EBV-DNA与VCA-IgM、VCA-IgG亲和力检测在儿童EB病毒早期感染中的差异研究

目的分析EB病毒(EBV)-DNA与衣壳抗原IgM抗体(VCA-IgM)、衣壳抗原IgG抗体(VCAIgG)亲和力检测在儿童EBV早期感染中的差异,评价EBV-DNA在EBV早期感染中的诊断价值。方法收集疑似EBV急性感染的患儿血液标本154例,使用酶联免疫吸附试验检测VCA-IgM、VCA-IgG、VCA-IgG亲和力、早期抗原抗体IgG(EBVEA-IgG)、核抗原抗体IgG(EBVNA-IgG);比较EBV-DNA与VCA-IgM、低亲和力VCA-IgG之间阳性率的差异,分析其检测一致性,并初步探讨可能的原因。结果 EBV-DNA、VCA-IgM及低亲和力VCA-IgG阳性率分别为29.87%、10.39%、37.66%。EBV-DNA与VCA-IgM之间具有较弱的一致性(Kappa=0.237),与VCA-IgG亲和力之间没有一致性(Kappa=-0.009)。3种检测结果组合模式中单独EBV-DNA、低亲和力VCA-IgG阳性占所有EBV-DNA、低亲和力VCA-IgG阳性标本的比例分别达60.9%(28/46)、63.8%(37/58),明显高于VCA-IgM(6.25%);EBV-DNA与低亲和力VCA-IgG同时阳性的标本仅7例。EBV-DNA仅在近期感染组中与VCA-IgM及低亲和力VCA-IgG阳性率比较,差异无统计学意义(P=0.873),一致性也较好,并可在既往感染组标本中检出。结论 EBV-DNA检测阳性率较高,但与EBV抗体检测一致性较差,且受既往感染的干扰,对儿童EBV急性感染的诊断价值尚需深入研究。

免疫酶法与ELISA法检测EB病毒VCA-IgA的比较

为探讨免疫酶法与ELISA在鼻咽癌诊断中的临床价值,检测鼻咽癌组患者与健康对照组血清EB病毒壳抗原抗体,并对两种检测方法的结果进行分析。结果表明:177例鼻咽癌患者中,免疫酶法检测EB-VCA-IgA阳性率高92.1%(163/177),而国产试剂和进口试剂ELISA法检测结果阳性率都较低,分别为65.0%(115/177)和67.2%(119/177),有显著性差异(P<0.005);在90名对照组血清EB-VCA-IgA,免疫酶法的阴性率为100%(90/90),ELISA法中的国产和进口试剂的阴性率分别为:98.9%(89/90)和95.6%(86/90),无显著性差异(P>0.05)。为此免疫酶法检测EB-VCA-IgA的灵敏度较高,更适合用于鼻咽癌的普查、协助诊断等,具有实际临床意义。

EB病毒抗体筛查对体检人群早期鼻咽癌的诊断价值

目的探讨3种EB病毒抗体[R反式激活因子(Rta)-IgG、早期抗原(EA)-IgA和病毒衣壳抗原(VCA)-IgA]筛查对体检人群早期鼻咽癌的诊断价值。方法联用Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA对22651例体检人群进行筛查,有一项及以上指标阳性者判定为EB病毒血清学阳性。随访观察EB病毒血清学阳性者的临床表现,对有可疑病灶者进行病理活检及影像学检查以确诊早期鼻咽癌。分析不同性别、不同年龄体检者的Rta-IgG、VCA-IgA和EA-IgA阳性检出率,以及EB病毒血清学阳性者Rta-IgG、VCA-IgA和EA-IgA三联检的阳性分布情况。根据EB病毒抗体情况对体检人群EB病毒血清学阳性者进行分层评估:Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA 3项检测指标均阳性为高危组,其中2项指标阳性为中危组,仅1项指标阳性为低危组。结果22651例体检者中共筛查出EB病毒阳性1631例,总阳性率为7.20%,其中女性阳性率(8.04%)高于男性(6.62%)(P<0.05)。不同年龄组体检者Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA的阳性检出率差异有统计学意义(P<0.05),60岁以后以上3种血清学指标的阳性检出率均明显升高。在单项指标阳性中,VCA-IgA的阳性检出率较高(56.65%),且30~40岁、51~60岁和61~70岁年龄组女性的VCA-IgA阳性检出率高于男性(P<0.05);在不同组合指标阳性中,Rta-IgG+VCA-IgA的阳性检出率较高(7.91%)。鼻咽癌低、中、高危组分别有1399例、220例、12例,分别追踪到0例、15例、11例鼻咽癌,其中Rta-IgG+VCA-IgA双阳性筛检出12例,3种抗体均阳性筛检出11例。结论联合检测Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA可从体检者中有效筛查出EB病毒阳性人群,其中具有双阳性或三阳性人群的患癌风险较高,重点随访该类人群,有助于提高鼻咽癌早诊早治效果。

