抗人肝癌免疫毫微球的制备及其抗癌效果观察

目的制备抗人肝癌免疫毫微球,观察其活性及抗癌效果。方法抗人肝癌单克隆抗体HAb18通过异型双功能交联剂SPDP与载阿霉素(ADR)人血清白蛋白毫微球[HSA(ADR)-NS]偶联,制成抗人肝癌免疫毫微球HAb18-HSA(ADR)-NS,使用凝集试验及免疫荧光检测其活性,光镜和电镜下观察其与人肝癌细胞株SMMC-7721特异性结合。MTT法检测该免疫毫微球的体外杀伤性。于人肝癌裸鼠模型上分别使用HAb18-HSA(ADM)-NS、HSA(ADM)-NS及ADM,检测3者的肿瘤抑制率。结果HAb18-HSA(ADM)-NS具有单抗活性,能与肝癌细胞特异结合;其体外杀伤SMMC-7721细胞IC50值为44.6μg/ml,与HSA(ADM)-NS(345.5μg/ml)及ADM(365.5μg/ml)相比,明显降低;体内肿瘤抑制率比HSA(ADM)-NS及ADM明显增强(P<0.001)。结论HAb18-HSA(ADM)-NS具有免疫活性,对肝癌细胞有主动靶向性,体内外均具有比HSA(ADM)-NS及ADM更强的抗癌效果。

晚期糖基化终产物单克隆抗体的特异性和抗原表位鉴定

目的探讨晚期糖基化终产物在糖尿病慢性并发症发生发展过程中的作用,对我们制备的5株抗糖基化终产物单克隆抗体进行特异性及抗原表位鉴定。方法采用间接酶联免疫吸附法和蛋白印迹术分析所制备单克隆抗体与对照物(人血清白蛋白、孵育人血清白蛋白、牛血清白蛋白)的交叉反应性及其针对的抗原表位。用所得单克隆抗体对正常对照、糖尿病及透析病人血清和糖尿病大鼠主动脉进行糖基化终产物的蛋白印迹分析。结果所得抗体与糖基化终产物特异性结合,而与对照物结合较低,提示它们与糖基化终产物结合能力和特异性较强。初步鉴别其抗原表位非羧甲基赖氨酸。在正常对照、糖尿病及透析病人血清中检测到葡萄糖源性糖基化终产物。用所得单克隆抗体行蛋白印迹分析,发现糖尿病高血压大鼠主动脉含糖基化终产物特异显色,而正常对照组不明显。结论5株抗糖基化终产物单克隆抗体细胞株具较高抗原特异性,可定性发现血清和组织中的糖基化终产物。

抗人大肠癌免疫毫微球的制备及其抗癌效果观察

目的 制备抗人大肠癌免疫毫微球 ,并观察其活性及疗效。方法 抗人大肠癌单克隆抗体SC3Ab通过异型双功能交联剂SPDP与载 5 Fu人血清白蛋白毫微球 [HSA(5 Fu) NS]偶联 ,制成抗人大肠癌免疫毫微球SC3Ab HSA(5 Fu) NS。使用凝集试验及免疫荧光检测其活性 ,光镜和电镜下观察其与大肠癌细胞SW 1116的特异性结合。MTT法检测该免疫毫微球的体外杀伤性。于人大肠癌裸鼠模型上分别使用SC3Ab HSA(5 Fu) NS、HSA(5 Fu) NS及 5 Fu ,检测三者的肿瘤抑制率。结果 SC3Ab HSA(5 Fu) NS具有单抗活性 ,能与大肠癌细胞特异结合 ;其体外杀伤SW 1116细胞IC50 值为 2 4 6 μg/ml ,与HSA (5 Fu) NS(345 3μg/ml)及 5 Fu(32 5 6 μg/ml)相比 ,明显降低 ;体内肿瘤抑制率比HSA(5 Fu) NS及 5 Fu明显增强 (P <0 0 0 1)。结论 SC3Ab HSA (5 Fu) NS具有免疫活性 ,对大肠癌细胞有主动靶向性 ,体内外均具有比HSA(5 Fu) NS及 5 Fu更强的抗癌效果。

