LncRNA MYLK-AS1调节miR-141-3p/STMN1轴对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)肌球蛋白轻链激酶反义RNA1(myosin light chain kinase antisense RNA1,MYLK-AS1)调节miR-141-3p/微管不稳定蛋白1(stathmin 1,STMN1)轴对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:将HGC27细胞分为NC组、si-NC组、si-MYLK-AS1组、si-MYLK-AS1+inhibitor NC组、si-MYLK-AS1+miR-141-3p inhibitor组。双萤光素酶报告基因实验检测LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p、STMN1的关系;qRT-PCR检测HGC27细胞中LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p表达;CCK-8法检测HGC27细胞增殖情况;流式细胞术检测HGC27细胞凋亡;使用Transwell实验评估了HGC27细胞的侵袭和迁移能力,并统计了穿透基质膜的细胞数量;同时采用Western blot技术检测了HGC27细胞中STMN1、E-cadherin、Vimentin及N-cadherin这几种蛋白表达量的变化。结果:HGC27细胞中LncRNA MYLK-AS1、STMN1水平高于GES-1细胞(P<0.05),miR-141-3p水平低于GES-1细胞(P<0.05)。si-MYLK-AS1组HGC27细胞A_(450 nm)值、迁移、侵袭细胞数量、LncRNA MYLK-AS1表达量、STMN1、N-cadherin、Vimentin蛋白水平低于NC组、si-NC组(P<0.05),HGC27细胞凋亡率、miR-141-3p表达量、E-cadherin蛋白水平高于NC组、si-NC组(P<0.05);而miR-141-3p低表达减弱了沉默LncRNA MYLK-AS1抑制HGC27细胞发展的作用;LncRNA MYLK-AS1靶向调节miR-141-3p/STMN1轴。结论:LncRNA MYLK-AS1可能通过上调microRNA-141-3p的表达水平,间接导致STMN1基因表达受到抑制,这一过程可能对胃癌细胞的增殖、凋亡及侵袭特性产生明显影响。

肝癌细胞特异性IL-1β反义RNA对小鼠移植肝癌的抑制

目的:构建肝癌细胞特异性小鼠IL-1β反义RNA表达载体,观察其对H22肝癌细胞小鼠移植瘤生长的影响及其相关机制。方法:构建由AFP最小启动子和CMV增强子嵌合序列调控的携IL-1β反义RNA表达载体pafpIRES2-antiIL-1β1和pafpIRES2-antiIL-1β2,经质粒PCR、限制性酶谱分析、序列测定进行鉴定。反义RNA表达载体转染小鼠H22肝癌细胞,分H22/mock组、H22/antiIL-1β1组、H22/antiIL-1β2三组,RT-PCR检测IL-1β的表达水平。以转染后的H22细胞皮下接种建立荷肝癌小鼠模型,观察移植瘤体积和重量,MTT法检测荷瘤小鼠脾脏中分离的NK细胞对H22细胞的杀伤活性。结果:经质粒PCR、限制性酶谱分析、序列测定证实成功构建能够在肝癌细胞中特异性表达IL-1β反义RNA的表达载体pafpIRES2-anti-IL-1β1和pafpIRES2-antiIL-1β2,转染H22细胞后细胞中IL-1β表达水平明显下降,以pafpIRES2-antiIL-1β2更为显著。成功建立荷肝癌小鼠模型,与H22/mock组小鼠相比,H22/antiIL-1β2组小鼠移植瘤体积较小,生长显著减慢(P<0.05)。H22/anti-IL-1β1、H22/antiIL-1β2组荷瘤小鼠的NK细胞对H22细胞的杀伤活性明显增强(P<0.05或P<0.01)。结论:成功构建的肝癌细胞特异性IL-1β反义RNA表达载体可有效抑制小鼠移植肝癌的生长,其机制与靶向阻断IL-1β表达、上调NK细胞的杀伤活性有关。