鼻咽癌患者血清EB病毒Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体与其临床表现的关系

目的探究鼻咽癌患者血清EB病毒(EBV)Rta蛋白免疫球蛋白G抗体(Rta-IgG)、壳抗原免疫球蛋白A抗体(VCA-IgA)、早期抗原免疫球蛋白A抗体(EA-IgA)与其临床表现的关系。方法选取2016年3月-2018年10月我院经病理活检证实的鼻咽癌患者164例为鼻咽癌组,同期就诊的鼻炎疾病(非鼻咽癌)患者61例为鼻咽疾病组、健康体检者72例为健康对照组。比较3组血清Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体阳性率差异,并分析血清Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体与鼻咽癌患者临床表现的关系。结果鼻咽癌组血清Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体阳性率显著高于鼻咽疾病组及健康对照组(P<0.05),鼻咽疾病组与健康对照组血清Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同性别、年龄及T分期鼻咽癌患者血清Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同N分期、不同M分期鼻咽癌患者血清Rta-IgG抗体水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。临床分期Ⅰ期鼻咽癌患者血清Rta-IgG抗体水平明显低于临床分期Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期者(P<0.05),但临床分期Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期鼻咽癌患者血清Rta-IgG抗体水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。鼻咽癌患者血清VCA-IgA、EA-IgA抗体水平均随N分期、M分期及临床分期的升高而升高(P<0.05)。结论血清Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体水平与鼻咽癌临床表现有一定相关性,可应用于鼻咽癌的诊疗。

两个不同厂家试剂盒检测EB病毒EA-IgA、VCA-IgA的比较

目的比较分析两个不同厂家试剂检测EB病毒早期抗原IgA抗体(EA-IgA)、衣壳抗原IgA抗体(VCA-IgA),并做方法学评价。方法分别用两个不同厂家的ELISA试剂盒检测184例鼻咽癌(NPC)患者及184例正常人的血清EA-IgA和VCA-IgA。结果与欧蒙公司的试剂盒相比,IBL公司的试剂EA-IgA的阳性符合率为66.07%,阴性符合率为89.45%,总符合率为82.34%,Kappa值为0.57;VCA-IgA的阳性符合率为67.57%,阴性符合率为99.32%,总符合率为80.16%,Kappa值为0.62。结论两个厂家的试剂盒在分别验证EA-IgA,VCA-IgA时,具有高度一致性。国内IBL公司生产的试剂可替代进口试剂。

在昆虫细胞中表达EB病毒壳抗原及其在诊断中的应用

本研究的目的是以昆虫杆状病毒为载体表达ＥＢ病毒壳蛋白的主要多肽ｇｐ１２５。用间接免疫荧光和免疫印迹技术证明表达产物的特异性。表达产物位于感染细胞的胞浆内，分子量约１００ｋＤ。用免疫Ｄｏｔ法检查感染细胞裂解物中存在的特异性表达产物的量。重组病毒裂解产物免疫小鼠后，能产生与ＶＣＡ反应的抗体。重组病毒感染的细胞为靶细胞，与Ｂ（９５－８）细胞片平行检查人血清中的ＶＣＡ／ＩｇＧ和ＶＣＡ／ＩｇＡ抗体，确定表达产物的特异性及其在检查血清抗体中的意义。

