雷公藤多甙对抗Thy1.1抗体肾炎蛋白尿和足细胞裂隙膜相关分子表达的影响

目的观察雷公藤多甙(multi-glycoside of Tripterygium wilfordii Hook.f.,GTW)对抗Thy1.1抗体肾炎蛋白尿和足细胞裂隙膜相关分子(nephrin、podocin)表达的影响。方法经尾静脉一次性注射500μg单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)1-22-3建立大鼠抗Thy1.1抗体肾炎模型。14只大鼠随机分为GTW干预组(简称GTW组)和安慰剂干预组(简称造模组)。实验1中,在注射抗体前3天,经灌胃给予GTW〔75mg/(kg.d)〕或安慰剂,直至造模后第14天,处死大鼠;实验2中,在注射抗体同时,经灌胃给予GTW〔100mg/(kg.d)〕或安慰剂,直至造模后第7天,处死大鼠。分别观察14天内或7天内模型鼠24h尿蛋白排泄量(urinary protein excretion,Upro)动态变化。在第14天或第7天,处死大鼠后,取出肾脏,分别观察肾小球形态学变化、肾小球内巨噬细胞浸润、肾小球内nephrin、podocin及其核酸表达。结果实验1中,GTW抑制抗Thy1.1抗体肾炎蛋白尿和系膜损伤,在第14天,对肾小球内nephrin、podocin免疫荧光染色强度无影响;实验2中,GTW改善抗Thy1.1抗体肾炎蛋白尿、系膜损伤、肾小球内巨噬细胞浸润,而且,在第7天,显著增强肾小球内nephrin、podocin及其核酸表达。结论在抗Thy1.1抗体肾炎中,nephrin、podocin表达的减弱可能会促进系膜损伤和蛋白尿。GTW改善系膜损伤和蛋白尿的作用,很可能是通过增强nephrin、podocin表达来实现的。

c-myc与Bcl-2在大鼠抗Thy1.1系膜增生性肾炎肾小球内的表达

目的 :探讨 SD大鼠抗 Thy1.1系膜增生性肾炎实验模型肾小球内 c-myc与 Bcl-2的表达在其发病机理中的作用。方法 :用 SD大鼠胸腺细胞免疫新西兰白兔 ,制备兔抗大鼠胸腺细胞免疫血清 (ATS) ,再将 ATS经尾静脉注射给 SD大鼠 ,诱导其发生系膜增生性肾炎 (Ms PGN)。用 HE和 PASM染色法计算肾小球内细胞数 ,用免疫组化法系膜区 c-m yc及Bcl-2的表达。结果 :实验组和对照组大鼠肾小球内均有 c-myc和 Bcl-2不同程度的表达 ;实验组肾小球内 c-myc和 Bcl-2的表达均明显多于对照组 (P<0 .0 1)。结论 :在大鼠 Ms PGN实验模型中 ,c-m yc及 Bcl-2的高表达参与了肾小球系膜增生的发病机理。

迷迭香酸对大鼠抗Thy1.1系膜增生性肾小球肾炎模型氧化应激的影响

目的探讨抗Thy1.1系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)大鼠肾脏组织氧化与抗氧化系统改变及迷迭香酸(RAD)的干预作用。方法制备兔抗大鼠胸腺细胞免疫血清(ATS),将ATS经尾静脉注射模型组大鼠,诱导其发生MsPGN模型,并以RAD干预。实验设正常对照组、肾炎模型组、单纯RAD组和RAD干预组。利用分光法分别测定肾脏组织匀浆丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果在肾炎模型的肾脏组织中MDA水平升高,SOD减少;RAD干预后MDA水平降低,SOD活性增加。结论氧自由基及其诱发的脂质过氧化在MsPGN起病中起重要作用,而RAD则能抑制肾炎的上述改变,具有抗氧化活性。

