T-SPOT中TBAg/PHA比值在结核病诊断中的应用价值

目的探讨结核分枝杆菌特异性抗原(TBAg)/植物凝集素(PHA)比值诊断活动性结核病(ATB)、潜伏性结核病(LTBI)及陈旧性结核病(OTB)的应用价值。方法选取2016年10月至2017年6月该院收治的住院且T细胞斑点试验(T-SPOT)检测均为阳性的结核病患者191例,其中确诊为ATB患者101例,LTBI患者84例,OTB患者6例。采用T-SPOT试验对2种TBAg进行检测,包括早期分泌靶抗原-6(ESAT-6)和培养滤液蛋白-10(CFP-10)。统计ESAT-6、CFP-10和PHA形成的斑点数(sfc),计算ESAT-6/PHA比值和CFP-10/PHA比值,其中比值大者定义为TBAg/PHA比值并纳入统计分析。结果 ATB组患者PHA sfc显著低于LTBI组和OTB组,TBAg/PHA比值显著高于LTBI组和OTB组,差异均有统计学意义(P<0.05);以TBAg/PHA比值为0.279 8作为区分ATB和LTBI的临界值,灵敏度和特异性分别达82.00%和91.67%。结论 TBAg/PHA比值可用于诊断ATB,且在鉴别ATB和LTBI方面具有较好的临床应用价值。

检测雏鸭肝炎病毒的单克隆抗体-抗原斑点试验的建立

以微孔滤膜为抗原栽体,用酶标记的单克隆抗体直接检测病死雏鸭组织和鸭胚(或鸡胚)尿囊液中的雏鸭肝炎病毒(DHV-1)。建立了抗原斑点试验(AST)。试验的最佳工作条件:以50％脱脂牛奶,37℃1小时封闭;酶标单抗浓度为1:1600;底物缓冲液为0.05mol/LpH7.6Tris-HCl。用该法检测了175份病料,并进行阻断试验、交叉试验、平行试验及重复性试验。结果证明,这是诊断雏鸭肝炎病毒的一种微量、简便、特异性强的方法。

斑点免疫金渗滤法检测鸭肝炎病毒的研究

用胶体金标记提纯后的兔抗鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）ＩｇＧ，建立了一种以微孔滤膜为固相载体，以红色胶体金为标记物的检测ＤＨＶ的斑点免疫金渗滤法（ＤＩＧＦＡ），并确定了最佳试验条件。该法既可定性，亦可定量，对纯化ＤＨＶ的最小检测量为４．１２ｎｇ／点，其敏感性为抗原斑点试验（ＡＳＴ）的２倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明ＤＩＧＦＡ检测ＤＨＶ具有较高的特异性。对ＤＨＶ鸡胚尿囊液ＤＩＧＦＡ法检出率为１００％。ＤＩＧＦＡ和ＡＳＴ法对３６份临床样本检测阳性率分别为８３．３％和７５％，其阳性符合率为８６．７％。随机抽样的６份ＤＩＧＦＡ阳性肝脏样本经人工发病试验后电镜检查，均发现大量直径３０～４０ｎｍ的病毒粒子。实验结果表明，ＤＩＧＦＡ法是一种微量、敏感、特异、快速、简便的检测ＤＨＶ方法。

抗原斑点法检测三硝基甲苯血红蛋白加合物的研究

抗原斑点试验是一种半定量测定ＴＮＴ－Ｈｂ加合物的新技术，具有比较灵敏、特异、简便和经济快速等特点，适用于现场调查或初筛试验。其最低检测限为２４．３ｎｇ４Ａｍｇ／Ｌ，最小检出值０．１５μｇ４Ａ／ｇＨｂ；１８份ＴＮＴ接触工人样品均检出４Ａ－Ｈｂ加合物，而６份对照样品未检出，两者差别具有高度显著性（Ｐ＜０．００１）。

