DEB-2菌株产抗真菌活性物质的初步研究

为寻找新的抗真菌药物,对DEB-2菌株中产生的抗真菌作用的粗提物进行了初步研究。结果表明:DEB-2菌株发酵液中的抗菌物质可能是一种蛋白质或肽类物质、分子量大于3.5 kD;该抗真菌物质具有较高的热稳定性,121℃处理20 min活性没有损失,对变性剂脲、紫外线相当稳定,在酸碱条件下仍具有一定活性;对木瓜蛋白酶不稳定。

DEB-2菌株对贵州苹果早期落叶病病原的毒力效应

为苹果早期落叶病的生物防治提供依据,采用组织分离法分离病原、形态与分子鉴定方法鉴定贵州苹果落叶病病原,用生物测定法研究DEB-2菌株对贵州苹果早期落叶病病原的毒力效应。结果表明:贵州苹果早期落叶病主要为苹果轮斑病和苹果斑点落叶病,其病原分别为轮斑病病原(Alternaria mali)和苹果斑点落叶病病原(Altemaria alternata);DEB-2菌株发酵液对A.mali和A.alternata抑制菌丝生长的EC50值分别为1.34%和0.12%;对抑制孢子萌发的EC50值分别为2.32%和5.32%。DEB-2菌株发酵液有效地抑制了贵州苹果早期落叶病原菌的菌丝生长和孢子萌发。

DEB-2产抗真菌活性物质发酵条件及有机试剂对其活性的影响

为探索DEB-2菌株生产生物农药的工业发酵条件,采用活性检测方法,对DEB-2菌株的发酵培养基及其制备工艺、发酵罐的最适宜发酵时间,发酵液剂型的基础条件如干燥方法、干燥时间和有机试剂对抗菌物质的影响等进行研究。结果表明:最佳培养基为PD培养基,最佳铃薯汁液量为30%。在培养基制备工艺的筛选中,马铃薯打浆法与马铃薯煮汁法的效果相当。在100 L发酵罐中PD培养基的装液量为70%、发酵温度35℃、发酵时间为40.2 h时发酵液的抗菌活性达到最高,抑制率达100%。滤纸过滤和8000 r/min离心10 min处理发酵液对其活性物质几乎没有影响;冻干处理的发酵液中活性物质较烘干的损失小,其抗菌活性损失为4.77%。用50%浓度的甲醇、乙醇、丙酮处理DEB-2菌的发酵液,甲醇对其活性影响最小,其上清液的抗菌活性与发酵原液相当。

DEB-2菌株抗真菌活性物质对半夏组培生长的影响

为了开发DEB-2菌株抗真菌活性物质成为组培抗真菌添加剂,采用生长速率法研究了DEB-2菌株抗真菌活性物质对12株组培常见污染菌的抑制作用,并将该抗真菌活性物质添加到组培培养基中,观察其对半夏组培苗生长的影响。结果表明,DEB-2菌株抗真菌物质对组培常见污染菌有较强的抑制作用,在20mL/L浓度下能明显抑制大多数常见组培污染真菌的生长,但对半夏的生长无显著影响;在30mL/L浓度下能显著抑制半夏不定芽的再生率;在40mL/L浓度下对不定芽生长高度的抑制作用极显著,对半夏的生长势有明显的抑制作用。

内生菌DEB-2发酵液对辣椒白星病田间防效初探

试验结果表明,内生菌DEB-2发酵液对辣椒白星病有较好的防治效果。第1次药后7d,内生菌DEB-2发酵液原液、稀释1倍液的防效分别为65.07%、58.91%。末次药后7d防效分别为76.07%、68.17%。内生菌DEB-2发酵液对辣椒整个生育期安全,在生产上推荐使用内生菌DEB-2发酵液原液。

链霉菌182-2抗真菌活性物质的分离及抑菌特性的初步研究

[目的]链霉菌182-2的发酵液对烟草赤星病有良好的抑制作用,本文拟对其发酵液中抗真菌活性组分进行初步分离,并进行抑菌特性研究。[方法]发酵液经预处理后,依次用活性炭脱色,大孔树脂吸附层析分离纯化,对纯化后活性物质(组分Ⅱ)的抑菌活性进行测定。[结果]分离纯化结果表明其活性物质中至少含有两种抗真菌活性组分。离体条件下当活性物质浓度为2 000μg/mL时,对烟草赤星病菌有很强的抑菌作用,抑菌圈直径达58.0mm。目测法测定抗生作用表明其最小抑菌浓度(MIC)为80μg/mL,最小杀菌浓度(MBC)为160μg/mL。48h时对菌丝生长和孢子萌发的抑制率最高,抑菌中浓度(EC50)分别为31.9μg/mL和42.2μg/mL。活性组分处理还可导致病原菌菌丝和孢子萌发产生的芽管变形扭曲或产生大泡囊。[结论]纯化后的活性物质对烟草赤星病菌具有较强的抑制作用,有进一步研究利用的价值。

石斛抗真菌内生细菌的筛选及其抗菌特性的初步研究

从药用植物石斛组织中分离到4株具有抗真菌活性的细菌菌株,其中DEB-2菌株具有比较稳定的抗真菌作用,能强烈抑制多株植物病原菌、人体病原菌、植物内生菌和食品腐败菌,显示该菌在植物真菌病害的防治、抗真菌药物的筛选、食品防霉变和植物组织培养污染真菌的防治上有一定的应用前景;抗菌机理观察,发现被拮抗菌丝尖端均有不同程度变粗、膨大、崩解或者菌丝分枝增多的现象,表明被拮抗菌丝的细胞壁可能被破坏,使细胞内原生质流出而抑制其菌丝的尖端生长.

小麦赤霉病生防菌的筛选及其活性物的初步研究

本研究以课题组前期筛选获得的8株具有生防活性潜力的细菌为基础,从中筛选具有防治小麦赤霉病的活性菌株,并初步探究其生防活性基础。通过平板对峙法初步筛选,结果发现,2株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)DEB-2与D_(1)具有较高的抑菌活性,抑菌率分别为51.32%和49.48%,DEB-2发酵物的抑菌活性高于D_(1)。菌株遗传稳定性和菌株发酵液对紫外照射敏感性检测发现,DEB-2和D_(1)都具较高的稳定性,且二者之间均无明显差异。在pH值和温度稳定性方面,DEB-2的稳定性显著高于D_(1),DEB-2不受pH值影响,D_(1)随pH值升高而活性降低;在121℃时,DEB-2发酵液抑菌率仍保持在62.35%,D_(1)下降至15.74%。生测结果表明,DEB-2的防治效果明显高于同类市售枯草芽孢杆菌。由此,以DEB-2作为小麦赤霉病生物防治的候选菌株。为进一步探究DEB-2活性的物质基础,利用GC-MS分析活性乙酸乙酯层,发现一个环-(L-苯丙氨酸-L-脯氨酸)化合物,其已被报道具有较强的拮抗小麦赤霉病菌的作用。由此推测,DEB-2对小麦赤霉病菌具有较高的拮抗作用可能与其产生的环-(L-苯丙氨酸-L-脯氨酸)相关。