桑树内生枯草芽孢杆菌TasA基因的克隆及序列分析与表达产物的抑菌作用

TasA是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)在芽孢的形成过程中产生的蛋白,对多种动、植物病原菌有较强的抑制作用。从桑树内生枯草芽孢杆菌菌株ME0717基因组DNA中克隆到TasA基因的全序列,包含一个786bp的完整开放阅读框(ORF),GenBank登录号为FJ713582。该序列与来源于B.subtilis的已知同源TasA序列Z99116、AJ871386的相似性达99.0%和98.1%,与芽孢形成相关的基因YqhF(GenBank登录号:BACJH642)的序列相似性也达99.0%,而与来源于地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)的TasA序列(GenBank登录号:AE017333)相似性仅有46.0%,与来源于其它芽孢杆菌属的金属蛋白酶基因和芽孢外壳相关蛋白基因也有较高的相似性。构建该基因的原核表达载体,并在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中获得表达,表达产物对桑疫病病原细菌的菌体生长以及桑漆斑病菌和桑炭疽病菌的菌丝生长均有一定程度的抑制作用。

对氟苯乙醛缩乙醇胺席夫碱抑菌活性研究

目的 试验新合成的化合物对氟苯乙醛缩乙醇胺席夫碱(含氟席夫碱)对枯草杆菌等五种细菌的抑菌作用,为寻找具有抑菌、抗癌、抗病毒、杀霉等生物活性的药物提供新药。方法 采用国际药典通用的管碟法。首先培养枯草杆菌、大肠杆菌、大肠杆菌(101)、金黄色葡萄球菌、革兰阴性细菌(发荧光Q67 )等五种细菌,取其第二代繁殖体作受试对象。将对氟苯乙醛缩乙醇胺席夫碱用适量蒸馏水溶解,配制浓度为0. 25, 0. 5, 1, 2mg/mL一系列溶液,加样后革兰阴性细菌(发荧光Q67 )在25℃培养箱里培养24h,其余均在室温下培养24h,实验中以蒸馏水作为对照。结果 蒸馏水对上述细菌无任何抑制作用,该含氟席夫碱对上述细菌均有不同程度的抑制作用。结论 抑菌活性实验表明该含氟席夫碱对枯草杆菌、大肠杆菌、大肠杆菌(101)、金黄色葡萄球菌、革兰氏阴性细菌(发荧光Q67 )等五种细菌均有较好的抑菌作用。

家蝇幼虫分泌物抗菌组分的抗菌效果观察及筛选

目的筛选家蝇幼虫分泌物中的抗蔺组分并测定其抗菌活性。方法用盐析、凝胶过滤层析、反相高效液相色谱（RP-HPLC）分离纯化分泌物中抗菌蛋白肽，以大肠埃希茼为指示曲种，采用平板滤纸片法检测抗菌活性，并观察其对金黄色葡萄球菌等多种细菌的抗菌活性。结果经50％～80％硫酸铵盐析沉淀、Sephadex G-100、G-50凝胶过滤往层析分离得到一活性峰，该活性峰埘大肠埃希菌及金黄色葡萄球菌等细菌显示较强的抗菌作用，进一步用反相高效液相色潜纯化，该活性峰由3个活性组分构成。结论家蝇幼虫分泌物中含有3个抗菌组分，对多种革兰氏阳性及阴性菌具有较强的抗菌活性。

凤仙花叶片提取物及萘醌类物质抑菌活性研究

采用滤纸片法测定凤仙花叶片55%乙醇回流提取物及其所含的指甲花醌、2-甲氧基指甲花醌对大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌抑制活性。结果表明,凤仙花叶片提取物在25.0 mg/m L时对受试的3种菌均有较好的抑制作用。指甲花醌浓度为1.56 mg/m L时,对白色念珠菌、绿脓杆菌的抑菌活性强于对大肠杆菌的抑制作用。2-甲氧基指甲花醌对白色念珠菌的抑菌活性强于对绿脓杆菌、大肠杆菌的抑制作用,对白色念珠菌的最低抑制浓度小于0.78 mg/m L。

