基于分子对接技术的注射用双黄连中有效成分致类过敏性实验研究

目的 筛选注射用双黄连中存在的致类过敏成分并对作用机制进行初步探讨。方法 以人类相关G蛋白偶联受体X2(Mas-related G protein-coupled receptor X2,MRGPRX2)为目标蛋白,通过AutoDock和Pymol软件与注射用双黄连中的活性物质作为配体进行分子对接,初步筛选致类过敏成分,并对RBL-2H3细胞的最佳实验条件(IC50)进行考察,将注射用双黄连活性成分中初选的成分与RBL-2H3细胞进行孵育,通过双抗夹心ELISA法与底物法检测组胺和β-氨基己糖苷酶的释放率,进一步筛分致类过敏成分,并观察其对RBL-2H3细胞内补体水平和细胞脱颗粒程度的影响,最后通过大鼠离体回肠实验进行验证。结果 RBL-2H3细胞分别给予注射用双黄连(28.25 mg/L)、β-谷甾醇(0.95 mg/L)、β-胡萝卜素(4.10 mg/L)、黄芩苷(1.90 mg/L)、咖啡酸甲酯(3.20 mg/L)、阿魏酸(2.29 mg/L)、绿原酸(1.51 mg/L)作用后,His、β-Hex释放均显著升高(P<0.01、0.05)。给药后的鼠总补体水平CH50和C3a、C5a水平均显著升高(P<0.05),并伴有脱颗粒现象。经离体回肠实验后β-谷甾醇、β-胡萝卜素、黄芩苷、咖啡酸甲酯、阿魏酸、绿原酸均能使大鼠回肠张力增加(P<0.01、0.05)。结论 注射用双黄连诱导的类过敏反应可能与β-谷甾醇、β-胡萝卜素、黄芩苷、咖啡酸甲酯、阿魏酸、绿原酸有关,且诱导的类过敏反应的作用机制可能与补体水平相关。

小儿复方鸡内金咀嚼片对KM小鼠全身过敏反应、大鼠腹腔肥大细胞和RBL-2H3细胞类过敏反应诱发结果

目的观察小儿复方鸡内金咀嚼片对KM小鼠全身过敏反应、分离自SD大鼠腹腔液肥大细胞(RPMC)和Wistar大鼠嗜碱性白血病细胞株RBL-2H3类过敏反应的诱发结果。方法①取48只KM小鼠,随机均分为甲、乙、丙、丁组:甲组小鼠用小儿复方鸡内金咀嚼片混悬液灌胃,0.25 g生药/kg,隔天1次,连用3次,分别间隔9、16天时再次灌胃;乙组小鼠用小儿复方鸡内金咀嚼片混悬液灌胃,0.025 g生药/kg,隔天1次,连用3次,分别间隔9、16天时再次灌胃;丙组小鼠用1 mg卵清蛋白静脉注射,隔天1次,连用3次,分别间隔9、16天时再次静脉注射;丁组小鼠用0.1 mL/10 g生理盐水静脉注射,隔天1次,连用3次,分别间隔9、16天时再次静脉注射,观察各组小鼠主动全身过敏反应情况。②另取10只SD大鼠,分离大鼠腹腔原代RPMC细胞,分为5组:空白对照、C48/80组、高中低剂量组,高中低剂量组细胞分别加入32、16、8 mg/mL的小儿复方鸡内金咀嚼片混悬液,C48/80组及空白对照组分别加入0.04 mg/mL的组胺释放剂和肥大细胞脱颗粒剂C48/80、缓冲液,测算各组细胞组胺、β-氨基己糖苷酶释放率及促进率。③取对数生长期RBL-2H3细胞,分为空白对照、C48/80组、高中低剂量组,高中低剂量组细胞分别加入32、16、8mg/mL的小儿复方鸡内金咀嚼片混悬液,C48/80组及空白对照组分别加入0.04 mg/mL的C48/80、缓冲液,测算各组细胞组胺、β-氨基己糖苷酶释放率及促进率。结果第14、21天时甲乙丁组小鼠均未出现过敏反应,过敏反应阴性;丙组小鼠出现呼吸困难、死亡,过敏反应强阳性。RPMC细胞C48/80组组胺释放率72.6%(致敏阳性),高中低剂量组的组胺释放促进率均低于64.23%(不具有致敏作用);C48/80组β-氨基己糖苷酶释放促进率为110.53%,(致敏阳性),高中低剂量组的β-氨基己糖苷酶释放促进率均低于80.31%(不具有致敏作用)。RBL-2H3细胞C48/80组的组胺释放率促进率81.6%,高中低剂量组的组胺释放促进率均低于64.23%;C48/80组β-氨基己糖苷酶释放促进率为120.93%(致敏阳性),高中低剂量组β-氨基己糖苷酶释放促进率均低于80.31%(不具有致敏作用)。结论小儿复方鸡内金咀嚼片不诱发KM小鼠全身过敏反应,同时也不导致分离自SD大鼠腹腔原代肥大细胞及Wistar大鼠嗜碱性白血病细胞株RBL-2H3细胞的类过敏反应。

