脂氧素A4对Aβ_(25-35)所致N2a细胞损伤的保护作用初探

目的:初步探讨脂氧素A4(LXA4)对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ_(25-35))损伤N2a细胞的保护作用及其机制。方法:用不同浓度Aβ_(25-35)处理N2a细胞,建立阿尔茨海默病(AD)细胞损伤模型,通过细胞形态学观察、CCK-8法和Hoechst 33258染色来评价细胞模型是否构建成功。细胞分为对照组、模型组(20μmol/L Aβ_(25-35))和LXA4保护组(50、100、200 nmol/L)。采用CCK-8法检测N2a细胞的活性;荧光酶标仪检测N2a细胞内活性氧(ROS)水平;ELISA法检测细胞培养上清中白介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果:20μmol/L Aβ_(25-35)处理N2a细胞24 h可建立细胞损伤模型。LXA4保护组的细胞存活率均较模型组显著升高。与模型组相比,200 nmol/L LXA4保护组细胞内ROS水平显著降低(P<0.01);200 nmol/L LXA4保护组IL-10水平显著高于模型组(P<0.01);200 nmol/L LXA4保护组的TNF-α水平显著低于模型组(P<0.01)。结论:LXA4对Aβ_(25-35)损伤N2a细胞具有保护作用,其机制可能是抑制ROS水平以及调节炎症因子的表达。

鼻咽癌中EGFR调控APP信号通路的初步研究及其意义

目的探索鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)调控β淀粉样蛋白前体(amyloid beta A4protein,APP)的信号通路及其临床意义。方法采用转化生长因子(transforming growth factors-α,TGF-α)诱导CNE2细胞24h作为研究模型,分别采用EGFR酪氨酸激酶的选择性小分子抑制剂PD153035,MAPK抑制剂PD98059,PI3K抑制剂Wortmannin处理2h再用TGF-α作用24h作为实验组,Western blot检测阻断剂APP蛋白的表达和分泌变化情况。免疫组化检测EGFR和APP蛋白在NPC与慢性鼻咽炎症上皮组织中的表达差异。结果PD153035+TGF-α组APP蛋白表达与分泌有所下调,wortmannin+TGF-α组APP蛋白下调明显,PD98059+TGF-α组APP表达无明显变化。EGFR和APP在NPC组织中的表达高于鼻咽炎症上皮组织,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论NPC中APP蛋白主要受EGFR信号通路中的PI3K调控,EGFR和APP与NPC的发生有关。

APP基因多态性在脑卒中的病例-对照研究

目的研究中国人群中淀粉样前质蛋白(APP)基因079A/G多态性与脑卒中的关系。方法从7个地区选取脑卒中病例及对照1012例,其中病例401例,对照611例;所有研究对象记录其病史,体检等临床资料及吸烟、饮酒、饮食等流行病学资料,采用PCR-RFLP检测各组APP079A/G多态性并统计各组的多态性频率。结果A等位基因在脑卒中组和对照组分别为20.8%和18.4%,G等位基因频率在脑卒中组和对照组分别为79.2%和81.6%。基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律。脑卒中组和对照组的APP079A/G基因型频率及等位基因频率无显著性差异。结论APP079A/G多态性与脑卒中的发生无显著相关性。

β-淀粉样蛋白在卵巢癌组织中的表达及与临床关系研究

目的研究β-淀粉样蛋白(Amyloid beta A4 protein,APP)mRNA在卵巢肿瘤患者组织中的表达,并探讨其临床意义。方法Trizol一步法提取卵巢肿瘤患者卵巢组织总RNA,实时荧光定量PCR技术对49例卵巢癌、20例卵巢良性肿瘤、16例正常卵巢组织进行定量分析。结果APP mRNA在卵巢癌中表达量比在卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织中明显升高(P<0.05);卵巢颗粒细胞瘤患者组织APP的表达显著高于上皮性卵巢癌(P<0.05);术前行新辅助化疗的卵巢癌患者APP表达量显著高于良性组和正常对照组,但与非化疗患者的表达没有差异,提示化疗不会降低其表达量。APP表达量与卵巢癌患者的生存率无显著相关性,不是独立判断卵巢恶性肿瘤患者预后的因素。结论卵巢癌患者肿瘤组织APP mRNA水平显著高于良性和正常对照组,并在卵巢颗粒细胞瘤中高表达,提示其增高与恶性肿瘤的组织学类型有关,具有一定的临床诊断意义和价值。

APP代谢通路关键基因在非洲爪蛙早期胚胎中的时空表达

目的:Aβ的沉积是形成老年斑的主要原因,同时是阿尔茨海默病的主要病理标志物。Aβ形成来源于该病的主要致病基因淀粉样前体蛋白APP(Amyloid beta precursor protein;XB-GENE-479158;NCBI:Xl.8671),APP在非洲爪蛙早期胚胎时空表达图式目前还不清楚,之前的报道只在某些手术分离的组织中用RT-PCR的方法进行了研究,为进一步在爪蛙中研究这类基因在发育过程中的时空表达及可能的功能,展开了本研究。方法:本研究收集了第2期到第4期非洲爪蛙胚胎包括(卵裂期、囊胚期、原肠胚期、神经轴胚、尾牙期和蝌蚪期),通过整体胚胎原位杂交和半定量RT-PCR检测基因APP在胚胎发育不同时期的时空表达,用双荧光素酶报告基因系统检测APP启动子活性。结果:APP有2种主要的转录产物,短的693~694个氨基酸,长的有750~751个氨基酸,主要差别来自外显子7的可变剪切。其中短的剪切体是主要转录的产物,而长的一个剪切体则表现为持续的低表达。整胚的原位表达结果显示:在神经板阶段,APP主表达在孵化和黏液腺中。神经管闭合后,APP转录水平升高,在体细胞中胚层,前肾和背侧神经管中呈现高表达。在尾芽末期,APP在晶状体、端脑、松果体、间脑和背侧耳泡中表达。在蝌蚪期,APP主要在包括胰腺、胃和十二指肠在内的消化系统中高表达。结论:APP是一个母源性表达的基因,其时空表达分布的特异性预示其在相关部位发育过程中可能发挥重要作用,从而为研究阿尔茨海默病的关键致病基因在胚胎早期的所发挥的作用提供了新的路径。