VCA-IgM、RAI和外周血异型淋巴细胞检查对儿童EB病毒感染的诊断效能分析

目的:分析抗EB病毒(Epstein-Bar virus,EBV)衣壳抗原IgM抗体(VCA-IgM)、IgG抗体亲和力指数(RAI)、外周血异型淋巴细胞百分比实验室检测指标对儿童EB病毒急性感染的诊断效能。方法:回顾性分析2017年3月-2019年6月就诊于随州市中心医院儿科住院部并行EBV-DNA定量检测的233例患儿的VCA-IgM、RAI及外周血异型淋巴细胞百分比资料,以EBV-DNA定量≥1.0×103拷贝/mL为阳性标准将患儿分为EBV-DNA阳性组和EBV-DNA阴性组,比较EB病毒VCA-IgM、RAI及外周血异型淋巴细胞百分比在诊断EB病毒感染过程中的敏感度、特异度和准确度,确定与诊断EB病毒感染有关的阳性指标个数的最佳诊断点。结果:EBV-DNA阳性组VCA-IgM、外周血异型淋巴细胞百分比均高于EBV-DNA阴性组,RAI低于EBV-DNA阴性组,差异均有统计学意义(P<0.05)。外周血异型淋巴细胞和RAI诊断EBV感染的准确度均为73.82%,显著高于VCA-IgM的67.38%,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线中诊断EB病毒感染的最佳诊断点对应于每位患儿1.5个阳性检测指标个数。结论:诊断EB病毒早期感染的这三项实验室检测指标中,外周血异型淋巴细胞和RAI的诊断效能高于VCA-IgM,当三者中任意两项指标支持EB病毒感染诊断时,其诊断EBV感染的准确性较单项指标高,与三项指标同时阳性无显著差别,这在临床诊疗工作中既能缩短诊疗时间,减少误诊、漏诊和迟诊,还能避免过度检查,降低患儿的医疗费用,具有实际的临床意义。

EB病毒衣壳抗原IgA抗体胶体金快速检测法的建立及应用

目的建立了一种快速检测人血清中EB病毒衣壳抗原(VCA)IgA抗体的胶体金免疫层析(GICA)方法。方法预先将EB病毒衣壳抗原(EB-VCA)包被在硝酸纤维素膜上,将鼠抗人IgA抗体免疫金固化在金标垫上。检测时,样本通过层析作用向上流动,样本中的IgA抗体首先被胶体金标记的鼠抗人IgA抗体捕获,其中的EB-VCAIgA抗体再与包被在硝酸纤维素膜上的EB-VCA特异性结合,最后形成包被固相上的EB-VCA与EB-VCAIgA抗体及胶体金标记鼠抗人IgA抗体的三元复合物,通过检测线胶体金沉淀颜色的变化来定性判定样本中是否存在EB-VCAIgA抗体。结果采用自制的GICA试纸条进行了1028份临床标本的盲法检测,并与酶联免疫吸附试验的EB-VCAIgA抗体诊断试剂盒进行比对,结果表明两种试剂检测的总符合率达到94.56%,阳性符合率为93.40%,阴性符合率为95.17%,Kappa值为0.873,两种诊断试剂具备一致的诊断价值。结论用于检测血清中的EB-VCAIgA抗体的GICA试纸条的制备条件已基本建立,其检测结果特异性强、稳定性好、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备。

儿童传染性单核细胞增多症多个临床检测指标的诊断价值

目的探讨儿童传染性单核细胞增多症(infectious mononucleosis,IM)的检测指标的诊断价值。方法观察101例IM患儿发热天数与多种检测指标,如EB病毒DNA(DNA copies of Epstein-Barr virus,EBV-DNA)、EB衣壳蛋白(viralcapsidantigen,VCA)抗体、异型淋巴细胞、血液中WBC和ALT等指标之间的关系。结果 IM患儿的发热天数与多种检测指标的关系用散点图趋势分析提示,不同的检测指标随着发热天数变化趋势不同。IM患儿在发热早期和中期(发热8 d内),EBVDNA和IgG-VCA的检出阳性率较高(分别是77.2%和76.9%);发热后期EBV-DNA和IgG-VCA(发热12 d后)迅速下降。结论在IM患儿发热的初期和中期检测EBV-DNA和VCA的IgG抗体,有助于患儿的特异性诊断。