静注人免疫球蛋白(pH4)对人补体系统的体外影响

目的采用体外补体孵育实验评价静注人免疫球蛋白是否能激活补体系统,探讨本品给药过程中补体系统与类过敏反应之间的关联性。方法分别选取4家企业产品,另加热制备多聚体升高的样品,在体外与人血清共同孵育1 h后,采用ELISA试剂盒测定补体系统激活代表性中间产物及终末复合物Sc5b-9的含量。结果与生理盐水对照组相比,实验组中补体分子C3a、C4a、C5a、Bb、Sc5b-9基本呈下降趋势;制剂经加热处理后,上述补体分子并未出现显著性升高现象。结论静注人免疫球蛋白不能通过激活补体系统进而引发类过敏反应,相反,对补体系统存在一定程度抑制。

319例注射用脑蛋白水解物药品不良反应报告分析

目的 分析注射用脑蛋白水解物不良反应报告数据,了解该药品不良反应发生特点,为临床安全用药提供参考。方法 采用回顾性研究,对2011年1月1日至2022年12月31日收集到的注射用脑蛋白水解物不良反应报告进行分析。结果 319例注射用脑蛋白水解物不良反应累计598例次,多发生于61岁以上患者,不良反应发生时间多为用药30 min内,不良反应累及系统-器官主要为皮肤及其附件疾病、胃肠疾病、呼吸系统疾病等。严重报告56例,不良反应主要表现为过敏样反应。结论 临床应警惕注射用脑蛋白水解物引起的不良反应,规范临床用药,防止过敏性休克严重不良反应的发生。

烟酸注射液血管刺激性和类过敏反应研究

目的评估仿制药烟酸注射液对实验动物的血管刺激性及类过敏反应,为该药物临床安全用药提供参考。方法予日本大耳白兔耳缘静脉注射烟酸注射液,每日1次,连续5 d,观察血管刺激性症状,末次给药后72 h、14 d取耳缘静脉及周围组织进行病理制片和组织病理学检查。予SD大鼠尾静脉注射烟酸注射液,以全身类过敏反应行为学表现为评分标准,判断类过敏反应程度,并采血进行组胺和免疫球蛋白(IgE)检测。结果实验兔耳缘静脉注射烟酸注射液,在给药期间和停药期间均未见明显血管刺激性症状。SD大鼠尾静脉注射烟酸注射液未引起类过敏反应。结论仿制药烟酸注射液对兔耳血管无明显刺激性作用,亦未引起大鼠的类过敏反应,建议规范临床用药,减少不良反应的发生。

聚山梨酯80及其配制的鱼腥草注射液致Beagle犬类过敏反应实验研究

目的评价多种聚山梨酯80及其配制的鱼腥草注射液静脉给药对Beagle犬的致敏性。方法 Beagle犬是类过敏反应的敏感动物,以动物反应症状与血浆组胺升高为判断标准,综合判定类过敏反应。Beagle犬随机分为18组,每组3只,分别静脉注射不同厂家0.25%、0.10%、0.05%浓度的聚山梨酯80灭菌水溶液,或分别含0.25%、0.30%不同厂家聚山梨酯80的鱼腥草注射液。给药体积10mL/kg,前肢静脉恒速注射(速度5mL/min)。观察给药前至给药后24h每只犬的变化,记录症状出现、消失时间,并根据反应症状的轻重判定级别。给药前及停药后10min取血,ELISA方法检测血浆组胺含量,并结合反应症状级别,综合判定致敏性。结果各厂家、各浓度(0.05%、0.10%、0.25%)聚山梨酯80灭菌液以及各组鱼腥草注射液,均未导致Beagle犬出现典型的类过敏反应症状及血浆组胺升高1倍以上。综合判定,各组受试液均未诱发Beagle犬出现典型的类过敏反应。结论控制聚山梨酯80质量,并将使用浓度限定在0.30%或0.25%以下,可以在保证药物增溶效果的同时避免类过敏反应的发生。

