Design,synthesis and anti-HBV activity of novel bis(trifluoroethyl)phosphonomethyl ether derivatives of acyclovir

A series of novel bis（trifluoroethyl）phosphonomethyl ether derivatives of acyclovir was synthesized and their in vitro anti-HBV activity was evaluated in HepG2 2.2.15 cells. In contrast to acyclovir, most of the described phosphonates emerged as potent inhibitors of HBV replication. Especially, the most active compound 11 with IC50 value of 2.92 μmol/L was 33 times more potent than acyclovir with ICso value of 100 μmol/L.

Synthesis and anti-HBV activity of novel 5-substituted pyridin-2(1H)-one derivatives

Four novel 5-substituted pyridine-2(1H)-one derivatives were designed and synthesized by using addition-elimination reactions.The structures of these novelly synthesized compounds were verified by ~1H NMR,ESI-MS and single crystal X-ray diffraction.Furthermore,all four compounds(most notably compound 7a) were found to be highly efficient against hepatitis B virus (HBV) in cultured HepG2 2.2.15 cell,making them promising drug candidates for potential bioactive molecule against hepatitis B.

Synthesis and in vitro anti-hepatitis B virus activity of 1H-benzimidazol-5-ol derivatives

A series of 1H-benzimidazol-5-ol derivatives were synthesized and evaluated for their anti-hepatitis B virus(HBV) activity and cytotoxicity in HepG2.2.15 cells.Half of the tested compounds were found to be potent against HBsAg secretion with IC50 values less than 100μmol/L.Compounds 14c,14d,and 14e showed significant inhibitory activity to the viral antigen HBeAg.

Design, synthesis and in vitro evaluation of L-amino acid esters prodrugs of acyclic nucleoside phosphonates as anti-HBV agent

A series of novel L-amino acid esters prodrugs of acyclic nucleoside phosphonates was synthesized and their anti-HBV activity was evaluated in HepG2 2.2.15 cells. Compound 1d exhibited more potent anti-HBV activity and lower cytotoxicity than those of adefovir dipivoxil with EC50 and CC50 values of 0.207 μmol/L and 2530 μmol/L, respectively.

干扰素α-1b联合抗-HBV特异性主动免疫疗法治疗慢性乙型肝炎的临床研究

目的探讨普通干扰素α-1b(IFNα-1b)联合抗HBV特异性主动免疫疗法(SAI)治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者的疗效。方法292例诊断为有活动性病毒复制(HBeAg阳性、HBVDNA>1×106copies/ml),ALT≥2×ULN)的慢性乙型肝炎患者,随机分为A、B、C、D4组。A组用IFNα-1b加SAI联合治疗;B、C两组分别用IFNα-1b与SAI单一疗法;D组作为对照组用常规保肝治疗。治疗前及治疗后第12月比较各组患者HBVDNA、HBeAg血清学转换及ALT复常,并在大部分患者比较治疗前后肝组织Knodell炎症坏死与Ishak纤维化计分情况。结果在治疗终点,A、B、C、D4组HBVDNA达到测不出水平的百分率分别为64.8%、32.4%、30.8%与2.8%;HBeAg血清转换分别为41.6%、27.0%、16.6%与5.6%;ALT复常率分别为89.2%、70.3%、83.3%与44.4%;Knodell与Ishak计分缓解率分别为45.8%、18.8%、12.9%、0.0%与39.4%、34.4%、30.4%、0.0%。结论IFNα-1b加SAI联合疗法对有活动性病毒复制的慢性乙型肝炎患者的疗效优于IFNα-1b或SAI单一疗法。

