酶解法制备鹿角盘胶原蛋白的工艺

确定鹿角盘胶原蛋白的酶解法制备工艺。采用正交试验考察法,优选出最佳提取工艺,用高效凝胶色谱法,筛选最佳酶解条件。鹿角盘胶原蛋白的最佳制备工艺为:料液比(g/mL)1:10,水煮5 h,提取4次,胰蛋白酶与底物(鹿角盘粉)比是1:10 000,酶解时间为1.5 h。验证试验结果表明,鹿角盘胶原蛋白收率为22.31%,蛋白含量为66.32%。

鹿角盘蛋白的分离纯化与活性研究

通过超微粉碎技术使坚硬的鹿角盘粉碎,再运用生物化学技术,经过浸提、盐析、透析、分子筛层析等生物技术,分离纯化出一种鹿角盘蛋白APPB,然后通过动物实验考察其活性作用.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,检测其分子质量在20.1～31.0 KD之间,通过动物活性实验证明,分离得到的鹿角盘蛋白有一定的抗炎镇痛作用.

梅花鹿鹿角脱盘总肽的分离纯化及其抗肿瘤活性研究

目的分离纯化梅花鹿鹿角脱盘总肽,以小鼠乳腺癌细胞系MA782为体外研究对象,初步研究鹿角脱盘总肽的抗肿瘤活性。方法采用酸提醇沉、真空旋转蒸发及冷冻干燥提取鹿角脱盘总肽,再经Sephadex G-25凝胶过滤层析除盐,BCA法测定总肽的蛋白质浓度,SDS-PAGE电泳分析总肽中的蛋白质,MTT法和流式细胞仪检测鹿角脱盘总肽对小鼠乳腺癌细胞系MA782增殖的影响和细胞周期的变化。结果分离纯化出鹿角脱盘总肽粗提物,其蛋白质含量为91.800%;SDS-PAGE分析显示,鹿角脱盘总肽中主要含有11 kDa,18 kDa,40 kDa,64 kDa和80 kDa 5种多肽,总肽对小鼠乳腺癌细胞的增殖具有明显抑制作用,细胞周期各期细胞比例变化明显,当总肽浓度为30 mg/L时,作用72 h后细胞抑制率最高为69.200%,G0/G1期细胞百分比为81.621%,S期细胞百分比为8.983%。结论鹿角脱盘总肽对乳腺癌细胞具有抑制作用,为深入研究鹿角脱盘的抗肿瘤活性提供了实验依据。

梅花鹿角脱盘多肽的分离纯化及对乳腺癌细胞端粒酶活性的影响

目的分离纯化梅花鹿鹿角脱盘多肽;以小鼠乳腺癌细胞系MA782为体外研究对象,初步研究鹿角脱盘多肽对肿瘤细胞端粒酶活性的影响。方法采用酸提醇沉法提取鹿角脱盘多肽,再经Sephadex G-25凝胶过滤层析除盐,BCA法测定的多肽蛋白质含量,TRAP-银染法分析MA782细胞端粒酶活性的变化,再利用相对荧光定量PCR技术检测MA782细胞端粒酶催化亚基TERT基因的表达水平。结果分离纯化出鹿角脱盘多肽粗提物,其蛋白质含量为91.800%;TRAP-银染法检测MA782细胞端粒酶的活性发现,与对照组细胞比较,多肽使细胞端粒酶活性有所下降,典型的重复序列条带数依次减少,多肽处理24 h、48 h、72 h、96 h、120 h后,MA782细胞中相对端粒酶活力分别为91.4、78.3、66.5、47.8、29.2、20.5,呈时间依赖性;相对荧光定量PCR法分析结果表明,与对照组比较,TERT基因的表达水平降低。结论鹿角脱盘多肽对乳腺癌细胞端粒酶活性有一定的抑制作用,可为深入研究鹿角脱盘多肽抗肿瘤活性提供依据。

鹿角盘有效成分及功效研究进展

对鹿角盘有效成分及功效进行综述。鹿角盘有效成分包括蛋白质、多肽、氨基酸、矿物质元素、多糖、胆固醇、脂类、性激素等,其药用功效包括抗肿瘤、消炎镇痛、抗氧化、抗疲劳、抗病毒、抑制乳腺增生、抑制骨质疏松、抑菌等。