几种常见中药注射剂对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响

目的通过研究几种常见中药注射剂(TCMI)对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响,探讨RBL-2H3细胞模型应用于体外评价TCMI引起类过敏反应的可行性。方法体外培养RBL-2H3细胞,血塞通等7种TCMI与其共同培养,通过中性红染色法计数脱颗粒的RBL-2H3细胞,显色法计算β-氨基己糖苷酶释放率,ELISA法检测培养上清中组胺含量,观察TCMI对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响。结果正常RBL-2H3细胞出现少量脱颗粒现象,血塞通、清开灵、双黄连、脉络宁、香丹、穿琥宁等能显著引起细胞脱颗粒;血塞通、穿琥宁和柴胡注射液能不同程度促进β-氨基己糖苷酶的释放;血塞通、清开灵注射液可显著引起RBL-2H3细胞组胺释放。结论RBL-2H3细胞脱颗粒的检测方法敏感、重复性好,其结果与临床报道有一定的相关性,提示其有评价TCMI所致的类过敏反应的潜在应用价值。

非离子型碘造影剂的过敏样反应

目的:对临床使用的非离子型碘造影剂的过敏样反应进行总结和分析。方法:回顾性总结2004年4月至2006年6月期间,在我院进行冠状动脉(冠脉)造影和(或)介入治疗的患者群中,接受非离子型碘造影剂血管内注射后1小时之内发生的过敏样反应病例,参照美国放射学会的诊断标准,根据患者的临床表现分为轻、中、重度三型;针对性别、年龄、冠脉病变程度、造影剂品种等变量因素进行分析和统计学处理。结果:在17033例患者中计有217例发生过敏样反应(发生率1.28%),轻、中、重度过敏样反应的发生率分别为0.22%、0.80%和0.26%,死亡3例(死亡率0.018%);男性患者的过敏样反应发生率高于女性患者(1.37%vs0.98%,P<0.05),在冠脉病变程度、不同造影剂品种等因素的分析中未检出性别之间存在显著性差异;过敏样反应发生率随年龄增加呈下降的趋势,经多元回归分析呈线性关系,男性患者尤为明显;过敏样反应的发生率与冠脉病变程度无显著相关性;年龄、不同造影剂品种对于过敏样反应的三型构成比无显著影响,在女性患者、冠脉多支病变患者尤其是病变累及左主干的患者人群中发生重度过敏样反应的比例较高。结论:非离子型碘造影剂在临床应用中安全性良好,过敏样反应发生率为1.28%,男性患者的过敏样反应发生率高于女性患者,过敏样反应发生率随患者年龄增加而呈下降趋势,在女性患者、冠脉多支病变尤其是病变累及左主干的患者人群中发生重度过敏样反应的比例较高。

药用注射辅料聚山梨酯80诱发类过敏反应的细胞研究

目的:观察聚山梨酯80诱导大鼠嗜碱性粒细胞白血病细胞株RBL-2 H3细胞脱颗粒现象,探讨其诱发类过敏反应的可能机制。方法:聚山梨酯80与RBL-2 H3细胞共同孵育60 min后,透射电镜观察细胞发生脱颗粒反应的形态学变化,荧光显微镜下观察细胞膜磷脂酰丝氨酸与Annexin V结合变化,分光光度法测定细胞上清液β-氨基己糖苷酶释放百分率,并通过阿利新蓝染色试验进行定性观察。结果:不同浓度聚山梨酯80可诱导细胞发生典型的脱颗粒反应形态学变化,与阴性对照组相比脱颗粒率及组胺释放率显著升高,且具有浓度依赖性。结论:聚山梨酯80单次、首次给药即可诱导RBL-2 H3细胞脱颗粒,释放组胺,诱发类过敏反应,这可能是其临床首次用药即引起严重不良反应的机制之一。

