恶性疟原虫FCC1/HN株EBA-175基因克隆及序列分析

目的 将恶性疟原虫 FCC1/ HN株 175 ku的红细胞结合抗原 (EBA- 175 )基因克隆入测序载体 ,测定其序列 ,为以后研究其结构与功能奠定基础。 方法 利用 PCR扩增技术 ,分两个片段从恶性疟原虫 FCC1/ HN株基因组 DNA中 ,特异扩增 EBA- 175全基因编码序列。扩增产物经纯化回收后 ,T- A克隆入测序载体 p MD18- T,转化大肠杆菌 (E.coli) DH5 α,筛选阳性克隆 ,并进行双酶切及 PCR扩增鉴定 ,获得含有编码 EBA- 175基因的重组质粒 p MD18- T- EBA。用Sanger双脱氧链终止法进行 DNA序列测定。 结果 FCC1/ HN株 EBA- 175基因序列与 Camp株基本一致 ,全长 430 8bp,编码 1435个氨基酸 ,含有与 Camp株相似的 C片段。利用计算机软件对其 RII区的 F2亚区以及 4肽进行抗原表位分析 ,结果显示这些区域可能含有抗原表位。 结论 EBA- 175全基因编码序列的测定 。