血清lncRNA HOTAIR和miR-206表达水平与急性呼吸窘迫综合征患者病情严重程度及预后的关系

目的探讨血清长链非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义基因间RNA(HOTAIR)、miR-206表达水平与急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者病情严重程度及预后的关系。方法选取110例ARDS患者,依据其入院时的氧合指数[PaO_(2)/吸入氧比例(FiO_(2))]分为ARDS轻度组37例、ARDS中度组41例、ARDS重度组32例,并根据入院28 d内的临床结局将其分为生存组74例和死亡组36例。比较不同病情严重程度及不同临床结局ARDS患者的一般资料及临床资料,血清HOTAIR、miR-206表达水平,采用COX回归模型分析ARDS患者入院28 d内死亡的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清HOTAIR和miR-206表达水平对ARDS患者入院28 d内死亡的预测效能,采用Pearson法对血清HOTAIR与miR-206表达水平进行相关性分析。结果ARDS轻度组、ARDS中度组、ARDS重度组患者的呼气末正压通气(PEEP)、急性生理与慢性健康评价Ⅱ(APACHEⅡ)评分及血清HOTAIR表达水平均依次升高,而血清miR-206表达水平依次降低(均P<0.05)。与生存组相比,死亡组患者的APACHEⅡ评分、PEEP及血清HOTAIR表达水平均更高,而PaO_(2)/FiO_(2)及血清miR-206表达水平均更低(均P<0.05)。COX回归分析结果显示,APACHEⅡ评分、PaO_(2)/FiO_(2)及血清HOTAIR表达水平、血清miR-206表达水平均是ARDS患者入院28 d内死亡的影响因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清HOTAIR表达水平、血清miR-206表达水平及两者联合预测ARDS患者入院28 d内死亡的曲线下面积分别为0.845、0.837、0.943,特异度分别为87.80%、71.60%、89.20%,敏感度分别为75.00%、83.30%、91.70%。Pearson相关性分析结果显示,ARDS患者血清HOTAIR的表达水平与血清miR-206的表达水平呈负相关(P<0.05)。结论血清HOTAIR、miR-206的表达水平与ARDS患者的病情严重程度及预后密切相关,血清HOTAIR表达水平升高及血清miR-206表达水平降低均是ARDS患者入院28 d内死亡的危险因素,且ARDS患者血清HOTAIR表达水平与血清miR-206表达水平呈负相关,二者联合检测对ARDS患者的预后具有较好的预测价值。

血浆CA19-9、lncRNA HOTTIP水平对胰腺癌的诊断价值

目的探讨血浆糖类抗原19-9(CA19-9)、长链非编码RNA(lncRNA)HOXA末端转录本反义RNA(HOT⁃TIP)水平对胰腺癌的诊断价值。方法选择胰腺癌患者79例(胰腺癌组)、胰腺炎患者63例(胰腺炎组)、体检健康的志愿者50例(对照组),采集各组清晨空腹肘静脉血,离心留取血浆,采用ELISA法检测血浆CA19-9,采用RTRCR法检测血浆lncRNA HOTTIP。比较三组血浆CA19-9、lncRNA HOTTIP水平,分析血浆CA19-9、lncRNA HOTTIP水平与胰腺癌患者临床病理特征的关系以及二者之间的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血浆CA19-9、lncRNA HOTTIP水平对胰腺癌的诊断价值。结果胰腺癌组血浆CA19-9、lncRNA HOTTIP水平均明显高于胰腺炎组和对照组(P均<0.05),而胰腺炎组与对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。血浆CA19-9、lncRNA HOTTIP水平与胰腺癌肿瘤直径、TNM分期有关(P均<0.05),与性别、年龄、BMI、吸烟史、饮酒史、淋巴结转移无关(P均>0.05)。Pearson相关分析显示,胰腺癌患者血浆CA19-9水平与血浆lncRNA HOTTIP水平呈正相关关系(r=0.570,P<0.05)。ROC曲线分析显示,血浆CA19-9、lncRNA HOTTIP水平联合时诊断胰腺癌的曲线下面积明显高于血浆CA19-9、lncRNA HOTTIP水平单独时(Z分别为3.010、2.174,P均<0.05)。结论胰腺癌患者血浆CA19-9、lncRNA HOTTIP水平升高,二者水平升高与胰腺癌病情进展密切相关;血浆CA19-9、lncRNA HOTTIP水平对胰腺癌的诊断均具有一定价值,二者联合时诊断价值更高。

