野生型DJ-1基因在体外培养SH-SY5Y细胞中高表达对氧化损伤的抑制作用

目的:研究帕金森病相关基因野生型DJ-1高表达对鱼藤酮及过氧化氢致多巴胺神经元SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用及机制。方法:将pcDNA3-FLAG-DJ-1质粒转染进入SH-SY5Y细胞,采用Western blot分析观察DJ-1在细胞内的表达,以2,7-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)作为探针,用流式细胞仪检测鱼藤酮诱导的活性氧水平,以MTT法检测过氧化氢损伤的细胞存活率变化。结果:野生型DJ-1被转染进入SH-SY5Y细胞中,并能高表达。野生型DJ-1的高表达可减少活性氧的生成,0.5μmo.lL-1浓度的鱼藤酮处理细胞48 h后,细胞内存在大量活性氧,M2期细胞明显减少(转染野生型DJ-1的SH-SY5Y细胞71.60%与未转染DJ-1的SH-SY5Y细胞89.19%相比)。并且可以抑制过氧化氢导致的细胞存活率下降,过氧化氢处理1 h后,野生型DJ-1转染的细胞存活率明显高于未转染者,过氧化氢浓度为0.1,0.2和0.5 mmol.L-1,细胞存活率分别由77.71%,66.28%和39.08%上升至93.01%,83.96%和60.15%。结论:野生型DJ-1基因在体外培养SH-SY5Y细胞中高表达对氧化损伤具有抑制作用,该作用可能与降低细胞内活性氧水平有关。

黄芩素通过抗氧化应激延长果蝇寿命的机制

为了探究黄芩素是否具有抗衰老作用,本研究以果蝇为模式生物,考察在自然衰老模型、过氧化氢损伤模型和百草枯损伤模型中黄芩素对雌性果蝇寿命的影响。在此基础上,采用生物信息学方法预测黄芩素发挥抗衰老活性可能作用的靶点,并对靶点进行通路富集,选择影响较大的氧化应激通路进行实验验证。结果表明,0.04和0.2 mg·m L-1黄芩素均能延长自然衰老模型中果蝇的平均寿命和最高寿命,并可有效减弱由过氧化氢和百草枯引起的果蝇寿命缩短。靶点预测结果显示黄芩素可能作用于31个衰老相关靶点,并能显著影响氧化应激通路,进一步实验结果表明黄芩素可能通过降低果蝇体内活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)含量,从而减轻氧化应激水平,延缓衰老。