两株潜在益生菌安全性评价及其对凡纳滨对虾免疫力和抗WSSV能力影响

本研究以2株潜在益生菌(芽孢杆菌(Bacillus.sp)BZ5株和溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)VZ5株)为研究对象。通过研究其溶血特性、常见抗生素的敏感性及感染菌体后凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的存活率,探讨了两菌株对凡纳滨对虾的安全性。注射和浸泡方式下,研究两菌株对凡纳滨虾的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化酶(POD)、抗菌酶活力变化的影响以及感染WSSV的凡纳滨对虾的存活率,探讨了两菌株对凡纳滨对虾免疫力和抗WSSV能力的影响。研究显示:芽孢杆菌BZ5株和溶藻弧菌VZ5株均未表现出溶血特征,且对多数常见抗生素敏感或中度敏感。在106cfu/mL浓度下,芽孢杆菌BZ5株和溶藻弧菌VZ5株未对凡纳滨对虾表现出明显的毒害作用。注射和浸泡方式下,芽孢杆菌组和溶藻弧菌组对虾的SOD、POD活力显著高于对照组(P<0.05),其中芽孢杆菌组对虾的SOD、POD活力显著高于溶藻弧菌组(P<0.05)。感染WSSV后,芽孢杆菌组和溶藻弧菌组对虾的半数致死时间比对照组分别延长了27.38%和21.43%(注射菌体)、24.73%和8.60%(浸泡菌体)。研究结果表明,芽孢杆菌BZ5株和溶藻弧菌VZ5株在提高对虾免疫力和抗WSSV能力方面具有较好的效果,在对虾养殖生产中有潜在的应用前景。

5个凡纳滨对虾抗WSSV家系遗传性状的比较

通过WSSV感染后存活的凡纳滨对虾作为亲本,培育9个抗WSSV家系,比较其中5个家系生长、抗盐度突变、抗氨氮和亚硝酸盐浓度突变、抗WSSV的性状,研究凡纳滨对虾生长、抗逆和抗WSSV的遗传关系。结果表明:各抗WSSV家系的生长有显著差异(P<0.05),K_8生长最快,平均体长和体质量为12.44 cm、25.78 g,K_3最慢,平均体长和体质量为9.06 cm、9.45 g;抗盐度突变能力存在显著差异(P<0.05),K_8的存活率最高,为90%,显著高于对照组Gjk-F_(1·1)、Klw-F_1和Gjk-F_(1·2)(P<0.05),K_4存活率最低,为56.67%;各家系抗氨氮浓度突变能力差异显著(P<0.05),K_6存活率最高,为96.67%,显著高于对照组Sis-F_1(P<0.05),K_8存活率最低,为76.67%;各家系抗亚硝酸盐浓度突变能力差异显著(P<0.05),K_2存活率最高,为96.67%,显著高于所有对照组(P<0.05),K_4存活率最低,为36.67%;各家系抗WSSV能力差异显著(P<0.05),K_6、K_3和K_4差异不显著(P>0.05),但显著高于K_2和K_8(P<0.05),存活率分别为33.33%、30.00%和30.00%,K_2和K_8差异不显著(P>0.05),存活率为16.67%和10.00%。因此,从单一性状考虑,K_8可以作为高生长或者高抗盐度突变的选育材料,K_6为高抗氨氮浓度突变或者抗WSSV选育材料,K_2为高抗亚硝酸盐浓度突变的选育材料;综合多性状因素考虑,仅有K_6可以选为优良抗WSSV家系的选育材料。研究为凡纳滨对虾的抗WSSV家系的选育提供一定的数据支持。

对虾白斑综合症病毒囊膜蛋白VP19的融合表达及其抗病毒感染作用

根据GenBank上WSSV囊膜蛋白基因vp19的序列,设计并合成引物,PCR扩增得到vp19基因并克隆到pGEM‐T载体中,经过BamHⅠ/HindⅢ酶切、连接并将vp19插入到pET32b表达载体中。用重组质粒pET32b-vp19转化大肠杆菌Origam(iDE3)pLysS,在IPTG诱导下,融合蛋白Trx-VP19以可溶性的形式得到表达,经SDS-PAGE和Western-blot检测显示其分子量与预期的大小相符合。目的蛋白经Ni2+柱纯化并定量后分别直接注射鳌虾和包被饲料投喂鳌虾。实验结果表明注射Trx-VP19可以提高鳌虾个体抗WSSV感染力的作用。