深海枝芽胞杆菌A493产生的新活性物质Z11的抗菌机理

以一株抗菌谱窄的深海枝芽胞杆菌(Virgibacillus dokdonensis)A493为研究对象,对其产生的新的氨基糖苷类抗菌活性物质Z11抑制水稻黄单胞菌的浓度范围和抗菌作用机理进行了研究。结果表明Z11抑制水稻黄单胞菌的浓度范围为14～56μg·mL-1;机理研究显示Z11不改变水稻黄单胞菌细胞膜的通透性,但能影响其蛋白质的合成及细胞壁合成关键酶N-乙酰葡糖胺-1-磷酸尿苷酰转移酶(GlmU)的活性。

杀菌肽的研究进展及应用前景

杀菌肽是在昆虫体内诱导产生的一类具有强抗菌活性的、由３０多个氨基酸组成的多肽。它的特殊空间结构可以使原核细胞膜形成孔洞，导致细胞死亡，对真核细胞膜却无此作用。哺乳动物体内亦存在类似的有抗菌活性的多肽，杀菌肽因其广谱杀菌活性而引起了植物学家和医学家的注意。已被用于植物抗病原菌和医学研究。

国产注射用阿莫西林钠舒巴坦钠的体外抗菌活性研究

目的 评价国产注射用阿莫西林钠舒巴坦钠 (AMSB)的体外抗菌活性。方法 采用琼脂平皿二倍稀释法及肉汤二倍稀释法测定MIC值 ,Nitrocefin法测定细菌产生的 β 内酰胺酶 ,并与进口同种产品注射用阿莫西林钠舒巴坦钠 (泰霸猛TFM)、注射用阿莫西林钠 (AMPC)、注射用舒巴坦钠 (SB)进行了抑菌效果对比。结果 AMSB对革兰阳性球菌有很强的抗菌活性 ,MIC90 为 0 .5～ 8mg/L ,比AM作用强4～ 8倍。AMSB对淋球菌和流感嗜血杆菌也有很强的抗菌活性 ,MIC90 分别为 4mg/L和 8mg/L。试验中 ,多数革兰阴性杆菌的 β 内酰胺酶产生率为 80 %～ 10 0 % ,AMSB对革兰阴性杆菌的抗菌作用明显强于AM ,对临床分离的产 β 内酰胺酶菌株的体外抗菌活性也优于AM ,高 8～ 64倍。 结论 国产AMSB和进口TFM具有相同的抗菌谱和抗菌活性。

Design-Expert软件设计优化万寿菊黄酮提取工艺及抗氧化活性、抑菌活性测定

以万寿菊为原料,采用负压协同超声波辅助提取万寿菊黄酮,并对其抗氧化活性进行研究。以万寿菊黄酮得率为指标,在单因素基础上,通过Design-Expert软件设计响应面试验,得到最佳工艺条件为负压0.08 MPa、超声功率402 W、超声时间30 min,在此条件下,万寿菊黄酮得率为5.18%。万寿菊黄酮的抗氧化活性结果表明,随着浓度的增加,万寿菊黄酮对DPPH自由基和羟基自由基的清除能力逐渐增强,当其浓度为250 μg/mL时,对DPPH自由基的清除率为81.73%,对羟基自由基的清除率为83.28%,表明万寿菊黄酮具有较强的抗氧化能力。万寿菊黄酮对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有一定的抑菌作用,最低抑菌浓度分别为1.0 mg/mL和1.5 mg/mL,且随着浓度的增加而不断增强。