鹿角盘蛋白质酶法水解作用研究

研究鹿角盘中蛋白质酶法水解条件。用胰酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶在相同条件下水解鹿角盘蛋白质,比较氨基氮生成率,选择适宜酶类。用所选定的酶在不同温度(T)、不同底物浓度比(E/S)和不同水解时间(t)水解鹿角盘蛋白质,以氨基氮生成率为指标确定最佳水解条件。胰蛋白酶为适宜酶,最佳水解条件为:温度45℃,pH 8.0,底物浓度7.5%,酶与底物浓度比6 000μ/g,时间6h。胰蛋白酶是水解鹿角盘蛋白质较适宜的酶,在上述最佳条件下,水解鹿角盘蛋白质,氨基氮生成率达42%,氮溶解指数达93%,水解液中蛋白质绝大多数为低肽分子,更有利于机体消化吸收。

复方麦鹿芪人参制剂主要成分变化及其在肝癌H22荷瘤小鼠体内的抗肿瘤作用

目的:分析复方麦鹿芪人参制剂配伍后主要成分的变化,探讨其对肝癌H22荷瘤小鼠的体内抗肿瘤作用。方法:采用HPLC法测定复方麦鹿芪人参制剂中人参皂苷和氨基酸的含量,苯酚硫酸法测定复方麦鹿芪人参制剂中多糖的含量。将144只雌性昆明小鼠随机分为正常对照组,模型组,阳性药组,低、中、高剂量复方麦鹿芪人参组,人参羹组,人参原粉组和鹿角脱盘原粉组,每组16只。除正常对照组外,其余8组构建肝癌H22荷瘤小鼠模型,造模后次日给药,连续给药10d后测定各组小鼠瘤质量,计算各组小鼠肿瘤抑制率、脾脏指数和胸腺指数,HE染色法观察肿瘤组织和脾脏组织的形态表现,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率。结果:以人参和鹿角脱盘单味生药量计,复方麦鹿芪人参制剂中人参皂苷、多糖和氨基酸含量明显高于单味药(P<0.05)。与模型组比较,各剂量给药组小鼠肿瘤抑制率明显增加(P<0.01),各剂量复方麦鹿芪人参组小鼠脾脏指数和胸腺指数明显升高(P<0.01),肿瘤细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。与模型组比较,各剂量复方麦鹿芪人参组小鼠肿瘤组织被破坏,细胞排列疏松,形状不规则,可见坏死灶;脾脏组织白髓结构逐渐趋于正常,边缘区可辨,淋巴细胞排列密集。结论:复方麦鹿芪人参制剂中皂苷、多糖和氨基酸含量与单味药相比均明显增加,且其抗肿瘤作用较单味药更强。

梅花鹿鹿角脱盘化学成分的研究

对梅花鹿鹿角脱盘的主要化学成分分别进行了含量测定。结果表明:鹿角脱盘中含有16种氨基酸,其中含有7种人体必需氨基酸;鹿角脱盘中粗蛋白含量为32.800%,水溶性蛋白质含量为12.800%;总糖、还原糖和可溶性糖含量分别为1.682%、0.575%和1.143%;而总粗脂肪、游离脂肪酸和磷脂含量分别为1.910%、0.067%和0.300%;鹿角脱盘中含有钙、钾、锌、锰、铁、镁、钠等矿质元素。