4-氨基酸取代嘧啶核苷类化合物的抗HBV活性研究

以野生型乙型肝炎病毒(HBV)细胞株HepG2.2.15和拉米夫定耐药型HBV细胞株HepGRL1为模型,分别采用酶联免疫吸附检测(ELISA)法测定4-氨基酸取代嘧啶核苷类化合物(GY001-GY005)对乙型肝炎e抗原(HBeAg)和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的影响,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定4-氨基酸取代嘧啶核苷类化合物(GY001-GY005)对HepG2细胞的毒性,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测4-氨基酸取代嘧啶核苷类化合物(GY001-GY005)对细胞上清液中和胞内HBV DNA拷贝数的影响.结果显示,在HepG2.2.15细胞和HepGRL1细胞中,GY001,GY002,GY003,GY004,GY005对细胞上清和细胞内HBV DNA均有非常好的抑制作用,效果优于拉米夫定(3TC),且没有表现出明显的耐药性;GY001,GY002,GY003,GY004,GY005对HepG2细胞的毒性均较小,其中GY002和GY005的半数细胞毒性浓度(CC 50)>1000μmol/L,GY001和GY003的CC 50分别为963.69μmol/L和994.49μmol/L,GY004的毒性相比稍大,CC 50为545.12μmol/L.

吡咯[2,3-d]嘧啶核苷单磷酸酯的合成和抗HBV活性

以4-取代-9-(2′-脱氧-2′-β-氟-β-D-呋喃糖基)吡咯[2,3-d]嘧啶类化合物为原料,与三氯氧磷一锅法合成出具有新型结构的吡咯[2,3-d]嘧啶核苷单磷酸酯类化合物,其化学结构经核磁共振磷谱(31P NMR)、核磁共振氢谱(1 H NMR)、高分辨质谱(HRMS)分析确证;对合成的目标化合物进行了初步的体外抗乙肝病毒药理活性实验,结果显示设计合成的7个化合物对乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)都有一定的抑制作用,其中化合物3a,3d,3f对HBsAg和HBeAg的抑制率较高,3a的毒性较低.

4-氯苯甲酸取代马蹄金素衍生物的合成及其抗HBV活性研究

目的设计和合成含4-氯苯甲酸取代马蹄金素(Matijin-Su,MTS)衍生物,以期寻找到抗乙肝病毒(HBV)活性更强的MTS衍生物。方法以马蹄金素为先导化合物,通过引入4-氯苯甲酸取代,设计合成一系列MTS衍生物并对其进行抗HBV活性测试。结果设计合成了4-氯苯甲酸取代的MTS衍生物11个(3、4a、4b、4c、4d、4e、4f、4g、4h、4i、5),其中化合物4b、4d、4e、4h表现出良好的抗HBV活性,IC50分别为9.19、15.30、13.48、14.90μmol·L-1。结论 4-氯苯甲酸取代的MTS衍生物具有更强的抗HBV活性,具有进一步研究的价值。

血根碱、白屈菜红碱衍生物的合成与体外抗HBV活性研究

目的合成季铵类苯并菲啶生物碱血根碱(1)和白屈菜红碱(2)的衍生物,评价其体外抗HBV活性,初步探讨抗HBV活性。方法以血根碱和白屈菜红碱为原料,通过结构修饰获得衍生物,采用Hep G2.2.15细胞模型评价衍生物对HBsAg和HBeAg分泌抑制活性和HBV DNA复制的抑制活性。结果血根碱和白屈菜红碱对HBsAg、HBeAg和HBV DNA复制具有较高的抑制活性,但细胞毒性较高。氧化白屈菜红碱(6)对HBV DNA的复制具有一定的抑制作用(IC50=0.75 mmol·L-1),细胞毒性较白屈菜红碱明显降低(CC50>3.0 mmol·L-1)。6-乙氧基二氢血根碱(7)和6-乙氧基二氢白屈菜红碱(8)对HBsAg和HBeAg和HBV DNA复制具有一定的抑制活性。结论季铵类苯并菲啶生物碱具有显著的体外抗HBV活性,烯胺正离子结构单元对化合物的抗HBV活性产生重要的影响。

