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BMP-2对室管膜前下区神经干细胞向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响 被引量:3
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作者 刘胜华 周政 +3 位作者 杨辉 刘俊 阴金波 辛志成 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期480-483,共4页
目的探讨骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响。方法体外培养SVZa NSCs,分为对照组、BMP-... 目的探讨骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响。方法体外培养SVZa NSCs,分为对照组、BMP-2组、BMP-2+Noggin组和Noggin组,通过免疫荧光染色和流式细胞术,观察其分化为酪氨酸羟化酶阳性(TH+)神经元的情况;用RT-PCR检测DLX5 mRNA表达水平。结果BMP-2组SVZaNSCs向TH+神经元分化的比例和DLX5 mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.05),且这种效应能被其拮抗剂Noggin特异性抑制。结论BMP-2可能通过上调DLX5表达水平从而促进SVZa NSCs向多巴胺能神经元分化。 展开更多
关键词 神经干细胞 室管膜前下区 多巴胺能神经元 DLX5 BMP-2
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Mash1在室管膜前下区神经干细胞向GABA能神经元分化中的作用 被引量:1
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作者 陈锦华 张治元 +1 位作者 尹昌林 杨辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期863-865,共3页
目的研究Mash1在室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞向γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)能神经元分化中的作用。方法体外分离培养新生0d昆明小鼠的SVZa神经干细胞,构建Mash1与绿色荧光蛋白(green flu... 目的研究Mash1在室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞向γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)能神经元分化中的作用。方法体外分离培养新生0d昆明小鼠的SVZa神经干细胞,构建Mash1与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)正义、反义融合蛋白表达质粒,转染SVZa神经干细胞,GFP活体荧光标记SVZa神经干细胞,采用流式细胞仪检测在Mash1作用下SVZa神经干细胞分化为神经元的比例和分化为GABA能神经元的比例。结果pEGFP-Mash1-质粒、pEGFP-Mash1+质粒双酶切鉴定构建成功,核转染结果表明:GFP融合蛋白表达阳性;pEGFP-Mash1+组SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显高于空白对照组(P<0.05);pEGFP-Mash1-组SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显低于空白对照组;pEGFP-Mash1+组SVZa神经干细胞分化为GABA能神经元的比例明显高于空白对照组(P<0.05);pEGFP-Mash1-组SVZa神经干细胞分化为GABA能神经元的比例明显低于空白对照组(P<0.05)。结论pEGFP-Mash1-质粒、pEGFP-Mash1+质粒构建成功;Mash1可以促进SVZa神经干细胞向神经元方向分化,而且主要表现为促进SVZa神经干细胞向GABA能神经元分化。 展开更多
关键词 Mash1 室管膜前下区 神经干细胞 分化
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高密度Oligo芯片筛选小鼠嗅球发育中DLX2相关基因
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作者 宋业纯 杨辉 +3 位作者 刘仕勇 何家全 张治元 邱克军 《中华神经外科疾病研究杂志》 CAS 2006年第5期414-417,共4页
目的筛选小鼠嗅球发育中调控同源盒转录因子2(DLX2)的相关基因,探讨室管膜前下区神经干细胞在嗅球中向多巴胺神经元分化的机制。方法利用16844点的高密度Oligo芯片检测发育期嗅球的基因表达情况,采用基因神经网络分析,筛选与DLX2相关的... 目的筛选小鼠嗅球发育中调控同源盒转录因子2(DLX2)的相关基因,探讨室管膜前下区神经干细胞在嗅球中向多巴胺神经元分化的机制。方法利用16844点的高密度Oligo芯片检测发育期嗅球的基因表达情况,采用基因神经网络分析,筛选与DLX2相关的基因。结果从2398个在4个时间点都表达的基因中筛选出623个差异基因,在相关系数设定为0.95水平上,共筛选出29个与DLX2相关的基因。29个基因中,已知功能的基因有13个,主要与代谢、凋亡、发育及信号传导功能相关,未知功能的基因有16个。结论在嗅球中可能有29个基因参与了DLX2的表达调控,对它们进一步的研究将有助于理解室管膜前下区神经干细胞在嗅球中向多巴胺神经元分化的机制。 展开更多
关键词 嗅球 同源盒转录因子2 神经干细胞 室管膜前下区
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重组质粒pEGFP-mDlx5的构建及其在SVZa神经干细胞中的表达研究 被引量:1
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作者 高方友 杨辉 +3 位作者 张治元 何家全 刘仕勇 邱克军 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期450-453,共4页