核苷酸切除修复基因XPD反义RNA表达载体的构建及功能研究

目的 构建核苷酸切除修复基因XPD反义RNA表达载体 ,初步探讨其对肺癌细胞DNA损伤修复能力及药物敏感性的影响。方法 通过RT PCR技术获取XPDcDNA (2～ 6 6 7bp)片段并反向插入真核 7表达载体反义载体pcDNA3 1,采用脂质体法将构建的载体质粒转染肺癌细胞株A5 4 9,经G4 18筛选 ,采用抗肿瘤药物阿霉素、顺铂对细胞进行染毒干预 ,干预结果采用SCGE和MTT综合判定。结果 转染细胞XPDmRNA表达受到抑制。单细胞凝胶电泳显示转染细胞DNA损伤修复能力降低。MTT法显示转染细胞药物敏感性增高。结论 XPD反义RNA能降低肺癌细胞DNA损伤修复能力 。

用反义RNA技术创造高直链淀粉玉米材料

【目的】利用反义RNA技术调控玉米淀粉的生物合成过程,创造高直链淀粉玉米材料。【方法】克隆玉米淀粉分支酶(sbe2a)基因片段,以载体pWGLL为基础,构建高效反义表达载体,通过花粉管通道法将其导入玉米自交系铁7922中。【结果】获得了4株转基因株系,GFP表达检测、PCR扩增和Southern杂交结果表明,目的基因已整合到基因组中,且能够遗传。对4株转基因植株进行RT-PCR和淀粉分支酶活性检测,结果表明转反义sbe2a玉米淀粉分子酶基因的转录受到了明显抑制,淀粉分支酶活性明显低于野生型,相差最多的降低79.4%;直链淀粉含量也发生明显的变化,最高的提高了84.3%,且总淀粉含量与对照之间基本没有差异。【结论】采用反义RNA技术通过沉默内源sbe2a,可获得高直链淀粉含量的玉米材料。

包载反义RNA重组腺病毒微球的制备及逆转肝癌的体内外效果

目的:构建携带反义多药耐药相关蛋白(MRP)基因的重组腺病毒微球,了解包载反义RNA重组腺病毒微球逆转肝细胞癌MRP的治疗效果. 方法:采用可降解的生物材料聚乳酸-聚乙烯醇(PELA) 包被携带反义MRP基因的重组腺病毒制成微球,体外测定微球的粒径、载病毒量、包封率及释放规律,并用其转染人肝癌耐药细胞株HepG2/ADM,48 h及120 h后检测转染细胞荧光强度.MTT法检测耐药细胞的阿霉素半数致死量(IC50);流式细胞仪检测细胞内红色荧光强度;以β-actin为内参照,以RT-PCR法观察转染后MRPmRNA表达量的高低.观察经肝动脉注射rAdV微球后肿瘤体积大小、生长率及平均生存时间. 结果:成功构建了携带反义MRP基因的重组腺病毒微球,直径约1.765 μm,包封率为52.4%,载病毒率为5.5×1011efu/g,在120 h内释放病毒量接近50%, 总的释放时间长于240 h.释放出的病毒保持活性, 10 mg微球48 h对HepG2/ADM耐药细胞株转导效率可达90%以上.HepG2/ADM细胞48 h及120 h阿霉素IC50为9.72,4.15 ug;以HepG2细胞内DNR的荧光强度为对照,rAdv微球组转染后120 h与HepG2/ ADM及rAdv组比较,细胞内DNR浓度有所升高(168.6±6.97 vs 98.39±6.17;168.6±6.97 vs 112.52±9.21,t=13.68及9.69,P=0.001及0.001<0.01).诱导后HepG 2/ADM MKP高表达,转染Adv微球后48 h及120 h,MRPmRNA的表达强度较转染前明显降低,以120 h表达最弱.转染Adv微球后120 h与48 h相比,MRPmRNA/β-actin的比值分别较转染前降低16.7% 及63.6%;120 h较转染AdV48 h表达降低26.25%. 治疗组vs对照组,生理盐水组,空白微球组及rAdv 组(n=4),肿瘤生长率显著降低(0.96±0.25 vs 8.79±0.34;4.82±0.30;4.67±0.67;2.97±0.29,t=36.10, 24.43.12.28及13.81,P=0.0001,0.0009, 0.001及0.001<0.05).平均生存时间显著延长(43.6±7.4 vs 23.4±3.2;25.3±3.7;26.5±4.1;33.7±2.9, t=5.521,4.599,4.522,2.796,P=0.005,0.007, 0.007及0.049<0.05). 结论:聚乳酸-聚乙烯醇共聚物(PELA)包载反义RNA 重组腺病毒制备的微球,可有效抑制MRP的表达提高耐药细胞对化疗药物的敏感性,这为高分子化学与基因治疗的结合提供了临床应用的理论基础.

