抗转化生长因子β_1(anti-TGF-β_1)对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 探讨抗转化生长因子β1(anti-TGF - β1)对瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成的影响及意义。方法 用电镜观察anti-TGF - β1作用后瘢痕成纤维细胞的形态学变化 ,以及用MTT法和3 H -脯氨酸掺入等方法检测anti-TGF - β1对体外培养的瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原蛋白合成的影响。结果 anti -TGF - β1能明显影响成纤维细胞的超微结构 (细胞核、线粒体、粗面内质网等 )。anti -TGF - β1能抑制成纤维细胞的增殖和胶原蛋白的合成 (P <0 .0 1) ,在一定范围内 (10 μg/ml)呈剂量 -效应关系。抑制作用在 10 μg/ml时最大 ,抑制率达 72 %。结论 anti-TGF - β1能中和TGF - β1,促进成纤维细胞增殖和胶原合成的作用 ;提示anti-TGF - β1的应用可能为临床瘢痕的治疗提供新的途径。

抗CD28抗体协同刺激增强抗CD3抗体体外激活T淋巴细胞并降低TGF-β的表达

为了探讨体外激活T淋巴细胞的方法及活化后T淋巴细胞的免疫学特征,利用抗CD3、抗CD28抗体在体外刺激健康人外周血单个核细胞PBMNC,检测淋巴细胞转化,CD8+CD25+细胞比例和肿瘤生长因子β(TGF-β)表达等相关免疫学指标。结果表明,在抗CD28抗体的协同作用下,抗CD3抗体的刺激活性明显提高,CD8+CD25+细胞比例明显增加,TGF-β的表达下调。结论:抗CD28抗体协同刺激可以提供第二信号,使T淋巴细胞充分活化。

汉防己甲素等5种抗纤维化药物对离体兔角膜基质细胞的抑制作用

目的比较汉防己甲素等5种抗纤维化药物对离体兔角膜基质细胞的抑制作用,为减轻角膜创伤愈合反应提供一种新药。方法选用原代及传代兔角膜基质细胞,实验组分别加入含不同浓度汉防己甲素、TGF-β抗体、α-2b干扰素、维拉帕米、氟美童的培养液,对照组加入含等量PBS的培养液,分别培养24h、48h、72h后,采用MTT法检测其对细胞增殖的抑制作用,计算出抑制率和IC50,并对其进行比较。结果汉防己甲素在各时间段各浓度组,均能明显抑制角膜基质细胞的增殖,其24h、48h、72h的IC50分别为4·407mg·L-1、3.758mg·L-1和3.524mg·L-1,并具有明显的时间剂量-效应依赖关系。TGF-β抗体在各时间段各浓度组均有较强抑制作用,其IC50分别为6.550mg·L-1、4.060mg·L-1和3.860mg·L-1。α-2b干扰素在各时间段各浓度组均有抑制作用,但作用都较弱。维拉帕米的抑制作用不确切。氟美童在各时间段各浓度组均有确切的抑制作用,其IC50分别为36.190mg·L-1、43.742mg·L-1和47.052mg·L-1。结论在5种药物中,汉防己甲素对离体兔角膜基质细胞增殖的抑制作用最强,且明显强于激素类药物氟美童,因此在减轻角膜创伤愈合方面具有潜在的运用前景。

抗转化生长因子β_1预防和治疗瘢痕疙瘩的研究

目的 探讨anti-TGF - β1在体外及动物模型实验中对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及意义。方法 用电镜观察anti-TGF - β1作用后体外培养及动物模型成纤维细胞的形态学变化 ,用MTT法和3 H -脯氨酸掺入等方法 ,检测anti-TGF - β1对体外培养的成纤维细胞的增殖和胶原蛋白合成的影响 ;用免疫组化技术观测anti-TGF - β1对动物模型中瘢痕疙瘩Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的影响。结果 anti -TGF - β1能明显影响成纤维细胞的超微结构及抑制其增殖和胶原蛋白的合成 (P <0 .0 1)。抑制作用在 10 μg/ml时最大 ,抑制率达 72 %。对动物模型中瘢痕疙瘩Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白有明显的抑制作用 ,胶原高表达率实验组为 33.3% ,对照组为 88.9% (P <0 .0 1)。结论 在体外及动物模型实验中 ,anti-TGF - β1均能中和TGF - β1促进成纤维细胞增殖和胶原合成的作用 ,提示anti-TGF -

