补肾健脾调和气血法中药对复发性流产抗生殖抗体及妊娠结局的影响

目的:探讨补肾健脾调和气血法中药对复发性流产(Recurrent Spontaneous Abortion,RSA)患者抗精子抗体(AS-Ab)、抗心磷脂抗体(AC-Ab)、抗子宫内膜抗体(AEM-Ab)、抗卵巢抗体(AO-Ab)、抗人绒毛膜促性腺激素抗体(AhCG-Ab)、抗透明带抗体(AZP-Ab)和抗滋养细胞抗体(AT-Ab)等7种抗生殖抗体的作用,以及改善抗生殖抗体阳性RSA患者妊娠结局的效果。方法:选取2013年5月至2018年12月湖北省妇幼保健院收治的符合研究标准的复发性流产患者505例作为研究对象,随机分为对照组(n=249)和观察组(n=256)。对照组采用口服醋酸泼尼松(AC-Ab阳性者联合阿司匹林)治疗,观察组采用补肾健脾调和气血法中药辨证治疗,比较治疗2个疗程时2组各抗生殖抗体转阴率,以及试孕1年内的妊娠率和妊娠成功率。结果:抗体转阴病例率和抗体转阴总体率,观察组分别为90.23%、93.99%,对照组分别为82.33%、82.96%,差异有统计学意义(P<0.05);AhCG-Ab和AT-Ab的抗体转阴率,2组比较差异无统计学意义(P>0.05),其余抗体比较,观察组优于对照组(P<0.05)。妊娠率和妊娠成功率,观察组分别为93.36%、95.82%,对照组分别为87.95%、91.46%,观察组均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:补肾健脾调和气血法中药可有效抑制多种抗生殖抗体,促进抗体转阴,并可显著提高RSA患者妊娠率和妊娠成功率。

hCG单克隆抗体的蛋白A亲和色谱纯化

建立了亲和色谱法从小鼠腹水中纯化人绒毛膜促性腺激素(hCG)单克隆抗体。将含hCG单克隆抗体的小鼠腹水经离心、过滤预处理后,采用蛋白A亲和色谱柱纯化,考察了上样缓冲液的pH和离子强度、洗脱液的pH和流速对抗体纯度及回收率的影响。用间接ELISA法测定纯化后单克隆抗体生物学活性。结果显示,以20mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0,含3mol/L氯化钠)为上样缓冲液,0.1mol/L枸橼酸钠缓冲液(pH3.0)为洗脱液,流速为5ml/min时,hCG单抗的纯度大于98%,回收率为75%。纯化后的单抗效价没有下降。

不孕症自身抗体HCGA与生殖激素水平关系的研究

目的 研究不孕症妇女血清抗 HCG抗体(anti humanchorionicgonadotropineantibody ,HCGA)与生殖激素水平的关系。方法 用放射免疫法检测不孕症妇女血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2 )、孕酮(P)水平,用ELISA间接法定性检测HCGA。结果 HCGA阳性组(2 5例)FSH水平显著高于HCGA阴性组(73例) ,而LH、E2 、P水平显著低于HCGA阴性组。结论 HCGA可能是引起生殖激素水平改变而导致不孕的重要因素之一。

马绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的制备及鉴定

本研究采用马绒毛膜促性腺激素(equine chorionic gonadotropin,eCG)纯品免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按1∶10融合,间接酶联免疫吸附法(ELISA)筛选阳性克隆和有限稀释法克隆,扩大培养后于小鼠腹腔制备腹水,共得到8株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采用间接ELISA测定抗体效价,效价均达10-5以上。用获得的杂交瘤细胞株制备单克隆抗体,为eCG分泌水平的ELISA检测方法的建立确立了条件。

A蛋白中空纤维膜吸附分离单克隆抗体

首先以人γ－免疫球蛋白为实验物系，对Ａ蛋白中空纤维亲和膜的吸附性能进行了考察．然后应用亲和膜，从小鼠腹水上清液中直接吸附小鼠抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体．纯化的单克隆抗体经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳检测达到电泳纯．