视黄酸依赖反义cyclin D1对HL-60细胞分化效应研究

目的 检测视黄酸 (Retinoicacid ,RA)依赖反义cyclinD1表达载体转染HL 6 0细胞后启动的诱导分化效应 ,并探讨其分子机制。方法 成功构建视黄酸依赖反义cyclinD1表达载体 ,以脂质体转染HL 6 0白血病细胞 ,经NBT还原实验、免疫荧光检测CD14表面抗原表达、RT PCR以及Westernblot等方法观测视黄酸处理后细胞分化效应的发生以及Rb基因的mRNA和蛋白表达水平的改变。结果 反义cyclinD1转染和未转染的HL 6 0细胞经RA处理后 ,NBT还原能力明显增强、CD14表面抗原表达显著增加 ,Rb基因的mRNA和蛋白表达水平均有所降低 ,其中 ,以反义cyclinD1转染细胞经RA处理后变化更为明显。结论 RA及其诱导的反义cyclinD1可协同诱导HL 6 0细胞分化成熟 。

RNA抑制技术在神经干细胞研究中的应用

神经干细胞是在神经系统中发现的一种可以再生的细胞,不仅具有自我复制能力,还可以分化为神经元、星状胶质细胞和少突胶质细胞,对研究神经退行性疾病和神经系统的发育过程产生很大的影响,因而在国际上形成了一个研究热点,但其增殖、分化乃至迁移的机制仍有待解决.RNA抑制技术是目前流行的基因沉默法,利用导入小片段核酸进入细胞,对特定基因表达的翻译阶段进行抑制,从而观察基因对细胞的影响.该文在已获得分化相关基因的基础上,利用RNA干扰(RNAi)和反义RNA(antisenseRNA)法检测几个基因对神经干细胞的影响.

CTGF反义RNA对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的应用反义RNA技术特异性下调结缔组织生长因子(CTGF)的表达,观察其对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响,并探讨其作用机制。方法培养原代VSMC,使用脂质体法将携带有CTGF反义RNA的真核表达载体pcDNA3.1(+)-CTGF(-)转染入VSMC,Western Blot技术观察CTGF的表达以及蛋白激酶B(Akt)的活性,MTT法及划痕试验测定VSMC增殖和迁移情况。结果pcDNA3.1(+)-CTGF(-)转染VSMC后CTGF的表达明显降低,Akt的活性降低,VSMC的增殖和迁移受到明显抑制。结论应用反义RNA技术可特异性下调CTGF表达,并通过降低Akt的活性抑制VSMC的增殖和迁移。

抑制移植排斥的新途径——CⅡTA反义RNA的生物学活性

为了探讨CⅡTA的反义RNA对细胞表面主要组织相容性复合物(majorhistocompatibilitycomplex,MHC,亦称HLA)Ⅱ类抗原表达的抑制作用,克隆与人类CⅡTA基因第114-523位点之间序列互补的反义RNA(arCⅡTA)cDNA序列,并稳定转染Raji细胞,用流式细胞术检测经典MHCⅡ类抗原(HLADR、DP、DQ)表达,并应用RTPCR方法检测CⅡTA、经典MHCⅡ类及恒定链的mRNA水平。研究结果表明:arCⅡTA阳性Raji细胞与正义链组比较,HLADR、DP及DQ抗原表达分别降低了65.93%、54.14%、68.32%;同时CⅡTA、经典的MHCⅡ类及恒定链的mRNA含量均明显减少(P<0.05)。结论:CⅡTA反义RNA抑制了自身mRNA含量,从而阻止其调控的MHCⅡ类分子的表达,为移植物抗宿主病的研究提供了一种新方法。