Smad4在结直肠癌中的研究进展

Smad4作为抑癌基因,其编码的Smad4蛋白是转化生长因子β(TGF-β)家族各类信号传导过程中共同需要的介质,调控着细胞的增殖分化与凋亡。据文献报道,Smad4在结直肠癌中扮演重要的角色,其低表达与肿瘤的发展呈负相关。国内外对Smad4在结直肠癌中的表达及其功能的研究有很大进展,本文就目前最新进展进行综述。

芪连扶正胶囊对TGF-β介导EMT作用的影响

目的:观察芪连扶正胶囊含药血清对TGF-β及EMT相关分子在肺癌A549细胞中表达的影响,探讨相关机制。方法:体外培养肺癌A549细胞,制备芪连扶正胶囊含药血清,分组干预,采用RT-PCR检测TGF-β1mRNA表达,IC检测Ecad与N-cad表达。结果:对照组、芪连扶正低剂量、中剂量、高剂量组、化疗组及联合组的TGF-β1 mRNA相对表达量依次为(31.11±1.58)%、(29.53±1.50)%、(27.28±1.75)%、(25.23±1.38)%、(23.03±1.59)%、(20.72±1.38)%;各组E-cad、N-cad均有不同程度阳性表达,除芪连扶正胶囊低剂量组外,各药组E-cad阳性率均高于对照组、N-cad则相反(P<0.05或P<0.01);与化疗组相比,联合组及芪连扶正胶囊各组亦有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:芪连扶正胶囊可通过逆转TGF-β介导的EMT作用防止肿瘤转移。

抗青光眼眼表药物与人结膜成纤维细胞TGF-β、MMP的表达

目的:评估抗青光眼眼表药物对原发性开角型青光眼患者结膜成纤维细胞培养中转化生长因子β及基质金属蛋白酶表达水平的影响。方法:用逆转录-聚合酶链式扩增方法(RT-PCR)评估TGF-β的三种异形体(TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3)以及MMP的三种异形体(MMP-2、MMP-3、MMP-9)在POAG患者的HTF中在mRNA水平上的表达;用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法测定经体内、体外抗青光眼眼表药物处理后的POAG患者的HTF细胞培养基中TGF-β1在蛋白水平上的表达。所有实验均以健康组作为对照。结果:TGF-β1、TGF-β2及TGF-β3在mRNA水平上均被HTF表达,且青光眼组在TGF-β2和TGF-β3的mRNA水平上的表达均显著高于对照组。正常对照组在蛋白水平上未测定出转化生长因子β1的表达,青光眼组中转化生长因子β1的表达显著(P<0.01)。青光眼组与对照组的结膜成纤维细胞培养经过体外拉坦前列素滴眼液的处理后,条件培养基中的转化生长因子β1的表达水平相比较未被处理过的培养基中的表达水平显著提高约4倍(P<0.01),青光眼组与对照组相比较组间无差异。MMP-2和MMP-9在结膜成纤维细胞中均有表达,其中,青光眼组MMP-9的扩增产物中mRNA含量显著低于对照组,约为对照组的1/1000。结论:体内及体外实验中,青光眼组HTF细胞培养中在mRNA及蛋白水平上增高的TGF-β三种异形体的表达可能导致青光眼组HTF细胞增殖的提高;青光眼组HTF细胞培养中在mRNA水平上缺失的MMP-3和降低的MMP-9的表达可能导致POAG患者结膜下胶原增生,结膜瘢痕化;细胞增殖的提高以及变异的TGF-β与MMP的表达均可能与本研究中POAG患者至少1a的抗青光眼眼表药物的持续使用有关;而三者均会促进抗青光眼滤过术后的切口愈合,从而影响手术效果。