人血清白蛋白单克隆抗体的制备、鉴定与初步应用

目的制备人血清白蛋白(HSA)单克隆抗体(单抗)并以之制备亲和层析柱去除甘露聚糖结合凝集素(MBL)制剂中污染的HSA。方法采用杂交瘤技术制备单抗,通过ELISA、Western-blotting鉴定其特性;制备亲和层析柱去除MBL制剂中的污染HSA。结果筛选出4株稳定分泌HSA单抗的杂交瘤细胞株1C11、2E9、3A5和4H1,单抗亚类均为IgG1,亲和常数分别为7.19×109、1.46×109、6.94×109和2.28×1010;1C11与3A5的识别位点相似或相同,其他单抗识别位点均不同;4H1可与兔血清发生交叉反应,余者与其他种属血清均无交叉反应。结论所制备的HSA单抗1C11、2E9、3A5能特异结合HSA且与其他种属血清无交叉反应,抗HSA单抗亲和层析柱可用于去除人血清蛋白制剂中的污染HSA。

高特异性人血清白蛋白化学发光免疫分析方法的建立

人血清白蛋白（HSA）是人类肝脏功能的重要生物标志物.本研究旨在发展一种具有高度种属特异性和灵敏度的HSA化学发光免疫分析（HSA CLIA）定量检测方法.通过HSA免疫小鼠,制备了6株HSA鼠单克隆抗体;使用间接化学发光检测（Indirect-CLIA）和West blotting检测方法评价单抗对HSA的反应活性;使用免疫组织化学检测（IHC）和West blotting检测方法评价单抗的种属特异性;选择最佳的包被抗体和检测抗体配对;确定HSA-CLIA的定量线性和范围.West bloting和IHC方法中,4F5和5D2抗体反应性最强,且不与小鼠、大鼠、牛、兔、山羊、猴、鸡等常见实验动物血清白蛋白交叉反应.以单抗5D2配合单抗4F5建立的HSA CLIA,线性范围达到122～31 250 pg/mL,可适用于多种样本的HSA定量检测.本研究发展的单克隆抗体和检测方法为HSA的特异性检测提供了重要工具和手段.

自制单克隆抗体检测糖尿病大鼠肾脏和心脏糖基化终产物

目的为探讨糖基化终产物在糖尿病慢性并发症发生发展过程中的作用,采用本实验室所制备的7F、5F、8A三株单抗,检测高血压糖尿病大鼠肾脏和心脏糖基化终产物。方法Western blotting分析所制备单抗与对照物(人血清白蛋白、孵育人血清白蛋白和牛血清白蛋白)的交叉反应性及其针对的抗原表位。用所得单抗对糖尿病大鼠肾脏和心脏进行糖基化终产物的免疫组织化学分析。结果所得抗体与糖基化终产物结合能力和特异性较强,初步鉴别其抗原表位非羧甲基赖氨酸。在糖尿病大鼠肾脏和心脏探查到葡萄糖源性糖基化终产物,而正常对照组不明显。结论3株抗糖基化终产物单克隆抗体细胞株具较高抗原特异性,可定性显示组织中的糖基化终产物。

胃癌单克隆抗体用于氨甲喋呤导向治疗的实验研究

本文报道胃癌单克隆抗体MGb2-BSA-MTX结合物的制备及其对肿瘤靶细胞的杀伤作用。首先将MTX引入BSA,继与单抗连结得到结合物。结合物中IgG:BSA:MTX克分子经为1:1.5:62。偶联过程中抗体活性无明显丧失,结合物与肿瘤靶细胞的结合能力与未修饰抗体相近。噻唑蓝活细胞染色的检测结果表明结合物对胃癌靶细胞KATOⅢ具有较强的选择性杀伤作用。