药物类过敏反应生物标志物探究

药物类过敏反应为非免疫球蛋白E(IgE)介导的急性过敏反应,与I型超敏反应临床症状相似,首次接触药物即可发生,在临床药物过敏反应中占有相当大的比例。药物类过敏反应生物标志物可特异性反映药物类过敏反应的发生发展,监测其生物标志物可实现对该不良反应进行可靠的非临床评价和临床诊断,从而降低该不良反应的发生率。本文介绍了药物类过敏反应特点,重点阐述了组胺等几种药物类过敏反应生物标志物的研究现状,希望为药物类过敏反应的非临床评价以及临床诊断提供参考。

基于RBL-2H3细胞模型的Ⅰ型过敏反应和类过敏反应研究

Ⅰ型速发型过敏是常见的药物不良反应,长期受到人们的广泛重视和研究。类过敏反应自20世纪80年代在造影剂和麻醉剂的使用中发现以来,其发生频率不断提高,尤其随着中药注射剂的广泛使用而越来越受到重视。但其确切机理还尚未得到阐明。RBL-2H3细胞是一类表面含有丰富的IgE受体鼠嗜碱性淋巴细胞,在研究过敏反应方面有重要作用。本文就如何以RBL-2H3细胞构建这两类过敏反应的体外细胞模型及如何检测其效应分子进行简单阐述,同时介绍这两类反应机制的研究进展。

中药注射剂过敏及类过敏反应体外评价方法的初步建立

目的比较RBL-2H3、P185、Ku812和RPMC 4个细胞系在过敏和类过敏反应评价中的敏感性。方法实验中选用了RBL-2H3、P185、Ku812和RPMC等4种细胞系。在培养过程中,在培养液中加入不同浓度的中药注射剂(临床有过敏反应或者类过敏反应的注射液)或者阳性对照药C48/80,然后观察不同时间点细胞脱颗粒率、组胺释放水平和IL-10表达水平。结果在进行过敏反应评价时,中药注射剂可引起Ku812细胞和RBL-2H3细胞的脱颗粒反应,并引起培养液中组胺释放量增加;在进行类过敏反应评价时,中药注射剂可引起RBL-2H3细胞,RPMC细胞和Ku812细胞的脱颗粒反应和组胺释放量的增加。在各细胞培养上清液中均未检测出IL-10。结论 RBL-2H3、RPMC以及Ku812细胞可用于中药注射剂引起的过敏和类过敏反应的评价,但是不同的细胞敏感性不同。

大鼠皮肤类过敏试验的方法学研究及适用性考察

目的研究大鼠皮肤类过敏试验方法的适用性和可靠性，对中药注射剂潜在的类过敏反应进行检测和评价。方法以C48／80为工具药物，对可能影响大鼠皮肤类过敏试验的灵敏度和可靠性因素进行比较研究，优选最佳试验条件，选用Tween80、内毒素、中华眼镜蛇毒素、天花粉蛋白注射液、痰热清注射液和血塞通注射液进行考察和应用。结果大鼠皮肤类过敏反应试验方法最佳条件为：采用胰岛素注射器（口径0．33mm）进行药物注射，50-100pL／点，给药后立即尾静脉注射0．5％伊文思蓝染液1mL，15min时颈动脉放血处死大鼠，剪取背部皮肤处理。采用该方法，Tween80、内毒素、中华眼镜蛇毒素、天花粉蛋白注射液均呈现一定的诱导大鼠皮肤出现蓝斑的能力，痰热清注射液给予临床剂量无蓝斑出现。血塞通注射液，临床剂量虽可引起大鼠皮肤蓝斑，但不排除与因其本身的药效作用干扰所致。结论该方法操作简便，试验周期短，需用药量少，检测敏感性高，结果重复性好，但易受药物本身特性干扰而出现假阳性。