TGF-β3与熊果酸抑制人结肠癌细胞增殖作用的研究

目的研究TGF-β3与熊果酸(ursolic acid,UA)抑制结肠癌细胞增殖作用的关系及可能的分子机制。方法采用结晶紫染色法和流式细胞术分析不同浓度UA对HCT116细胞增殖的作用。利用Western blot和流式细胞术等方法分析UA对HCT116细胞凋亡的影响。通过RT-PCR和(或)Western blot实验分析UA在HCT116细胞中对TGF-β3、Smad2/3和β-catenin表达及磷酸化水平的影响。采用TGF-β3重组腺病毒和特异性抑制剂以及萤光素酶报告质粒分析TGF-β3介导UA抑制结肠癌细胞增殖的可能分子机制。结果UA能明显抑制HCT116细胞增殖,诱导G1期阻滞,并促进其凋亡。UA能明显降低TGF-β3的mRNA和蛋白表达水平;UA对Smad2/3的总蛋白水平无明显影响,但能明显降低Smad2/3的磷酸化水平;外源性过表达TGF-β3可部分逆转UA对HCT116细胞增殖的抑制作用,TGF-β3特异性抑制剂则增强UA对HCT116细胞增殖的抑制作用;UA降低β-catenin蛋白水平,并明显抑制Wnt/β-catenin信号转导;外源性过表达TGF-β3促进β-catenin蛋白表达,并部分逆转UA对β-catenin蛋白表达的抑制效应;TGF-β3特异性抑制剂增强UA对β-catenin蛋白表达的抑制作用。结论 UA能抑制结肠癌细胞HCT116增殖并诱导凋亡,其作用可能是通过下调TGF-β3表达,进而抑制Wnt/β-catenin信号转导。

抗TGF-β抗体对人脐血CD34^+细胞体外扩增及黏附分子表达的影响

本研究的目的是证实抗TGF-β抗体在人脐血CD34+细胞体外扩增过程中可以增加CD34+细胞的扩增效率,并观察其对脐血CD34+细胞粘附分子表达的影响。从6份新鲜脐血标本中富集CD34+细胞,将其接种于含抗TGF-β抗体+SCF+Flt-3L+TPO+IL-3因子组合的SFEM无血清培养体系中,培养6天后,细胞计数,并用FACS检测CD34、c-kit(CD117)、CD11a、CD49d、CD33表达情况,同时进行集落分析。结果表明:①实验组有核细胞数、CD34+细胞数、CD34+c-kit+细胞数及CFU-GEMM分别扩增了41.82±13.49,15.62±6.95,13.36±6.12,11.07±4.05倍,明显高于对照组(P分别=0.001,0.002,0.003,0.002),其中实验组中更为早期的CD34+c-kit-亚群的扩增倍数更多(69.10±41.06),多于有核细胞、CD34+细胞、CD34+c-kit+细胞的扩增倍数(P=0.024)。②TGF-β抗体对CD11a和CD49d的表达无明显影响(P值均大于0.05)。结论:抗TGF-β抗体可协同早期干细胞生长因子有效扩增脐血CD34+细胞,同时不降低CD34+细胞黏附分子的表达。

筋骨草醇提物抗小鼠实验性肺纤维化研究

目的观察筋骨草醇提物抗小鼠肺纤维化的作用机制。方法 72只小鼠随机分6组,分别为假手术对照组、肺纤维化模型对照组、醋酸泼尼松组、筋骨草醇提物高、中、低3个剂量组(12、6、3 g/kg/d),每组12只。除假手术对照组外,其余各组采用气管内注入博莱霉素方法复制小鼠肺纤维化模型,假手术对照组小鼠气管滴注等体积生理盐水,于造模当天开始每日给药,分别于第7、28 d处死,观测小鼠肺组织肺泡炎和纤维化程度,检测肺组织转化生长因子-β(TGF-β)的表达和血清白介素-4(IL-4)含量。结果筋骨草醇提物高、中剂量组治疗后小鼠肺泡炎及肺纤维化较模型组显著减轻(P<0.01,P<0.05);筋骨草醇提物高、中、低3个剂量组的TGF-β和IL-4含量显著低于模型组(P<0.01,P<0.05),呈量效关系。结论高、中剂量筋骨草醇提物可通过下调细胞因子TGF-β和IL-4的表达达到减轻小鼠肺间质纤维化的效果。