牛血清白蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

用牛血清白蛋白(BSA)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,培养上清经过双抗体夹心法检测初步筛选分泌鼠IgG的杂交瘤细胞,将此种杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹水用间接ELISA法筛选,获得4株能稳定分泌抗BSA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2A5、3A3、3G6、4A8。鉴定结果显示,2A5细胞分泌IgG2a/κ,其余3株细胞分泌IgG1/κ;纯化后4株腹水单抗的纯度达90%以上,对BSA的ELISA滴度均可达到1∶100000以上;4株单抗均不与人以及马、猪、羊、兔、豚鼠等血清发生交叉反应;W estern B lotting试验证明4株单抗均识别分子量为68000的BSA;用间接ELISA法测定4株单抗相对亲和力及相对敏感度大小依次为3A3>2A5>3G6>4A8;杂交瘤细胞株连续培养3个月以及冻存半年后复苏,细胞生长良好,杂交瘤细胞分泌的抗体效价稳定。

牛血清白蛋白单克隆抗体的筛选与双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的筛选高效抗牛血清白蛋白(BSA)单克隆抗体细胞株,并建立BSA抗原检测的双抗体夹心ELISA法。方法分别采用辛酸-硫酸铵法和葡萄球菌A蛋白亲和层析法纯化单抗,并进行抗体类型、腹水效价、特异性和相对亲和力测定;应用纯化的单抗建立BSA双抗体夹心ELISA检测法,并进行初步应用。结果筛选出4株可稳定分泌抗BSA单抗的杂交瘤细胞株,抗体类型为IgG,抗体滴度均可达10-6,特异性良好,相对亲和力较高。建立的双抗体夹心ELISA法线性范围为1.25～20ng/ml,R2>0.98,灵敏度为1.25ng/ml。结论已筛选出高效抗BSA的单抗,并建立了BSA双抗体夹心ELISA检测方法。

动物过敏原牛血清白蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立

[目的]制备鼠抗牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测动物过敏原BSA含量的间接竞争酶联免疫检测方法(IC-ELISA)。[方法]采用BSA纯品为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备抗BSA单克隆抗体,并对其特异性进行鉴定;在此基础上,建立BSA间接竞争ELISA检测方法,并对其分析条件进行优化。[结果]采用自行制备的特异性抗BSA单克隆抗体,建立间接竞争ELISA检测方法,优化得到最佳反应条件:抗原最佳包被浓度为0.25μg·m L^(-1),单抗最佳工作浓度为1∶32 000,酶标二抗最佳工作浓度为1∶10 000,最低检测限为6.71ng·m L^(-1),线性检测范围为3.593 8~460 ng·m L^(-1)。线性回归直线方程为y=-47.448 9x+135.866 3,相关系数R2=0.997 3,P<0.000 1。[结论]该方法特异性强、灵敏度高、可靠性好,适用于食品中过敏原BSA的现场快速检测。

分泌抗人聚白蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其应用

作者成功地获得了持续稳定分泌抗人聚白蛋白(PHSA)的单克隆抗体(McAb)细胞株。用^(125)I标记该McAb,采用敏感性高的RIA法对HBsAg阳性和阴性血清中老化的白蛋白分子进行了探测。结果发现PHSA主要存在于HBsAg阳性血清中。此工作为乙型肝炎病毒(HBV)与循环中PHSA结合的可能性提供了实验依据。

一种新的单克隆抗体检测方法在杂交瘤阳性细胞克隆筛选中的应用

目的探讨将一种新的检测抗人血清IgG及白蛋白单克隆抗体的方法应用在杂交瘤阳性细胞克隆筛选中。方法分别将人血清IgG和白蛋白连接到微球Beads上,混合2种微球,然后与抗人血清IgG及白蛋白的单克隆抗体发生特异性反应,再与连接有荧光R-藻红蛋白(R-phycoerythrin,R-PE)的羊抗小鼠IgG抗体发生反应,最后在Luminex200仪器上读取微球上的平均荧光强度(MFI)值。结果抗人血清IgG及白蛋白单克隆抗体只与其相对应的微球发生特异性反应,2种抗体同时测定时,不互相干扰。当用该方法测定含有抗人血清IgG或白蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞培养上清液时,微球MFI值明显高于不含该抗体的上清液中微球的MFI值。结论该检测法具有较好的特异性,敏感性和重复性,可以应用到抗人血清IgG和白蛋白单克隆抗体杂交瘤阳性细胞克隆的筛选中。