人白细胞介素29在cos-7细胞中表达及其体外抗乙型肝炎病毒作用

目的：克隆人细胞因子IL-29全长cDNA及其在cos-7细胞中表达，并初步探讨表达产物体外抗乙肝病毒（HBV）作用。方法：分离外周血单个核细胞；VSV感染后，提取总RNA，通过一步法RT-PCR获得IL-29全长cDNA。DNA测序正确后，将IL-29 cDNA的编码框序列构建到真核表达载体psectagB/His-myc中。氨苄青霉素板筛选及PCR鉴定，挑出阳性克隆进行扩增、转染cos-7细胞并经潮霉素及有限稀释法筛选稳定表达克隆。SDS-PAGE、Western blot鉴定，Ni2＋亲和层析分离纯化得到主带分子量为33000组氨酸标签重组人IL-29融合蛋白。体外以HepG2.2.2.15为靶细胞观察rhIL-29对HepG2.2.2.15培养上清液中HBV表面抗原（HBsAg）及e抗原（HBeAg）影响。结果：成功获得人IL-29全长cDNA并在cos-7细胞中稳定表达。SDS-PAGE、Western blot分析显示表达的rhIL-29融合蛋白为几个蛋白质区带，分子量在20000-33000之间纯化的rhIL-29融合蛋白，主带在33000附近。rhIL-29融合蛋白具有抑制HBsAg及HBeAg分泌作用并且具有剂量效应，抑制率分别达85%。结论：获得具有生物活性的rhIL-29融合蛋白。rhIL-29融合蛋白在体外具有抑制HepG2.2.2.15细胞分泌HBsAg及HBeAg作用。

马蹄金素衍生物的合成及其抗HBV活性研究

目的对马蹄金素[N-(N-苯甲酰基-L-苯丙氨酰基)-O-乙酰基-L-苯丙氨醇,MTS]进行结构修饰,以期寻找到抗乙肝病毒(HBV)活性更强、毒性更低的马蹄金素衍生物。方法以马蹄金素为先导化合物进行结构优化,合成一系列不同取代基团的马蹄金素衍生物并对其进行抗HBV活性测试。结果合成了马蹄金素衍生物共计9个,经体外活性筛选结果显示有4个衍生物具有抗HBV活性,4a(IC50:24.20μmol·L-1,SI:3.69)、5f(IC50:252.60μmol·L-1,SI:>3.96)、5g(IC50:0.82μmol·L-1,SI:52.57)、5h(IC50:1.44μmol·L-1,SI:59.97)。结论化合物5g和5h显示较强的抗HBV活性,选择指数较高,具有进一步研究开发的价值。

金丝草化学成分及其体外抗HBV活性

目的研究金丝草的化学成分及其体外抗HBV活性。方法金丝草70%乙醇提取物的乙酸乙酯和正丁醇部位采用AB-8大孔树脂、硅胶、Sephadex LH-20进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。HepG2.2.15细胞模型法测其体外抗HBV活性。结果从中分离得到8个化合物,分别鉴定为6,8,4'-三羟基-7,3'-二甲氧基异黄酮(1)、槲皮素-7,4'-二甲醚-5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、8-[1-(3,4-二羟基苯基)乙基]槲皮素(3)、金圣草素-7-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、山柰酚-3-O-(2″,3″-二-O-E-p-香豆酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷(5)、1,3,7-三羟基呫吨酮-2-C-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、木犀草素-6-C-β-D-吡喃波依文糖苷(7)、木犀草素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)。化合物3、5、7、8对细胞分泌表面抗原(HBsAg)有一定的抑制作用,IC50分别为96.6、127.1、72.4、54.5μg/m L;化合物7、8对细胞分泌e抗原(HBe Ag)有一定的抑制作用,IC50分别为81.0、61.3μg/m L。结论化合物1~6为首次从金发草属植物中分离得到,化合物3、5、7、8有一定的体外抗HBV活性。