鼻咽癌血清学抗体及EBV-DNA水平与病理分期的关系

目的探究鼻咽癌患者血清学抗体及EB病毒-脱氧核糖核酸(EBV-DNA)水平与病理分期的关系。方法回顾性分析中山市人民医院健康管理体检中心512例鼻咽癌患者(鼻咽癌组)临床资料,并收集82例同期入院治疗的慢性鼻-鼻窦炎患者(非鼻咽癌组)临床资料;记录两组外周血EBV-DNA及Rta蛋白免疫球蛋白G抗体(Rta-Ig G)、壳抗原免疫球蛋白A抗体(VCA-Ig A)、早期抗原免疫球蛋白A抗体(EA-Ig A)阳性表达率,并分析不同临床病理特征鼻咽癌患者外周血EBV-DNA及Rta-Ig G、VCA-Ig A、EA-Ig A水平差异,使用受试者工作曲线(ROC曲线)评估鼻咽癌患者外周血EBV-DNA及Rta-Ig G、VCA-Ig A、EA-Ig A水平与病理分期的关系。结果鼻咽癌组外周血EBV-DNA及Rta-Ig G、VCA-Ig A、EA-Ig A阳性表达率均高于非鼻咽癌组(P<0.05)。TNMⅠ期者Rta-Ig G吸光度低于Ⅱ~Ⅳ期者(P<0.05);不同TNM分期者外周血EBV-DNA、VCA-Ig A、EA-Ig A水平比较,均为Ⅰ期<Ⅱ期<Ⅲ期<Ⅳ期(P<0.05)。TNMⅠ~Ⅱ期鼻咽癌患者外周血EBV-DNA、VCA-Ig A、EA-Ig A水平均低于TNMⅢ~Ⅳ期患者(P<0.05);经ROC曲线分析,发现外周血EBV-DNA、VCA-Ig A、EA-Ig A水平对TNMⅢ~Ⅳ鼻咽癌期具有较高诊断价值(AUC=0.990、0.726、0.816,P<0.05),其cut-off值分别为1.82×10^(4) copies/ml、1:56.32、1:26.17。Logistics回归分析显示,EBV-DNA>1.82×10^(4) copies/ml、VCA-Ig A滴度<1:56.32、EA-Ig A滴度<1:26.17均为导致中晚期鼻咽癌的独立危险因素(OR=4.088、2.514、3.459,P<0.05)。结论外周血EBV-DNA及Rta-Ig G、VCA-Ig A、EA-Ig A等抗体表达水平与鼻咽癌患者TNM分期具有一定相关性,对判断鼻咽癌病情进展有积极作用,可纳入鼻咽癌体检筛查项目。

血清DKK1和EB病毒VCA-IgA联合检测对鼻咽癌的诊断价值

目的：探讨血清Dickkopf-1（DKK1）和EB病毒壳抗体（VCA-IgA）联合检测在鼻咽癌中的诊断价值。方法应用酶联免疫吸附试验检测80例鼻咽癌患者和65例正常对照者血清DKK1和VCA-IgA的水平，采用受试者工作特征（ROC）曲线评价诊断效能。结果鼻咽癌患者血清DKK1的表达水平明显高于正常对照组[580．773（429．146）pg／ml ∶316．174（252．965）pg／ml]，差异有统计学意义（Z＝4．846，P＜0．0001）。ROC曲线显示血清DKK1对鼻咽癌的最佳诊断临界值为611．981 pg／ml，其诊断曲线下面积（AUC）为0．734（95％CI为0．654～0．815），敏感性为50．0％，特异性为96．9％。VCA-IgA对鼻咽癌的诊断AUC为0．714（95％CI为0．631～0．798），敏感性为47．5％，特异性为95．4％。DKK1和VCA-IgA联合检测的诊断AUC为0．849（95％CI为0．783～0．914），敏感性为76．3％，特异性为95．4％。早期鼻咽癌患者DKK1和VCA-IgA联合检测效果优于正常对照组，差异有统计学意义（χ2＝23．784，P＜0．001）。结论血清DKK1对鼻咽癌具有潜在的诊断价值，联合检测VCA-IgA有助于鼻咽癌的早期诊断。