“抗肝纤268方”对肝纤维化的治疗作用

目的 探讨“抗肝纤 2 6 8方”对肝纤维化的影响及机理。方法 制备肝纤维化模型鼠 ,采用“抗肝纤 2 6 8方”高、低剂量治疗 3周 ,对照组用秋水仙碱治疗 ,Masson染色后光镜下统计肝内纤维成分的数量 (IOD值 ) ,免疫组化染色后统计肝内 TGF-β1 、α- SMA、FN、L N、 型胶原、 型胶原等的数量 (IOD值 )。结果 模型组大鼠 FN、L N、 型胶原、 型胶原、TGF- β1 、α- SMA,以及肝内纤维成分等的 IOD值与正常组比较均增高 ,差异有显著性 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1 )。“抗肝纤 2 6 8方”低、高剂量以及秋水仙碱治疗 3周后 ,以上指标的 IOD值与模型组比较 ,差异有显著性(P<0 .0 5或 P<0 .0 1 )。低剂量组与高剂量组、对照组比较 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 “抗肝纤 2 6 8方”可调节 TGF- β1 的数量、进而影响 α- SMA的数量、从而减少细胞外基质 (ECM)数量 。

抗衰老的GDF11生物学特征与功能表现

生长分化因子11(growth differentiation factor-11,GDF11)是转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)超家族中骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)亚家族中的一个重要成员,在哺乳动物的骨骼、肾等多种器官组织上均有表达,且在胚胎发育、骨骼和肌肉形成等方面起着重要作用。近年研究发现,GDF11与哺乳动物的抗衰老作用联系越来越紧密。本文整理国内外关于GDF11与衰老关系的研究,对GDF11生物学基础以及对动物心脏的衰老、认知能力以及骨骼肌肉等方面的影响进行了综述。我们认为,GDF11作为一种新的细胞因子,可以调控多种下游信号通路,其作用的方式及影响还有待研究。GDF11研究可为在抗衰老以及与衰老相关疾病的治疗提供一定的理论基础。

人参皂苷Rg_1对糖基化末端产物诱导肾小球系膜细胞炎症及TGFβ/Smad信号通路的影响

目的:考察人参皂苷Rg_1对糖基化末端产物(AGEs)诱导炎症的影响及其潜在的作用机制。方法:MTT法评价人参皂苷Rg_1的大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)毒性;2.5μg·ml^(-1)AGEs诱导HBZY-1细胞炎症,巨噬细胞浸润法评价人参皂苷Rg_1的抗炎作用;Western-Blot(WB)法探查人参皂苷Rg_1对TGF-β/Smad信号通路、还氧化酶-2(COX-2)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达量的影响。结果:人参皂苷Rg_1给药剂量≤10^(-6)mol·L^(-1)时,对HBZY-1细胞的生长无明显抑制作用。人参皂苷Rg_1抗炎作用的半数有效浓度为10^(-8)mol·L^(-1),最佳抗炎作用时间为24 h。巨噬细胞浸润实验中,10^(-8)~10^(-6)mol·L^(-1)人参皂苷Rg_1给药24 h对RAW 264.7细胞浸润诱发的炎症均有一定的抑制作用,10^(-7)和10^(-6)mol·L^(-1)人参皂苷Rg_1组与模型组比较吸光度显著降低(P<0.01)。WB实验中,10^(-6)mol·L^(-1)人参皂苷Rg_1可显著升高p-Smad2/3蛋白表达量,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg_1在一定给药浓度下具有抗炎作用,且该作用可能依赖于TGF-β/Smad信号通路活性的调节。

TGF-β signaling in hepatocellular carcinoma suppression and progression

细胞信号通路紊乱在原发性肝细胞癌发生发展中发挥着不容忽视的作用.其中TGF-β信号通路的活化在原发性肝癌中的作用引起广大学者的兴趣.在肿瘤早期,TGF-β抑制肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡,但随着肿瘤进展,肿瘤细胞内TGF-β受体或其下游的Smad基因突变积累,其抑制作用减弱.在肿瘤晚期,TGF-β通过促进肿瘤细胞侵袭,参与免疫抑制,重建微环境基质,发挥着促进肿瘤进展的作用.因此,我们通过探讨TGF-β在肝细胞癌中抑制作用和促进作用的机制,来进一步研究TGF-β在肿瘤进展中,由抑制作用转化为促进作用的原因,为肿瘤进展和治疗提供新的思路.同时我们还论述了抗肿瘤草药在TGF信号通路中的作用.