发形霞水母共附生微生物的分离鉴定及其发酵液的抑菌活性研究

目的对发形霞水母(Cyanea capillata)共附生微生物进行分离鉴定并测定其抑菌活性,以期获得具有较高抑菌活性的菌株。方法利用4种分离培养基从C.capillata各部位分离共附生微生物,首先对挑选的单个菌落进行反复的划线分离,获得各菌株的纯培养;利用形态学观察、生理生化特征检测和16SrDNA序列测定和分析等手段对获得的菌株进行鉴定;以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌作为指示菌,利用滤纸片扩散法测定菌株发酵液的抑菌活性;通过正交试验方法进一步优化发酵条件,提高菌株发酵产生抑菌活性物质的能力。结果从C.capillata触手、胃囊、伞部、肌肉4个部位共分离出83株菌株,其中放线菌11株,细菌31株,真菌41株;其中菌株cmf-2经鉴定属于假单胞菌属。抑菌活性检测发现,在31株细菌中有14株对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌均有较强的抑菌活性,占分离菌株的45.2%;正交试验结果显示,菌株cmf-2发酵液的最优条件为:培养温度35℃,pH 7.3,培养时间7d,蔗糖50g/L,蛋白胨10g/L。结论分离到的发形霞水母共附生微生物中含有较高比例的能产生抑制细菌生长的活性物质的细菌菌株,这些菌株具有较强的研究和开发价值。

海洋真菌来源化合物(＋)-terrein的发酵优化及其生物活性

目的对海洋来源真菌Aspergillus terreus中的(+)-terrein代谢产物进行发酵优化,以期获得足够的样品进行药理活性评价。方法采用不同发酵条件对微生物进行发酵优化,运用柱色谱层析技术对目标产物进行分离纯化,对化合物进行细胞毒及抗细菌活性评价。结果研究表明,最优发酵条件为土豆液体发酵培养基,发酵时间为28d,在该条件下目标产物单一,易分离纯化。用上述最优发酵条件,摇床发酵时间12d的产量与静置发酵28d的产量相当。细胞毒活性测试结果显示,(+)-terrein具有强的细胞毒活性,对NCIH460、A549和BT474肿瘤细胞株的IC50值分别为3.12、3.32和3.45μg/mL。结论在优化条件下,静置发酵28d,(+)-terrein的产量可达0.254g·L-1,而摇床发酵12d其产量为0.263g·L^(-1),明显缩短了发酵时间。此外,该化合物对NCI-H460、A549和BT474肿瘤细胞具有较好的细胞毒活性,具有开发为抗癌药物的潜在价值。

基胡蜂蜂毒的组成分析及生物活性评价

目的对基胡蜂蜂毒的组成进行分析及对其体外生物活性进行评价。方法采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和超高效液相色谱-质谱联用技术对基胡蜂蜂毒中的蛋白质和多肽成分的相对分子质量组成进行分析。采用MTT比色法评价蜂毒的体外抗炎及抗肿瘤活性,牛津杯法评价蜂抗菌活性,并将结果与基胡蜂醇提物进行比较。结果基胡蜂蜂毒中蛋白质主要分布在11~48×10^(3)内,且在26、34和43×10^(3)附近有3条明显的蛋白条带,为蜂毒的主要过敏原成分。多肽类分子的相对分子质量呈无规律的多峰式分布,其中85%的多肽分子集中在300~2 500内。就生物活性而言,基胡蜂蜂毒可抑制脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞增殖,25μg·mL^(-1)浓度下的蜂毒对细胞的抑制率高达67.67%,且100μg·mL^(-1)的抗炎效果是同浓度地塞米松的10倍;对HT-29,HepG2,B16肿瘤细胞的生长繁殖具有显著的杀伤作用;对金黄色葡萄球菌,大肠埃希氏菌和白色念珠菌具有生长抑制作用;而基胡蜂醇提物仅表现出对LPS诱导的RAW264.7炎症细胞增殖抑制活性,且抑制效果仅为蜂毒的1/60。结论本实验利用现代分离及分析技术对基胡蜂蜂毒的组成及生物活性进行了相对系统的研究,由结果可知,基胡蜂蜂毒含有丰富的肽类物质,为后续蜂毒成分研究方法的选择提供方向;此外,基胡蜂蜂毒具有抗炎、抗肿瘤、抗菌活性,具有潜在的药用开发价值,实验为后续该毒素的现代化深入研究提供了参考。