长链非编码RNA在喉癌中的研究进展

喉癌是较常见的恶性肿瘤之一,目前的治疗手段大多会影响患者的生存质量,如何尽早发现并治疗该疾病是当前面对的重要难题。如长链非编码RNA(LncRNA),广泛存在于细胞间质与细胞器中,其长度为200~1 000 bp,可以在特定的生理状态和生物过程中表达,参与遗传修饰的调控,LncRNA在转录和转录后水平参与了细胞的发生、发展过程,部分LncRNA也可作为喉癌早期诊断指标或评价喉癌预后的标志物。因此,LncRNA可作为肿瘤治疗新的靶点,并有助于为患者预后做出准确判断。

FasL反义RNA抑制人T淋巴细胞致凋亡作用的研究

目的 :探讨反义RNA抑制活化T淋巴细胞FasL的表达及其对Fas阳性细胞的致凋亡作用 ,为FasL反义RNA的应用提供实验依据。方法 :获得FasL反义RNA重组逆转录病毒 ,调整感染滴度后转染活化人外周血单个核细胞 (HPBMC)。采用流式细胞仪检测转染细胞表面FasL的表达以及对Fas+HL 60细胞的致凋亡能力。结果 :空病毒载体的重复转染上调活化HPBMCFasL的表达 ,但转染重组病毒能有效抑制活化HPBMC表达FasL ,表达率由13 93 %下降至 7 19% ;FACS检测HL 60细胞的凋亡显示 ,转染重组病毒使活化HPBMC对HL 60细胞的致凋亡作用明显下降 ,凋亡率由 3 3 48%降为 17 2 8%。结论 :FasL反义RNA能有效抑制活化淋巴细胞表达FasL及由其介导的凋亡作用 。

GPR40反义RNA对胰岛β细胞内Ca^(2+)浓度及胰岛素分泌的影响

目的应用反义RNA技术特异性下调胰岛β细胞G蛋白耦联受体(GPR40)的表达,观察其对胰岛β细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)及胰岛素分泌的影响。方法体外分离SD大鼠胰岛β细胞,将GPR40反义RNA表达载体pcDNA3.1(+)-GPR40(-)用脂质体体外瞬时转染胰岛细胞,Western blot检测GPR40蛋白的表达,将1.0 mmol/L游离脂肪酸(软脂酸∶油酸=2∶1)与胰岛细胞共培养10,30,60 min,进行高葡萄糖刺激胰岛素释放试验,利用荧光探针Fura-2/AM,测定胰岛细胞[Ca2+]i变化,放射免疫法检测培养液中胰岛素浓度变化。结果与对照组和空白质粒转染组比较,GPR40反义RNA可显著降低细胞GPR40蛋白的表达水平(P<0.05),在各作用时间点,GPR40反义RNA转染组[Ca2+]i显著低于对照组(P<0.05),同时GPR40反义RNA转染组胰岛细胞的胰岛素分泌明显低于对照组(P<0.05)。结论 GPR40介导游离脂肪酸刺激β细胞内[Ca2+]i升高和胰岛素分泌。

长链非编码RNA与鼻咽癌发生发展的研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA),即长度大于200nt的RNA分子,被发现在转录及转录后水平参与调控基因表达,参与遗传修饰的调控,部分lncRNA在鼻咽癌的发生发展中起到一定调控作用,并可能成为鼻咽癌预后的标志物。本文就肿瘤相关lncRNA在鼻咽癌中的作用进行简单综述。

长链非编码RNA HOTAIR在肝细胞癌中表达研究

目的观察HOTAIR在肝细胞癌组织、癌旁正常组织和肝硬化组织中的表达情况,并探究HOTAIR的表达与肝细胞癌患者的临床病理特征的相关性。方法利用qRT-PCR方法检测31例肝细胞癌组织、17例癌旁正常组织和11例肝硬化组织中的HOTAIR的表达量,并利用受试者工作曲线(receiver operating characteristic,ROC)统计学分析HOTAIR在肝细胞癌中的诊断效能。结果肝细胞癌组织中的HOTAIR表达明显高于癌旁正常组织和肝硬化组织,ROC曲线下面积为0.8235,对肝细胞癌的诊断有统计学意义(P=0.0002),且HOTAIR的表达与肿瘤大小、血管浸润和TNM分期有统计学意义。结论HOTAIR在肝细胞癌组织中表达明显高于正常组织,具有诊断意义,且其含量与肿瘤侵袭性相关。