HBV和/或HCV协同感染与接受HAART治疗HIV/AIDS患者肝损害之间的关系研究

目的探讨接受HAART治疗的HIV/AIDS患者肝损害的相关危险因素。方法收集接受HAART治疗的71例HIV/AIDS患者病例资料,比较两组患者的年龄、性别、感染途径、饮酒状况、CD4+T细胞数、HAART治疗方案、肝毒性药物的使用、HBV和/或HCV协同感染等对肝功能的影响。结果71例患者中HBV感染者9例,HCV感染者35例,其中HBV、HCV共同感染者5例;51例患者出现了肝功能异常。肝功能异常组与肝功能正常组HBV和/或HCV协同感染比率分别为63%和35%,差异有统计学意义(P=0.035),年龄、性别、感染途径、饮酒状况、CD4+T淋巴细胞数(<50)、HAART治疗方案、使用肝毒性药物的比率差异无统计学意义(P>0.05)。Logist回归分析HBV和/或HCV的协同感染是HAART患者肝功能损伤的危险因素。结论HBV和/或HCV与HIV的协同感染十分普遍,是HAART治疗HIV/AIDS患者肝功能损伤的重要危险因素。

7-羟基喹啉-3-羧酸乙酯类化合物的合成及体外抗乙肝病毒活性

目的设计合成一系列7-羟基喹啉-3-羧酸乙酯类化合物,并对其抗乙肝病毒活性进行初步评价。方法以香兰醛为起始原料,经7-9步反应合成目标化合物;测定目标化合物对HepG2.2.15细胞中乙肝病毒的抑制作用及其细胞毒性。结果与结论共合成12个新化合物,其结构经MS、IR和1H-NMR谱确证。体外活性测试表明,多数化合物显示出不同程度的乙肝病毒抑制活性,其中,化合物11a、12c的活性优于对照药拉米夫定。

白楸化学成分及其体外抗HBV活性

目的研究白楸Mallotus paniculatus(Lam.)Muell.Arg.的化学成分及其体外抗HBV活性。方法白楸70%乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。利用HepG2.2.15细胞系对其进行体外抗HBV活性测试。结果从中分离得到15个化合物,分别鉴定为β-香树脂酮(1)、高根二醇-3-醋酸酯(2)、软木三萜酮(3)、8-[1-(3,4-二羟基苯基)乙基]-槲皮素(4)、鞣花酸(5)、乙酰基油桐酸(6)、4-O-甲基没食子酸(7)、没食子酸(8)、异它乔糖苷(9)、mananthoside I(10)、洋芹素-7-O-β-D-(6″-O-乙酰基)-葡萄糖苷(11)、turpinionoside A(12)、corymboside(13)、hovetrichoside A(14)、1,6-二-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖(15)。化合物4、8对HepG2.2.15细胞分泌表面抗原HBsAg有一定抑制作用,IC_(50)分别为(95.8±2.6)、(82.7±3.1)μg/mL;化合物15对细胞分泌E抗原HBeAg的分泌有显著抑制作用,IC_(50)为(12.9±1.7)μg/mL。结论所有化合物均为首次从该植物中分离得到,化合物4、8、15有一定的体外抗HBV活性。

双溴代马蹄金素衍生物的合成及其抗HBV活性

目的合成马蹄金素[N-(N-苯甲酰基-L-苯丙氨酰基)-O-乙酰基-L-苯丙氨醇,MTS]的类似物,以期寻找到高效低毒的抗乙肝病毒化合物。方法以6,8-二溴-L-酪氨酸为起始原料,通过酯化、酰化、水解、烷基化等反应,合成马蹄金素衍生物并对其进行体外抗乙肝病毒活性测试。结果合成了11个双溴取代的马蹄金素衍生物,在人肝癌细胞HepG2.2.15上对其中的9个化合物进行活性测试,其结果显示,化合物5c、5d、7b、7c在8μg·mL-1的浓度下具有较好的抑制活性,其抑制率分别为44.8%、48.8%、37.3%、38.4%。结论化合物5a在20μg·mL-1的浓度下具有较高的抑制活性,其抑制率达到89.8%,具有进一步研究开发的价值。