二甲基亚硝胺所致大鼠肝硬化形成与逆转过程中Thy1.1与OV6阳性染色细胞比较

目的:在二甲基亚硝胺(dimechylnitrosanline,DMN)致大鼠肝硬化形成与消减过程中,比较Thy1.1与OV6标记肝脏卵圆细胞(hepaticovalcells,HOC)的不同变化,从而选择最佳的HOC标记物.方法:应用DMN腹腔注射(4wk12次)制备大鼠肝硬化模型,进行胶原组织染色动态观察肝纤维化程度,免疫组化检测Thy1.1和OV6的不同阳性染色细胞表达,光镜下进行Thy1.1标记的HOC计数,westernblot进行该标记细胞的蛋白定量测定.结果:DMN造模4wk大鼠已形成典型的肝硬化;终止造模后2wk、即6wk时肝组织病变较4wk时有所减轻出现不完全纤维间隔.8wk时炎症明显减轻并以不完全纤维间隔为主.OV6在各时间点除了卵圆细胞表达外,也于正常胆管上皮细胞表达.正常大鼠肝组织未见到Thy1.1阳性染色的细胞,3d时可见卵圆细胞微量表达,2wk时呈散在分布,4wk时明显增多,见于纤维间隔周围,终止造模后2wk、即第6wk时阳性染色显著强于4wk,大量出现于汇管区,8wk时较6wk有所减少,表达量基本与4wk时相等.Thy1.1标记的HOCWesternblot结果与细胞计数一致.结论:在DMN大鼠肝硬化形成与消减过程中,Thy1.1标记肝脏卵圆细胞优于OV6,具有特异性和敏感性.

大鼠抗Thy1.1系膜增生性肾炎模型的实验研究

目的 :探讨复制 SD大鼠抗 Thy1.1系膜增生性肾炎实验模型的方法 ,观察其临床病理特点和肾小球系膜区细胞增殖核抗原 (PCNA)、凋亡调节基因 Bcl- 2的表达。方法 :用 SD大鼠胸腺细胞免疫新西兰白兔 ,制备兔抗大鼠胸腺细胞免疫血清 (Anti- Thy1.1serum,ATS) ,再将 ATS经尾静脉注射给 SD大鼠 ,诱导其发生系膜增生性肾炎(Ms PGN)。每日检测尿蛋白 ,用 HE和 PASM染色法观察肾小球系膜增生程度 ,用免疫组化 L SAB法检测系膜区 PCNA及 Bcl- 2的表达。结果 :ATS效价可达 1∶ 32 0 0 ;诱导大鼠 Ms PGN的 ATS最适用量为 :0 .0 1m L/ g体重 ;大鼠 Ms PGN的临床特点为大量蛋白尿 ;病理特点为肾小球系膜细胞增生 ;增生期系膜区 PCNA、Bcl- 2的表达增高。结论 :用 ATS可诱导典型的、稳定的大鼠 Ms PGN实验模型 ;免疫反应和细胞凋亡受抑制参与了肾小球系膜增生的发病机制。

抗Thy1.1抗体诱导的肾炎模型及其在中药研究中的应用

抗Thy1.1单克隆抗体诱导的抗Thy1.1抗体肾炎模型广泛应用于人类系膜增殖性肾炎的研究领域。该模型的病理特征包括补体依赖性系膜溶解、肾小球内炎症细胞浸润、显著的蛋白尿,以及急性或进展性系膜损伤。文章综述了经静脉注射单克隆抗体1-22-3诱导的可逆性抗Thy1.1抗体肾炎模型和不可逆性抗Thy1.1抗体肾炎模型的病理特征;阐述了肾小球内炎症细胞浸润和各种损伤性细胞因子的变化规律;分析了包括系膜细胞增殖和细胞外基质沉积在内的复杂的系膜损伤病变过程。运用该模型,可以说明雷公藤多苷、柴苓汤等中药对系膜损伤和蛋白尿的药理作用,并且,在分子水平阐明这些药物对各种损伤因子的作用机制。