EB病毒壳抗原gp125的表达和初步应用

以痘苗病毒为载体克隆了 Epstein-Barr 病毒(EBV)壳抗原(VCA)的基因,重组痘苗病毒在感染细胞表达蛋白产物。用间接免疫荧光、免疫印迹技术和免疫电镜确定反应的特异性,表达产物位于细胞浆内和核内,胞浆内大量集聚,致使核偏向一侧,分子量约为100000。重组痘苗病毒免疫血清能特异性地与 B95-8细胞浆内的抗原反应。用重组病毒感染的细胞为靶细胞,并以 B95-8细胞和天坛株痘苗病毒感染的细胞分别为阳性和阴性对照,用免疫荧光方法平行检查不同人群血清中的VCA/IgG 和 VCA/IgA 抗体。结果表明,基因工程表达产物的特异性和在检查人血清抗体中的意义,为 ELISA 的建立和应用提供可靠的依据和抗原来源。

化学发光法检测EB病毒衣壳抗原IgM抗体的性能评估

目的评估化学发光法(CLIA)检测EB病毒衣壳抗原IgM抗体的性能,以确定临床使用该方法筛查的可行性。方法3选择2017年7月-2018年2月,在浙江省丽水市中心医院就诊的疑似EB病毒感染者200例和确诊EB病毒感染者35例为研究对象,选择同期健康体检者35例为对照组,分别采用CLIA法ELISA法检测EB病毒衣壳抗原IgM抗体( EB-VCAIgM)。结果用CLIA法检测EB一VCAIgM抗体的空白限、检出限、定量检出限分别为0.65 U/ml 2.9 U/ml、3.4 U/ml。批内变异系数在高低2个水平分别为2.49% 3. 57%,批间变异系数在高低2个水平分别是3.30%.6. 56%,线性范围为1.0 U/ml ~ 160.0 U/ml,,临床可报告范围为1.0 U/ml~ 160 U/ml。CLIA 法临床符合率为97.14%;用CLIA法与ELISA法检测EB-VCAIgM抗体的一致百分率为94.5%。结论本研究的化学发光法测定EB病毒衣壳抗原IgM抗体符合规定的性能,可替代ELISA法用于临床EB病毒筛查。

扶正清鼻方辅助放疗治疗鼻咽癌40例

目的:探讨扶正清鼻方辅助放疗治疗鼻咽癌(NPC)放射性口腔黏膜损伤及对血浆脱氧核糖核酸(EBV-DNA),血清EB病毒衣壳抗原抗体(VCA-IgA)和早期抗原抗体(EA-IgA)的影响。方法:将80例NPC患者随机按入诊前后顺序分为对照组和观察组各40例。对照组进行放疗+对症支持治疗。观察组在对照组治疗的基础上加服扶正清鼻方,1剂/d。两组疗程均为12周。观察放射性口腔黏膜损伤出现时间及程度,于第3,7周进行生活质量评分;采用聚合酶链式反应法(PCR)检测血浆EBV-DNA水平;采用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测血清VCA-IgA和EA-IgA水平。结果:治疗后第3周,观察组放射性口腔黏膜损伤Ⅲ级反应发生率为40%,对照组为57.5%,差异无统计学意义;观察组Ⅳ级反应发生率为2.5%,对照组为17.5%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后第7周,观察组Ⅲ级反应发生率为55%,对照组为70%;治疗组Ⅳ级反应发生率为7.5%,对照组为25%,差异有统计学意义(P<0.05);对照组出现放射性口腔黏膜反应时间为(18.5±2.8)d,观察组为(15.5±2.7)d,观察组晚于对照组(P<0.01);治疗后观察组血浆EBV-DNA水平低于对照组(P<0.01);治疗后观察组血清VCA-IgA和EA-IgA水平低于对照组(P<0.01)。结论:扶正清鼻方能减轻鼻咽癌放射性口腔黏膜损伤,并能抑制咽癌血清EB病毒,降低血清病毒抗体水平,这可能对NPC复发或转移抑制作用。