3种细胞用于建立体外肥大细胞脱颗粒模型的比较研究及应用

【目的】比较3种肥大细胞(Ku812、RBL-2H3和P8l5细胞)激活后脱颗粒反应的差异,寻找适宜的肥大细胞脱颗粒体外检测模型,并利用该模型检测几种常见的中药注射剂(TCMI)以探讨肥大细胞体外研究过敏及类过敏反应的可行性。【方法】以10μg/mL C48/80激活细胞0～60 min,采用液质联用法(LC-MS)检测组胺释放量,比色法检测氨基糖苷酶释放率,中性红染色法进行形态学观察。【结果】C48/80刺激P815、RBL-2H3、Ku812细胞0～60 min后组胺释放率、氨基糖苷酶释放率和细胞脱颗粒率均有明显增加,且在相同刺激条件下,P815细胞活化后脱颗粒现象出现更早、程度更高(P<0.05)。故选择P815细胞对数种TCMI的致敏性进行体外检测,正常P815细胞出现较少脱颗粒现象,而清开灵、血塞通、双黄连、肿节风、香丹等注射液能显著引起细胞脱颗粒释放组胺。【结论】相对于RBL-2H3和Ku812细胞,P815细胞更适合作为一种早期、稳定、敏感的肥大细胞脱颗粒体外检测模型,其对几种常用TCMI的检测结果与临床报道有一定的相关性,P815细胞具有评价TCMI致过敏及类过敏反应的潜在应用价值。

清开灵、血塞通注射液类过敏反应研究

目的用RBL-2H3细胞初步评价清开灵、血塞通注射液类过敏反应,为完善中药注射剂类过敏反应的筛选提供实验依据。方法 MTT法测定2种药物对细胞生长的IC50;采用不同浓度药物、C48/80或培养液分别刺激细胞30 min,检测上清液中组胺、β-氨基己糖苷酶释放率;另取刺激后的细胞,观察其脱颗粒率及超微结构变化。取ICR小鼠进行类过敏试验,以含伊文思蓝的药物或生理盐水单次尾静脉注射30 min,记录每组耳廓蓝染的动物数、蓝染总耳数及耳廓伊文思蓝渗出量。结果离体实验显示,清开灵、血塞通注射液的IC50均为12.5μL/mL;2种药物在较高浓度均能促进细胞释放组胺和β-氨基己糖苷酶(P<0.05,P<0.01),呈一定剂量依赖性;形态上可见细胞表面绒毛减少,内部空泡状结构增加。小鼠类过敏试验显示,2种药物对动物耳蓝染率均为100%、伊文思蓝渗出量明显增多(P<0.01)。离体与整体实验结果一致。结论清开灵、血塞通注射液具有潜在的致类过敏反应性,RBL-2H3细胞模型用于中药注射剂类过敏性评价具有一定的参考应用价值。

异甘草酸镁注射液致过敏样反应27例分析

目的：探讨异甘草酸镁注射液致过敏样反应发生的规律和特点,为临床合理用药提供参考。方法：对2014年1月-2015年3月期间湖南省药品不良反应（ADR）监测中心数据库收集到的27例异甘草酸镁注射液ADR报告进行回顾性分析。结果：27例异甘草酸镁注射液致过敏样反应的患者中,男性15例（55.56%）,女性12例（44.44%）,男女比例为1.25∶1;ADR多发生在41~60岁患者中（51.85%）;累及器官/系统主要为皮肤及其附件（35.85%）和全身性损害（26.42%）,主要临床表现为皮疹、瘙痒、呕吐、头晕、发热、寒战等;严重的ADR报告7例（25.92%）,主要表现为寒战、高热等全身症状;大部分ADR经相关处理后痊愈（40.74%）或好转（55.56%）。结论：异甘草酸镁注射液说明书中未见有严重过敏反应的风险提示,需加强对异甘草酸镁注射液上市后的安全性监测,并进一步完善企业药品说明书,以防范异甘草酸镁致严重的ADR的风险。