目的构建真核表达重组质粒pEGFP-mDlx5,并了解它在室管膜前下区(SVZa)神经干细胞(NSCs)中的mRNA及融合蛋白表达情况。方法运用DNA重组技术自原核表达载体上将小鼠来源的mDlx5基因克隆到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)载体上,并用双酶切、测... 目的构建真核表达重组质粒pEGFP-mDlx5,并了解它在室管膜前下区(SVZa)神经干细胞(NSCs)中的mRNA及融合蛋白表达情况。方法运用DNA重组技术自原核表达载体上将小鼠来源的mDlx5基因克隆到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)载体上,并用双酶切、测序进行鉴定;将重组质粒用电穿孔的方法转染SVZa NSCs,荧光显微镜下动态观察荧光变化情况;培养24h后提取转染细胞的总RNA及总蛋白,通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)了解其mRNA表达情况,用Western blot 检测其蛋白表达情况。结果重组质粒通过双酶切产生了0.78 kb目的插入片段及4.68 kb载体片段;测序后证实0.78 kb片段碱基序列与mDlx5基因完全同源;重组质粒转染SVZa NSCs 8 h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,12 h后逐渐增多,24-48 h达高峰,且稳定表达较长时间;24 h后通过 RT-PCR检测到mRNA表达,Western blot检测到58 kD目的蛋白表达。结论新构建的真核表达重组质粒pEGFP-mDlx5通过鉴定,结构正确:转染到SVZa NSCs后能在其中表达、发挥功能,为后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 重组质粒 绿色荧光蛋白 D1x5基因 室管膜前下区 神经干细胞
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Regulation of BMP4 on the proliferation and differentiation in SVZa neural stem cells
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作者 LIUShiyong ZHANGZhiyuan +6 位作者 SONGYechun QIUKejun ZHANGKecheng ANNing ZHOUZheng CAIWenqin YANGHui 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2004年第11期1126-1136,共11页
The neural stem cells in the anterior subventricula zone (SVZa) mainly generate the progenitors that will differentiate into neurons, and along a highly circumscribed migratory access-Rostral migratory stream (RMS), t... The neural stem cells in the anterior subventricula zone (SVZa) mainly generate the progenitors that will differentiate into neurons, and along a highly circumscribed migratory access-Rostral migratory stream (RMS), they migrate to the olfactory bulbs (OB). To understand the effects of BMPs on SVZa neural stem cells, in this study BMP4 at various concentrations was used to induce SVZa ,neural stem cells, aud the living cell labeling using BMP4 pronmtor conjugated with red fluorescence protein showed the expression of BMP4 dynamically. The results demonstrated that low BMP4 doses (1-5 ng/mL) promoted while high doses(10-100 ng/mL) inhibited the proliferation of SVZa neural stem cells, and BMP4 promoted neuron differentiation in the early stage (1-3 d), howeverm, it inhibited the neuron commitment after 4 d. Noggin, the antagonist of BMP4, blocked the physiological effects of BMP4. In OB, BMP4 is mainly to accelerate the progenitors to withdraw from the cell cycle and trigger the differentiation, and in RMS, it promotes the proliferation of committed progenitors and not differentiation, further in SVZa, BMP4 enhances astrocyte commitment. 展开更多
关键词 神经干细胞 分芽繁殖 骨形态发生蛋白 红荧光蛋白 绿荧光蛋白 前向次心室带
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