绒毛膜促性腺激素单克隆抗体酶标妊娠诊断药盒及其临床应用

介绍了绒毛膜促性腺激素(human chrorionic gonadotropin,HCG)检验药盒的组成以及使用方法。采用10分针定性测定法对1550份尿液进行检查,结果表明:阳性诊断率为99.63%,阴性诊断率为100%。本法与血放免及尿乳胶凝集抑制法比较,该法检测较为简便、可靠、灵敏,且无需特殊设备,可成为临床诊断早孕的常规方法。HCG不仅可作为判断妊娠的依据,而且可作为测定胎盘功能的指标,也可用于预测先兆流产,帮助宫外孕的诊断,以及对葡萄胎及绒毛膜上皮癌的诊断及随访。

AEMAb、ACPAb、AHCGAb在不孕患者中表达水平及与生殖激素含量的相关性

目的探讨抗子宫内膜抗体(AEMAb)、抗心磷脂抗体(ACPAb)、抗绒毛膜促性腺激素抗体(AHCGAb)在女性不孕患者中表达特征及其与生殖激素含量的关联性。方法选取2019年1月至2020年4月唐山市妇幼保健院女性不孕患者89例设为研究组,同期参加常规体检的女性89例设为对照组。统计两组基本资料,并抽取血液样本测定AEMAb、ACPAb、AHCGAb阳性率、生殖激素[垂体泌乳素(PRL)、促黄体生成素(LH)、促卵泡成熟激素(FSH)、雌二醇(E2)]水平,对比研究组不同AEMAb、ACPAb、AHCGAb表达情况患者生殖激素水平。结果盆腔病变、流产或产后并发症、痛经、精神压力、受教育程度、AEMAb、ACPAb、AHCGAb阳性均为女性不孕的独立危险因素(P<0.05);研究组PRL、LH及FSH水平高于对照组,E2水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组AEMAb、ACPAb、AHCGAb阳性表达者PRL、LH及FSH水平高于阴性表达者,E2水平低于阴性表达者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论不孕患者AEMAb、ACPAb、AHCGAb阳性率显著升高,且与生殖激素水平关系密切,可为临床筛查不孕及治疗提供依据。

一次脾内直接注射免疫动物制备单克隆抗体

以绒毛膜促性腺激素(hCG)为抗原,对4只BALB/c小鼠分别进行一次脾内直接注射免疫,免疫后第5天分别取其血清进行ELISA检测条件,其血清抗体稀释度均在6400倍以上,然后用其免疫鼠的脾细胞与其同系小鼠的骨髓细胞进行融合,获得两株分泌型杂交瘤细胞株,其代号分别为2D_(11)、3B_5。

绒毛膜促性腺激素受体单克隆抗体的制备及其特性的初步研究

以纯化嗜麦芽假单胞菌的绒毛膜促性腺激素(CG)受体为抗原,融合得到4株(ED490,DG390,AB890,GE590)对细菌CG受体特异的单克隆抗体杂交瘤细胞,其腹水和培养上清中的抗体滴度分别为10^(-2)～10^(-6)和1～10^(-2);亚类鉴定显示:单抗GE590为IgGl,单抗ED490、DG390和AB890为IgG2b。研究发现,ED490、AB890和DG390与细菌CG受体作用后,^(125)I-HCG仍能结合该受体,揭示其作用于受体不同位点。GE590与CG受体结合实验发现,随着单抗浓度不断增加,^(125)I-HCG与受体结合逐渐减少,推测该单抗与^(125)I-HCG结合受体同一位点。