抗杜氏利什曼原虫犬分离株单克隆抗体的研制及用于病犬血清循环抗原的检测

本文报道用杜氏利什曼原虫大分离株前鞭毛体膜抗原免疫BALB/c小鼠的脾细胞与Sp2/0瘤细胞融合,得到多株分泌抗体较高且稳定的细胞株。进一步筛选出McAb C11-G10-A4可用于检测病犬血清循环抗原。用McAb-AST检测采自甘肃省黑热病流行区的30份犬血清,阳性率30％。与骨髓涂片查病原体的总符合率为86.7％,阳性符合率达100％。69份非流行区对照大血清检测结果,仅1份出现阳性反应,可见本试验的敏感性较高,特异性较强(98.55％)。

结核感染T细胞斑点试验中结核特异性抗原/植物血凝素比值对肺外结核的诊断价值

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)中结核特异性抗原(TBAg)/植物血凝素(PHA)比值在肺外结核(EPTB)诊断中的应用价值。方法选择2018年1月至2020年1月新乡医学院第一附属医院收治的522例疑诊的EPTB患者为研究对象,根据最终是否诊断为EPTB,将患者分为EPTB组(n=209)和非EPTB组(n=313)。2组患者均行T-SPOT.TB检测,比较2组患者T-SPOT.TB检测结果阳性率、PHA斑点形成细胞(sfc)数、早期分泌靶向抗原6(ESAT-6)sfc数、培养滤液蛋白10(CFP-10)sfc数及TBAg/PHA比值。比较ESAT-6 sfc数、CFP-10 sfc数及TBAg/PHA比值对EPTB的诊断价值。结果EPTB组和非EPTB组患者T-SPOT.TB检测结果阳性率分别为88.5%(185/209)和24.3%(76/313);EPTB组患者T-SPOT.TB检测结果阳性率显著高于非EPTB组(χ^(2)=206.840,P<0.05)。EPTB组患者T-SPOT.TB检测结果中ESAT-6 sfc数、CFP-10 sfc数、TBAg/PHA比值均显著高于非EPTB组,PHA sfc数显著低于非EPTB组(P<0.05)。根据受试者工作特征(ROC)曲线,TBAg/PHA比值诊断EPTB的特异度显著高于ESAT-6 sfc数和CFP-10 sfc数(P<0.05);ESAT-6 sfc数、CFP-10 sfc数、TBAg/PHA比值诊断EPTB的ROC曲线下面积和灵敏度比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论TBAg/PHA比值可显著提高T-SPOT.TB诊断EPTB的特异度,在EPTB诊断中具有较好的应用前景。

外周血T细胞抗原刺激试验(T-SPOT)在结核病检测中的应用

目的通过分析T细胞抗原刺激试验(T-SPOT)在结核感染临床检测中的特异性和敏感性,探讨T-SPOT法在普通人群、高危人群和疑似人群中结核病筛检的准确性和适应范围。方法研究对象为湖南省湘西自治州人民医院2016年5-9月期间确诊的结核病和非结核病患者。取研究对象外周血并分离出外周血单个核细胞(PBMC),应用T-SPOT法、抗酸杆菌染色、PPD试验、结核抗体检测四种方法对两组病人的感染情况进行检测,对四种方法的敏感性和特异性进行统计学分析。对T-SPOT法在不同人群中检测结核感染中的阳性率进行预测。结果 T-SPOT法检测结核感染的敏感性和特异性分别为93.4%和77.3%。T-SPOT在结核病组的阳性率为93.3%,高于非结核病组的阳性率22.6%(χ~2=152.81,P<0.01)。在结核病组内和非结核病组内不同病症比较,结果提示T-SPOT方法应用于对结核病的辅助诊断具有医学意义。T-SPOT法、抗酸杆菌染色、PPD试验、结核抗体检测的Kappa值分别为0.691、0.183、0.525、0.185,从Kappa值上看,只有T-SPOT法的值大于0.6,说明此诊断方法与真实情况一致性比较高,准确性更好。预测T-SPOT法在普通人群、高危人群和疑似人群中的阳性率分别为23.03%、31.07%和67.75%,但是其中真正有结核感染比率分别为1.87%、34.85%和43.60%。结论 T-SPOT法对结核病的诊断准确性优于抗酸杆菌染色、PPD试验和结核抗体检测三种方法,但T-SPOT法不适用于对普通人群结核病的筛检,仅适合于对高危人群的筛检和对疑似结核病的辅助诊断。