HIV合并HBV感染者启动HAART后肾功能损害情况及影响因素分析

目的了解人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)合并乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者启动高效抗逆转录病毒治疗(highly active anti-retroviral treatment,HAART)后肾功能损害情况,并分析其影响因素。方法回顾性分析2010-01~2015-06广西启动HAART的3 395例HIV合并HBV感染者,采用Logistic回归模型分析启动治疗第12个月肾功能损害发生的影响因素。结果研究对象在启动HAART后第12个月的肾功能损害发生率为14.76%。服用含克力芝的一线治疗方案(AOR=4.19,95%CI=2.76~6.38)及启动治疗时WHO分期为3/4期(AOR=1.86,95%CI=1.49~2.33)是治疗后第12个月发生肾功能损害的危险因素。与启动治疗时CD4计数<200个/μL者相比,启动治疗时CD4计数为200~349个/μL(AOR=0.66,95%CI=0.50~0.85)、350~499个/μL(AOR=0.54,95%CI=0.34~0.84)、≥500个/μL者(AOR=0.36,95%CI=0.18~0.74)治疗后第12个月肾功能损害风险较低。结论HIV合并HBV感染者应尽早启动HAART,选择含替诺福韦的一线治疗方案可以有效降低治疗第12个月肾功能损害风险。

烷氧基取代的马蹄金素衍生物的设计、合成及抗HBV活性评价

目的合成并考察11个烷氧基取代的马蹄金素衍生物的抗HBV活性。方法以L-酪氨酸氨酸甲酯盐酸盐为起始原料,经过与苯甲酸缩合反应、水解反应,再与L-苯丙氨醇或L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐缩合得到关键中间体4a^b,随后与二甲胺基氯乙烷盐酸盐发生取代反应、乙酰化反应制备目标化合物;或4a^b经过与1,2-二溴乙烷烷基化后与胺类反应得到目标化合物;采用MTT法评价目标化合物的细胞毒性,斑点杂交法检测细胞中HBV DNA复制程度,分别计算IC50及选择指数(s elective index,SI)。结果设计合成了11个含烷氧基侧链的马蹄金素衍生物,并评价其抗HBV活性。结论化合物6(IC50:2.18μmol·L-1,SI:74.10)对HBV DNA复制的抑制活性显著好于先导物MTS(IC50:11.16μmol·L-1,SI:10.78),且具有更高的SI,具有进一步研究的价值。

5-取代嘧啶开环核苷膦酸酯类化合物的合成及其抗病毒活性研究

目的:设计合成5-取代嘧啶开环核苷膦酸酯类新化合物并进行体外抗病毒活性实验。方法:氯甲基氯乙基醚与三氟乙醇磷酸酯缩合后,经碘-氯交换得碘代乙氧基甲基三氟乙醇膦酸酯侧链,和5-取代嘧啶在DBU作用下缩合,氯甲酸酯酰胺化,设计合成得到8个新化合物1 a^1 h。对合成的目标化合物进行了初步的体外抗乙肝病毒药理活性实验。结果:设计合成的8个化合物对HBsAg和HBeAg都有一定的抑制作用,其中化合物1d的抑制活性优于拉米夫定。结论:5-取代嘧啶开环核苷膦酸酯类化合物保持抗病毒活性,N6位长链脂肪氯甲酸酯取代的化合物抗HBV病毒活性较好。

新型常春藤皂苷元衍生物的合成及其体外抗HBV活性

以常春藤皂苷元为原料,对其3,23-羟基和28-羧基进行乙酰化、醚化、苯甲酰化及酯化等反应合成了8个常春藤皂苷元衍生物(2~9),其中6个未见文献报道,其结构经~1H NMR,^(13)C NMR,IR和MS表征。采用MTT法测定了2~9的体外抗HBV活性。结果表明:3~9随浓度增大,对细胞活力的抑制率明显增加,特别是7和9抑制率最明显,用药浓度为1×10-6mol·L^(-1)时,抑制率均为9.46±0.47%。对2~9抑制HepG2.2.15细胞表达表面抗原(HBsAg)进行了测试。结果表明:2~9对HBs Ag的分泌表达有一定的抑制作用。