人绒毛膜促性腺激素对T细胞表型亚群的作用

目的:旨在阐明人绒毛膜促性腺激素(hCG)对免疫应答调节作用的部分机理,为理解临床某些疾病的发病机理提供理论参考。方法:分别应用荧光显微镜法和流式细胞仪法,观察了hCG对T细胞表型亚群的作用。并用抗hCG各亚单位的单克隆抗体封闭hCG后作上述试验,分析了hCG分子上与上述作用有关的表位所在。结果:hCG在一定剂量范围内可抑制T细胞表型亚群表达CD3、CD4及CD8分子。hCG作用的阻断试验证明抗hCGβ(10号)及抗完整hCG(17号)单克隆抗体可阻断上述抑制作用,而抗hCGα单克隆抗体(4号)则无此作用。结论:本文证明hCG对T细胞表型亚群有不同程度的抑制作用,而hCG分子上与此作用有关的表位则可能存在于包括β亚单位及完整hCG在内的部分。

单抗早孕胶乳凝集抑制试验试剂的研制及初步应用

通过细胞融合技术筛选了一株抗HCG的单克隆抗体1F_7。其小鼠腹水效价为10000(胶乳凝集法),免疫球蛋白分类为IgGl,亲和性为2.2×108M^(-1),其主要针对β-HCG上的某一决定簇。用该单抗和高效价的HCG致敏的羧化聚苯乙烯胶乳制成了单抗旱孕胶乳凝集抑制试验的试剂盒。该试剂盒的敏感度为0.63IU/ml左右,和促黄体激素(LH)、促滤泡激素(FSH)无交叉反应,该试剂的稳定性相当好,在室温避光处可保存一年。通过临床355例标本考核,其阳性率为99.2％,其阴性率为100％。

人工流产术后尿绒毛膜促性腺激素的消退

采用人绒毛膜促性腺激紊(HCG)单克隆抗体酶标试剂,对36例停经36d 至60d 的孕妇人工流产术后尿 HCG 消退情况进行观察。从流产术后第5d 起,每天留晨尿测 HCG,结果表明,在流产手术十分成功时,尿 HCG 转阴的时间为手术后第6天至第14天。木法较其他方法简便、迅遗、可靠,易为病人所接受,在随访人工流产和葡萄胎流产术后尿 HCG 的变化时,具有重要性。

HCG胶乳直接凝集试验的研究

从制备的10种抗HCG单抗中筛选出B12－G4（抗a－HCG）和C10－A10（抗β-HCG）两种。含单抗腹水用45％硫酸按沉淀两次，经0．1mol／LpH2．0甘氨酸缓冲液预处理后，对聚苯乙烯胶乳进行物理吸附。致敬胶乳用于尿液HCG直接凝集试验，敏感度达0．3IU／ml．测定中加入了研制成的非特异性盛集抑制剂，稍除了假阳性反应．用本法测定了临床上50名妇女的尿液标本，并与胶乳凝集抑制法及免疫金渗滤法进行比较，其中49份标本三者的结果一致，1份标本本法与免疫金渗滤法是阳性，而凝集抑制法呈阴性。

HCG滴金免疫测定法试剂的研制及应用

应用自制的两种抗人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）单克隆抗体，分别包被硝酸纤维膜及制备胶体金结合物，建立了检测ＨＣＧ的滴金免疫测定法。结果表明，本法简便，快速，灵敏度高（最小抗原检测量为５０ｍＩＵ／Ｌ），特异性好，与高浓度的ＬＨ、ＦＳＨ、ＴＳＨ均无交叉反应，临床检验２１７例样品，与ＥＬＩＳＡ法对比测定的符合率为１００％。