MACC5对大鼠抗Thy1.1系膜增生性肾炎防治作用的研究

目的 :观察中草药有效成分 MACC5对 SD大鼠抗 Thy1.1系膜增生性肾炎实验模型的防治作用 ,探讨其作用机理。方法 :用 SD大鼠胸腺细胞免疫新西兰白兔 ,制备兔抗大鼠胸腺细胞免疫血清 ( ATS) ,再将 ATS经尾静脉注射给SD大鼠 ,诱导其发生系膜增生性肾炎 ( Ms PGN) ,然后腹腔注射 MACC5 ,观察其尿量、尿蛋白定量改变 ,并用 H E染色法检测系膜增殖程度 ,用免疫组化法 ( LSAB)检测其肾小球内细胞增殖核抗原 ( PCNA)的表达。结果 :MACC5两试验组尿量( 2 4小时 )均多于对照组 ( P<0 .0 1) ;MACC5 3.0 m L试验组尿蛋白定量少于对照组 ( P<0 .0 1) ;MACC5两试验组肾小球细胞数均少于对照组 ( P<0 .0 1) ;MACC5两试验组 PCNA的表达均少于对照组 ( P<0 .0 1)。结论 :MACC5对大鼠 Ms PGN实验模型具有利尿、降低尿蛋白和促进肾小球系膜损伤修复的作用。

抗Thy1.1抗体所致系膜增殖性肾炎模型

用抗Thyl.1抗体制备大鼠系膜增殖性肾炎模型,有单克隆抗体法和抗胸腺血清法。该模型的病理改变有系膜细胞坏死溶解,PMN及单核吞噬细胞的浸润,系膜细胞增殖等。免疫复合物形成及补体活化、血小板及凝血纤溶系统在发病中起主要作用,而补体活化使白细胞、血小板积聚并释放TX、LT、PAF等,因收缩系膜细胞又导致了肾血液动力学的紊乱。该模型的建立对临床有系膜细胞增殖的多种肾炎的研究和对病理状态下系膜的研究提供了良好途径。

雷公藤多苷对抗Thy1.1抗体肾炎肾小球内炎症细胞浸润的抑制作用

目的:观察雷公藤多苷(multi-glycoside of Tripterygium wilfordii.,GTW)对肾小球内浸润的炎症细胞及其相关细胞因子的影响,进一步阐明GTW在体内的抗炎作用。方法:经尾静脉注射500μg单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)1-22-3建立2种大鼠抗Thy1.1抗体肾炎模型。将模型鼠随机分为GTW干预组(GTW组)和蒸馏水干预组(对照组)。实验1中,在注射抗体前3d,经灌胃给予较大剂量GTW(75mg·kg-1·d-1)或蒸馏水,直至造模后第7天,处死大鼠;实验2中,在第2次注射抗体同时,经灌胃给予中等剂量GTW(50mg·kg-1·d-1)或蒸馏水,直至造模后第42天,处死大鼠。分别观察7d内或42d内模型鼠24h尿蛋白排泄量(urinary protein excretion,Upro)动态变化;在处死大鼠后,取出肾脏,分别观察肾小球内浸润的巨噬细胞(macrophage,MΦ),T淋巴细胞变化和肾组织内白介素(interleukin,IL)-2和干扰素(interferon,IFN)-γ核酸的表达。结果:实验1中,可逆性抗Thy1.1抗体肾炎模型鼠肾小球内浸润的MΦ明显增多,较大剂量的GTW可以减少模型鼠肾小球内MΦ的浸润和肾组织内IL-2核酸表达;实验2中,不可逆性抗Thy1.1抗体肾炎模型鼠肾小球内浸润的活性MΦ,T淋巴细胞明显增多,中等剂量的GTW可以改善模型鼠肾小球内活性MΦ,T淋巴细胞的浸润,以及肾组织内IL-2,IFN-γ核酸表达;对于2种模型,GTW都有减少蛋白尿的作用。结论:不同剂量的GTW在体内对抗Thy1.1抗体肾炎肾小球内炎症细胞浸润有抑制作用,这些作用与改善肾组织内IL-2和IFN-γ核酸表达有关。

迷迭香酸对大鼠系膜增生性肾小球肾炎肾内TGF-β_1表达的影响

目的:探讨迷迭香酸(RA)对大鼠抗Thy1.1系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)的治疗作用及其对肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法:制备大鼠MsPGN模型,随机分为3组:模型组、低剂量及高剂量RA治疗组,另设正常对照组。治疗组每天分别给予迷迭香酸(25mg/kg及50mg/kg)灌胃,连续7天,隔日检测24h尿蛋白总量。第8天处死大鼠并留取肾组织,PAS染色观察肾脏病理形态学改变,半定量RT-PCR及免疫组化方法检测大鼠肾皮质中TGF-β1的相对表达量。结果:免疫组化结果显示,正常大鼠TGF-β1少量表达于肾小球毛细血管袢及系膜区,模型组毛细血管袢及系膜区TGF-β1表达明显增多。两给药组肾小球TGF-β1表达量较模型组明显下降,24h尿蛋白定量及病理改变较模型组均有明显改善;两给药组肾组织中TGF-β1mRNA的相对表达量均小于模型组。结论:RA对大鼠MsPGN模型具有明显的保护作用,其机制可能部分与其抑制肾组织TGF-β1的过高表达有关。