Phosphate-Methylated Oligonucleotides Past, Present and Future

At the moment, we see a great interest for application of Anti Sense Oligonucleotides (ASOs) in order to regulate the expression of genes related to certain diseases. These nucleotides obtained a number of fascinating properties by means of chemical manipulation of natural DNA and RNA under conservation of Watson-Crick base-pairing. About 35 years ago for our research in this field, we selected synthetically (short) phosphate-methylated DNA and RNA. It was concluded that there is an exclusive selection in hybridization affinity with natural DNA and RNA. These (bio)chemical and physical-chemical properties are extensively published. ASOs have found their way in public health as is clearly shown in the treatment of (progressive) neurological diseases. We focus specifically on the past, present and future of the phosphate-methylated oligonucleotides, illustrated with different research studies in chemistry and biophysics. A new field of application of modified DNAs is based on interactive improvements of sensitivity and specificity of nanowire field effect transistor gene chip by designing phosphate-methylated DNA as probe.

Anti-miRNA-155反义寡核苷酸(AMOs)对腹膜成纤维细胞(FB)增殖的影响

目的探讨anti-mi RNA-155反义寡核苷酸(AMOs)对腹膜成纤维细胞(FB)增殖的作用及可能机制。方法大鼠腹膜FB细胞分为:实验组(anti-mi RNA-155 AMOs 50nmol/L)、阴性对照组(错义链50nmol/L)和空白对照组(PBS)。采用Lipofec-tamine2000作为载体分别转染各组原代培养大鼠腹膜FB细胞,应用real time PCR方法测定转染后mi RNA155水平,CCK8法检测转染后腹膜FB细胞增殖,transwell法检测转染后腹膜FB细胞迁移程度,Western blot检测转染后腹膜FB细胞NF-κB p65与PCNA水平。结果转染48 h后,实验组腹膜FB细胞的mi RNA-155水平,增殖和迁移比例明显低于阴性对照组和空白对照组(<0.01),NF-κB p65、PCNA蛋白表达水平下调(<0.05)。结论 mi RNA-155增加NF-κB p65表达的同时,促进腹膜FB细胞的增殖和迁移。

反义外壳蛋白基因介导的抗SCMV转基因玉米研究

玉米矮花叶病(MDM)是一种世界性病害,在我国主要由甘蔗花叶病毒(SCMV)所致。为探索一条高效、安全的抗SCMV转基因途径,构建了无标记基因的SCMV反义外壳蛋白基因(cp)表达载体pACP。通过冻融法将该载体与抗除草剂标记基因(bar)载体分别导入农杆菌LBA4404,然后共转化玉米自交系综3的幼胚。通过除草剂梯度筛选,从抗性愈伤组织分化获得了35株再生苗。PCR检测证明,其中26株带有抗除草剂标记基因(bar),14株带有SCMV反义cp基因。这14株带有目的基因的玉米植株自交,其种子在田间种植成株行(T1代)。玉米T1代幼苗人工接种SCMV,筛选出2个抗病株率高于70%的株行。ELISA检测表明,抗病株SCMV含量极低,抗性达高抗水平。PCR检测表明,抗病性是反义cp基因作用的结果,并且获得了2株cp基因阳性而标记基因阴性的抗病株。

反义PSY基因植物表达载体的构建及其对中国水仙的转化

实验从中国水仙花瓣中分离得到该基因的572bp的片段,将该片段反向连接到pCAMBIA1301双元载体质粒上,得到CaMV35S组成型启动子的表达载体pCAM35S-PSY,用“冻融法”将pCAM35S-PSY质粒转入农杆菌LBA4404和EHA105两个菌株中。PCR扩增和酶切鉴定结果表明,所构建的反义表达载体pCAM35S-PSY是正确的并已经成功导入农杆菌中。随后,按照业已建立的遗传转化体系对中国水仙进行了遗传转化,得到了转基因抗性芽。