汁过饱和的情况下 。 展开更多
关键词 氨肽酶n RT-PCR 生物活性 结石形成
下载PDF
鳞翅目昆虫氨肽酶N与Bt毒素的结合及其与Bt抗性的关系 被引量:9
20
作者 马文静 韩兰芝 +2 位作者 尹新明 曹广春 苏丽娟 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2011年第3期378-387,共10页
随着BtCry作物在我国的广泛应用和推广,靶标害虫对其抗性风险已成为BtCry作物生态安全研究的重要内容。氨肽酶N(Aminopeptidase N,APN)是位于昆虫中肠刷状缘膜囊泡(Brush Border Membrane Vesicles,BBMV)上BtCry毒素重要的受体蛋白之一... 随着BtCry作物在我国的广泛应用和推广,靶标害虫对其抗性风险已成为BtCry作物生态安全研究的重要内容。氨肽酶N(Aminopeptidase N,APN)是位于昆虫中肠刷状缘膜囊泡(Brush Border Membrane Vesicles,BBMV)上BtCry毒素重要的受体蛋白之一,它与BtCry毒素的结合能力决定了BtCry毒素的杀虫活性及昆虫对Bt抗性的产生。本文从APN的结构特征与分类、APN与BtCry毒素的结合特异性、结合位点、结合过程中的分子互作机制及APN变异导致昆虫抗性产生几方面系统综述了鳞翅目昆虫中肠BtCry受体蛋白-氨肽酶N与BtCry毒素的结合及其与Bt抗性关系的研究进展。 展开更多
关键词 氨肽酶n BT Cry毒素 受体 结合能力 抗性
下载PDF
上一页 1 2 7 下一页 到第
使用帮助 返回顶部