^(99)Tc^m标记反义miR208b寡核苷酸及其转染离体肥大心肌细胞的实验研究

目的探索用放射性核素99Tcm标记反义mi R208b寡核苷酸,并转染离体早期肥大心肌细胞的实验过程及方法。方法合成针对mi R208b的反义mi R寡核苷酸(AMO),LNA(带锁核酸)修饰AMO,将双功能螯合剂NHS-MAG3(N-羟基琥珀酰亚胺-巯基乙酰基三甘氨酸)与LNA-AMO偶联后,用99Tcm标记,然后用Sep-Pak C18反相层析法对NHS-MAG3-LNA-AMO及其标记物进行洗脱纯化,前者同时经Gene Quant DNA/RNA calculator测定在260 nm波长处的吸光度;不同检测方法测定纯化后标记物的标记率、放化纯度、稳定性以及与靶基因杂交的活性;建立由血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的离体心肌肥大细胞模型,检验早期肥大心肌细胞内mi RNA208b的相对表达量以及经脂质体包裹的99Tcm-NHS-MAG3-LNA-AMO在早期肥大心肌细胞内的滞留率。结果纯化后的标记物标记率>84%,放化纯度>86%,标记物分别在新鲜人血清、生理盐水中孵育12 h后,放化纯度均大于80%,并具有与靶向基因杂合的能力。离体心肌肥大模型成功建立,测得早期心肌肥大细胞内mi RNA208b表达升高,且最终标记物转染细胞后6 h滞留率大于20%。结论在双功能螯合剂NHS-MAG3以及LNA的介导下,成功将放射性核素99Tcm标记于NHSMAG3-LNA-AMO,最后将反义探针顺利转染早期离体肥大心肌细胞,这为后续的在体心肌肥大核素显像提供重要实验基础。

靶序列三链DNA对质粒pBR322的Amp^r基因表达的抑制

利用 Ca Cl2 法成功地将寡核苷酸导入大肠杆菌 JM1 0 9细胞。质粒 p BR32 2转化结果表明 ,寡核苷酸片段 5′- AGCGGGAATAAGGGAA- 3′在转化前 (或后 )与靶序列结合均能抑制 β-内酰胺酶基因的表达 ,细菌生长受到抑制。体外聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明 ,该片段能与靶序列形成三链结构。这些结果表明多聚嘌呤寡核苷酸是通过与靶序列形成三链 DNA来抑制β-内酰胺酶基因的表达。

微阵列数据处理平台设计与实现

目的研制一个基于高性能计算机和Linux下运行的采用B/S模式的微阵列数据处理平台。方法构建以Apache服务器为平台的WEB服务器,采用Perl语言编程,整合R语言与Bioconductor中的微阵列数据分析软件包,满足寡核苷酸微阵列和双色点样微阵列实验数据的处理和分析,用户可在网页上提交数据和设置参数,结果通过网页以图形化的方式返回。结果该平台可处理寡核苷酸微阵列和双色点样微阵列的数据,实现了数据质量评估、预处理、注释、统计分析等功能,操作简单,分析速度快。运用本平台处理了结核杆菌不同临床分型的人类巨噬细胞寡核苷酸微阵列数据,即潜伏期、结核病、结核性脑膜炎,为识别结核杆菌的敏感基因提供了线索。利用本平台还分析不同条件下用异烟肼处理结核分支杆菌的效果,例如低氧条件和敲除katG基因的条件所获得的相关cDNA微阵列数据,发现用异烟肼处理的对数生长期调节的基因将不会在休眠期模型中被差异调节;并且在休眠期,被差异调节的基因总数将减少。结论该平台功能资源整合较全面,克服了当前微阵列数据分析软件或工具包在操作使用方面的不足,应用界面友好,结果显示直观,为生物学家开展微阵列数据分析提供了方便。针对结核分支杆菌的案例研究验证了平台的有效性。

异核苷低聚核苷酸的合成及其酶促稳定性

用磷酸三酯法在溶液中合成了两个带有3’－（S）-胸腺嘧啶基-4’－（R）一羟基-5’－（S）-羟甲基四氢呋喃的三脱氧核苷酸3和4．与三脱氧核苷酸（2）相比，化合物3和4对核酸酶SI具有更大的稳定性．

全球寡核苷酸类药物开发现状与趋势

目的：从产品开发角度分析寡核苷酸类药物的发展现状和未来趋势。方法：检索科睿唯安（Clarivate analytics）的Cortellis数据库的数据,利用定量分析法和对比分析法对检索结果进行分析。结果：目前已有7种寡核苷酸类药物上市,4种寡核苷酸类药物处于预注册及16种处于临床III期,未来市场上的寡核苷酸类药物将呈现快速增长趋势。此外,寡核苷酸类药物的商业交易也越来越多,目前共发生包括药物开发及商业化许可、专利资产出售以及早期药物研发合作等10余起交易,其中药物开发及商业化许可是最主要的交易模式。结论：虽然寡核苷酸类药物市场尚处于起步阶段,但随着技术的不断发展改进,相信未来有更多的寡核苷酸类药物上市,为癌症及其他疾病的治疗提供新的契机。