雷公藤多甙对实验性系膜增殖性肾炎蛋白尿及系膜损伤的影响

目的观察雷公藤多甙(multiglycosideoftripterygiumwilfordiiHook.f.,GTW)在体内对实验性系膜增殖性肾炎蛋白尿及系膜损伤的影响。方法运用单克隆抗体(monoclonalantibody,mAb)1223建立大鼠可逆性抗Thy1.1抗体肾炎(简称“抗Thy1.1肾炎”)模型,以GTW干预,并设立对照组。比较24h尿蛋白排泄量(urinaryproteinexcretion,Upro)、肾功能(serumcreatinine,SCr;bloodureanitrogen,BUN)、血浆总蛋白(totalplasmaprotein,TP)以及肾小球形态学变化,并检测肾组织中增殖因子(plateletderivedgrowthfactorBB,PDGFBB;transforminggrowthfactorβ,TGFβ)mRNA表达水平。结果GTW抑制抗Thy1.1肾炎模型Upro和系膜损伤;抗Thy1.1肾炎模型肾组织中增殖因子(PDGFBB、TGFβ)mRNA表达水平与正常组比较,分别为其2.84倍与1.64倍,GTW使PDGFBBmRNA过高表达水平下调33.1%,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论GTW可减少系膜增殖性肾炎模型蛋白尿,抑制系膜细胞增殖和细胞外基质沉积;这些作用可能与下调肾组织增殖因子(PDGFBB)mRNA的表达有关。

大鼠系膜增生性肾小球肾炎模型的病理形态学观察

目的 :观察大鼠系膜增生性肾小球肾炎 (MsPGN)模型的病理形态学变化。方法 :采用一次性鼠尾静脉注射小鼠抗大鼠Thy1 1单克隆抗体法复制大鼠MsPGN模型 ,应用光镜、荧光显微镜、偏振光显微镜及透射电镜观察模型大鼠肾小球系膜细胞及系膜基质的变化 ;结果 :系膜细胞明显增生 ,细胞外基质 ,包括Ⅰ、Ⅲ胶原、纤维粘连蛋白 (FN)及层粘连蛋白 (LN)增多 ,个别大鼠肾小球出现硬化及纤维化。结论 :复制出具有典型病变的大鼠MsPGN模型。

视网膜神经节细胞与Müller细胞共培养的方法研究

目的 建立一种简单的体外培养视网膜神经节细胞的方法。方法 采用Thy1 1单克隆抗体免疫吸附得到纯化的视网膜神经节细胞 ,将其接种于纯化培养的视网膜M櫣ｌｌｅｒ细胞上 ,在无血清培养液中共同培养。结果 视网膜神经节细胞在接种后 1d即可生长出短小的突起 ,至第 5d突起不断增长并可长出二级分支。结论 M櫣ｌｌｅｒ细胞在无血清培养液中 ,对体外培养的神经节细胞具有很好的支持营养作用。