血塞通致RBL-2H3细胞与原代肥大细胞脱颗粒特性的比较

【目的】通过比较血塞通注射液等在类过敏试验中致RBL-2H3细胞与大鼠腹腔原代肥大细胞脱颗粒特性的异同,以评价2种细胞在中药注射液类过敏试验中的意义。【方法】选用已经明确能引起类过敏反应的3种供试品即血塞通注射液、Compound 48/80和吐温80,分别与RBL-2H3细胞和大鼠腹腔肥大细胞共同孵育1 h,通过β-氨基己糖苷酶释放率和组胺释放率、释放量等的检测,分析比较脱颗粒特性的异同,同时观察了不同浓度血塞通注射液对脱颗粒程度的影响。【结果】2种细胞在血塞通注射液、Compound 48/80和吐温80的直接刺激下均出现脱颗粒现象,脱颗粒程度与血塞通注射液呈剂量依赖性;原代肥大细胞β-氨基己糖苷酶释放率、组胺释放量和释放率均显著高于RBL-2H3细胞,2种细胞比较差异有统计学意义(P<0.01)。【结论】在类过敏反应脱颗粒试验中,RBL-2H3细胞和原代大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒具有相同趋势,均可用于中药注射液类过敏评价,RBL-2H3细胞应用方便,而肥大细胞更加敏感。

双黄连注射剂导致类过敏反应的特点

目的研究双黄连注射剂类过敏反应的特点。方法采用大鼠、犬和小鼠3种动物模型。雌性BN大鼠单次iv注射双黄连注射剂187.5,375(相当于临床剂量)和750mg·kg-1;雌性比格犬单次iv注射双黄连注射剂56.4,112.8(相当于临床剂量)和225.6mg·kg-1,用生理信号记录仪全程记录血压变化,并在给药前和给药后采集动脉血制备血清,分别用ELISA测定组胺、IgE和补体SC5b-9,C4b和Bb水平。给雌性小鼠单次尾静脉注射伊文思蓝溶液,15min后单次sc注射双黄连注射剂270,540(相当于临床剂量)和1080mg·kg-1,根据小鼠背部皮肤蓝斑面积和皮肤组织中伊文思蓝浓度,比较血管渗透性强弱,反映类过敏反应发生的严重程度。结果①大鼠实验,双黄连注射剂375和750mg·kg-1组血压明显降低(P<0.01),组胺升高(P<0.01),SC5b-9升高(P<0.05),且剂量越高变化值越明显;血清IgE,补体片段C4d和Bb水平未见明显变化。②比格犬实验,双黄连注射剂56.4,112.8和225.6mg·kg-1组血压明显降低(P<0.01),组胺升高(P<0.01),同时SC5b-9升高(P<0.01),C4d亦明显升高(P<0.01),且剂量越高变化越明显;IgE和Bb水平未见明显变化。③小鼠实验,双黄连注射剂270,540和1080mg·kg-1组小鼠皮肤出现明显的蓝斑浸润,皮肤组织浸提液中伊文思蓝浓度明显升高(P<0.01)。结论双黄连注射剂引起类过敏反应的特点是既可激活皮肤中的肥大细胞,又可激活血液中嗜碱性粒细胞,且具有补体介导的类过敏反应的特征。

双黄连粉针3种主要有效成分致动物类过敏性实验研究

目的:研究双黄连粉针中3种主要有效成分的致类过敏反应性。方法:采用体内、外方法同时对双黄连粉针中的3种主要有效成分的致肥大细胞脱颗粒作用及组胺和类胰蛋白胰释放作用进行评价。结果:双黄连粉针中3种主要成分均未引起肥大细胞产生严重脱颗粒反应,组胺和类胰蛋白酶水平与生理盐水组相比亦无显著性差异。结论:双黄连粉针3种主要有效成分绿原酸、黄芩苷、连翘苷均不能引起实验动物的类过敏反应。

非离子型冠脉造影剂致急性严重过敏样反应的病例分析

目的对非离子型冠脉造影剂引起的急性严重过敏样反应进行总结和分析。方法回顾总结2007年12月至2009年12月在我院进行冠状动脉造影和/或介入治疗的24314例患者,对发生冠脉造影剂引起的急性严重过敏样反应的病例进行研究,分析其临床特点。结果9例患者在接受非离子型碘造影剂血管内注射后1小时之内发生严重过敏样反应,发生率0.037%,其临床主要表现为血压突然降低,伴不同程度的心律失常,及其他系统的伴随症状。给予吸氧、补液以及大剂量应用升压药物(尤其是肾上腺素)和糖皮质激素等治疗可有效缓解症状。结论非离子型冠脉造影剂在临床应用中总的安全性良好,但在应用过程中应重视急性严重过敏样反应的识别与处理。