探讨隐睾患儿抗精子抗体(AsAb)与手术、绒毛膜促性腺激素(HCG)应用的相关性及术后血清雌二醇(E2)、睾酮(T)水平的变化

目的:探究隐睾患儿应用手术、绒毛膜促性腺激素(HCG)和抗精子抗体(AsAb)之间的相关性和术后睾酮(T)和血清雌二醇(E2)的变化情况。方法:本次实验对象选在2016年1月至2019年1月期间在本院进行睾丸下降固定术的73例隐睾患儿,将其归为实验组,选择同一时期在本院进行腹股沟手术的18例腹股沟疝患儿为手术对照组,18例非手术患儿为正常对照组,检查并分析每组实验对象的T、E2以及AsAb水平。结果:在T水平上,实验组、正常对照组、手术对照组对比,HCG组和非HCG组的AsAb阳性率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。在E2水平上,实验组高于正常对照组、手术对照组,手术对照组的AsAb阳性率显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组AsAb阳性患者全部为IgG阳性,IgG、IgA、IgM均为阳性的为3例,在手术对照组中,AsAb阳性患者全部为IgG阳性。结论:隐睾患儿产生抗精子抗体和内分泌紊乱、血睾屏障密切联系,但是使用HCG无明显影响。

反复自然流产的免疫抗体研究

目的:探讨反复自然流产与免疫抗体的关系。方法:采用ELISA法检测30例不明原因反复自然流产(流产组)患者血清抗精子抗体(AsAb)、抗子宫内膜抗体(EmAb)、抗卵巢抗体(AovAb)、抗心磷脂抗体(AcAb)和抗绒毛膜促性腺激素抗体(AhcGAb)的含量,以非妊娠期健康育龄妇女30名为对照组。结果:流产组AsAb阳性率为26.94%,EmAb阳性率为43.10%,AovAb阳性率为31.26%,AcAb阳性率为47.03%,AhcGAb阳性率为49.01%,均明显高于对照组。结论:上述5种免疫抗体可干扰卵的发育成熟、排卵、受精、胚泡着床和胚胎发育等过程,与不明原因反复自然流产关系密切。

抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的研制与鉴定

利用常规杂交瘤技术制备了２株抗人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）的杂交瘤细胞。ＥＬＩＳＡ结果表明，单克隆抗体ＩＤ５和４Ｄ５均与人ｈＣＧ有特异性反应，腹水效价分别为３．２×１０－５、６．４×１０－５，均属于ＩｇＧ１亚类。与人促卵泡激素（ｈＦＳＨ）和人促黄体激素（ｈＬＨ）的交叉反应呈阴性。免疫转印结果显示能识别相对分子质量为２４×１０３ｕ的ｈＣＧ－β链条带。亲和常数分别为１．０１×１０７Ｌ／ｍｏｌ、４．４３×１０７Ｌ／ｍｏｌ。

联合用药治疗抗心磷脂抗体阳性复发性流产

目的探讨联合用药治疗抗心磷脂抗体(ACA)阳性复发性流产的有效性和安全性。方法对38例有复发性流产病史、血清ACA阳性并排除其他引起流产因素的早孕孕妇联合应用阿司匹林、人免疫球蛋白和绒毛膜促性腺激素(HCG)进行治疗。结果38例孕妇中33例正常分娩,死胎1例,失访4例。结论对防止ACA阳性所引起的复发性流产,小剂量阿司匹林、人免疫球蛋白和HCG联合应用,是一种安全有效的治疗方法。

^99mTc标记抗β-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体

目的用99mTc标记抗β-人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）单克隆抗体。方法以SnCl2为还原剂,采用直接标记法进行标记。结果整个标记过程约需1.5h,抗体标记率为88.1%-97.5%,胶体含量为0.96%-1.27%,游离锝含量为1.10%-9.92%,且抗体的生物活性未受到影响。结论该法简单、快速,有望用于妊娠滋养细胞疾病的放射免疫显像。

人绒毛膜促性腺激素β亚基(hCG-β)单克隆抗体的制备及鉴定

为了获得抗人绒毛膜促性腺激素β亚基(hCG-β)单克隆抗体,以hCG为免疫原,经细胞融合和有限稀释后,得到4株分泌抗hCG-β单克隆抗体(McAb)细胞株.酶联免疫吸附测定(ELISA)结果表明,所得抗体均为IgG1,κ型,其腹水效价均可达10-6.