骨髓间充质干细胞对系膜增生性肾炎的修复作用及机制探讨

目的观察骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植后在大鼠肾脏的分化并研究其对于抗Thy1.1系膜增生性肾小球肾炎的损伤修复作用。方法测定60Coγ照射比较组24 h尿蛋白定量、血清尿素氮及血肌酐水平,观察肾脏病理;注射Thy1.1单克隆抗体建立Thy1.1肾炎模型;分离培养鉴定MSCs,以PKH67标记;观察MSCs移植后Thy1.1肾炎模型组及对照组第24 h尿蛋白量及血Cr水平,肾脏改变及MSCs在肾脏的分布情况;红色荧光标记RECA-1、OX-7、ED-1;测定MSCs培养上清液和对照组VEGF和TGF-β1的浓度;结果60Coγ照射比较组实验指标及肾脏病理无明显差异。Thy1.1肾炎模型组与正常对照组相比,24 h尿蛋白明显升高,80%的大鼠出现镜下血尿,肾病理小球系膜细胞弥漫性增多伴基质增加,肾功能与对照组无差异。MSCs模型移植组24 h尿蛋白量明显减少,病理改变减轻,死亡率降低。肾小球中极少见双重染色细胞。MSCs培养上清液VEGF和TGF-β1的浓度明显升高。结论剂量为8Gy的60Co照射可增加MSCs在肾脏沉积。MSCs移植可参与肾小球的损伤修复,改善系膜增生性肾小球肾炎,其机制可能与旁分泌VEGF和TGF-β1促进修复有关。

迷迭香酸对系膜增生性肾炎系膜细胞抗氧化应激的影响

目的探讨在系膜增生性肾小球肾炎(M sPGN)中系膜细胞氧化损伤与抗氧化系统的改变及迷迭香酸的干预作用。方法培养大鼠肾小球系膜细胞,以PDGF刺激系膜增生及RAD干预;另外,用兔抗大鼠胸腺细胞免疫血清(ATS),制备大鼠抗THy1.1系膜增生性肾小球肾炎模型,并以迷迭香酸干预。体外及体内实验均设正常对照组、肾炎组、单纯迷迭香酸组和迷迭香酸干预组。利用分光法分别测定培养细胞和肾脏组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果在抗THy1.1肾炎的肾脏组织及PDGF刺激肾小球系膜细胞中MDA含量升高和SOD减少;迷迭香酸的干预后MDA的产生降低,而SOD增加。结论氧自由基及其诱发的脂质过氧化在系膜增生性肾小球肾炎的致病中起重要作用,而迷迭香酸则能抑制肾炎系膜细胞的上述改变,具有抗氧化活性。

大鼠动物实验中的重复开放肾活检技术

基础性医学研究中经常会使用大鼠来建立模拟人类疾病的动物模型[1],但大鼠实验周期较长,模型建立往往需要花费大量的时间和精力。同时,随着对动物伦理问题的日益重视[2],如何在动物实验中减少动物的数量,优化实验动物的使用和充分利用获得的实验动物材料,是一个非常重要的问题。

大鼠系膜增生性肾小球肾炎外周血Th17、Treg及炎症因子演变特征

目的研究抗Thy1.1致系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)模型大鼠外周血辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)与炎症因子演变特点。方法取清洁级雄性SD大鼠36只,随机分为正常组与MsPGN组(n=18);采用大鼠单次尾静脉注射1.29 mg/kg Anti-Rat CD90(Thy1.1)诱导MsPGN模型,于3、7和14 d随机分别选取6只大鼠进行肾组织HE、PAS染色和IL-17A、Foxp3免疫组化分析;测定24 h尿蛋白、血尿素与肌酐含量;流式细胞术检测外周血Th17、Treg的组成变化;ELISA检测血清IL-17A、IL-6、IL-10和TGF-β1含量。结果与正常组相比,MsPGN大鼠肾组织HE和PAS染色在肾皮质部分的肾小球系膜区均出现系膜细胞及系膜基质增生,7 d达峰;免疫组化结果显示在肾皮质部分的肾小球系膜区IL-17A明显升高,3 d达峰(P<0.05),Foxp3在3 d较正常组降低后升高,7 d达峰(P<0.05);24 h尿蛋白和血尿素在3个时间点含量均升高,3 d达峰(P<0.05),而血肌酐变化差异无统计学意义;流式细胞术检测结果表明不同时间点的Th17均升高,3 d达峰,而Treg在不同时间点均低于对照,但整体变化呈升高趋势(P<0.05)。ELISA结果表明IL-6、IL-17A、TGF-β1在3个时间点的表达量均升高(P<0.05),IL-17A在3 d达峰,IL-6在7 d达峰,IL-10、TGF-β1则为逐渐升高趋势(P<0.05)。结论Th17、Treg及其炎症因子的演变可能参与了MsPGN的发病与转归。