梅花鹿鹿角盘蛋白的分离纯化及其对大肠杆菌抑菌机制的初步研究

目的分离纯化梅花鹿鹿角盘蛋白并对其抑菌机制进行初步探究。方法以鹿角盘为原料,采用酸提醇沉提取鹿角盘总蛋白,SephacrylS-100HR和反向高效液相层析分离纯化鹿角盘抗菌蛋白,最终确定蛋白质分子质量。以大肠杆菌为研究对象,测定抗菌蛋白的最小抑菌浓度(MIC);结合荧光显微镜、扫描电镜、流式细胞仪等方法从大肠杆菌细胞膜通透性、完整性和ROS活性氧的产生等方面探讨鹿角盘蛋白对大肠杆菌的抑制机制。结果 SephadexG-25除盐后总蛋白含量为90.3%,经SephacrylS-100HR凝胶层析获得分子量<20.1 kDa的蛋白组分S2对大肠杆菌具有抑菌活性,将S2(<20.1 kDa)组分通过反相高效液相得到抗菌蛋白18.963 kDa。抗菌蛋白在浓度为5 mg/mL时对大肠杆菌具有最小抑菌能力;处理组在一定时间内电导率、β-半乳糖苷酶活性的显著差异表明细胞膜通透性受损;扫描电镜发现抗菌蛋白作用后菌体出现变形、塌陷、皱缩、破碎,荧光显微镜观察PI单染处理组荧光强度增强,说明抗菌蛋白破坏了大肠杆菌细胞膜、细胞壁的完整性;菌体经抗菌蛋白浓度为2倍最小抑菌浓度(2 MIC)处理2 h,流式细胞仪检测ROS表达量为69.3%,菌体氧化应激水平显著提高,从而对大肠杆菌起到一定的抑制作用。结论鹿角盘蛋白经过分离纯化后得到的抗菌蛋白可能通过改变大肠杆菌细胞膜通透性、细胞壁完整性和提高菌体氧化应激水平,从而起到抑菌的作用。

梅花鹿鹿角盘活性肽的分离鉴定及其抑菌活性分析

【目的】分离和鉴定梅花鹿鹿角盘活性肽,并研究其抑菌活性,为其制备和开发利用提供参考。【方法】利用酸提醇沉法从梅花鹿鹿角盘粉末中提取总蛋白,过0.45μm滤器后,用凝胶过滤层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)等方法,从鹿角盘总蛋白中分离、纯化天然活性肽,利用液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)方法对其进行鉴定,通过二倍稀释法分析天然活性肽对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的最小抑菌质量浓度(minimal inhibit concentration,MIC);在此基础上,以不添加活性肽的菌悬液为对照,用不同质量浓度的天然活性肽处理大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,检测菌液的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性和电导率,分析天然活性肽对病原菌菌体生长曲线以及细胞壁和细胞膜的影响。【结果】从梅花鹿鹿角盘总蛋白中成功分离出纯度为93.70%的天然活性肽,其相对分子质量为4543.14,序列与抗菌肽(UNIPORT:A8QJ91)相似,并将其命名为梅花鹿鹿角盘活性肽(sika antler plate bioactive peptide,SAPBP)。SAPBP对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌质量浓度分别为0.5和1 mg/mL,对以上2种病原菌的生长曲线有明显影响。与对照相比,不同质量浓度SAPBP作用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌菌体后,碱性磷酸酶活性和菌液电导率均明显上升,可知SAPBP对病原菌菌体细胞壁和细胞膜造成不同程度的损伤,其中2 MIC SAPBP对病原菌的破坏作用最为明显。【结论】从梅花鹿鹿角盘总蛋白中分离纯化出了天然活性肽,该活性肽对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有一定的抑制作用。

鹿角脱盘活性物质的研究与开发利用

鹿角脱盘为传统名贵中药鹿茸的副产品,其药用价值一直被忽视。随着科学技术的进步,对鹿角脱盘中生物活性物质的研究逐渐引起了人们的重视,文章综述了近年来鹿角脱盘的活性成分和药理作用的研究进展以及开发利用情况。

鹿角脱盘胶原蛋白对去卵巢所致骨质疏松大鼠的治疗作用

目的研究鹿角脱盘胶原蛋白对去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用。方法 Wistar大鼠,♀,随机分为6组:假手术组,模型对照组,阳性对照组和鹿角脱盘胶原蛋白高、中、低剂量组。采用摘除双侧卵巢法建立骨质疏松模型,术后7 d开始给药,连续给药90 d,检测大鼠骨密度、血清碱性磷酸酶(ALP)活性和羟脯氨酸(Hyp)含量,骨组织形态计量学参数、骨力学、体重和脏器系数等。结果与模型对照组比较,鹿角脱盘胶原蛋白治疗后大鼠骨密度显著增加、血清中ALP活性降低、Hyp含量升高,骨组织形态计量学参数及骨力学指标显著改善。体重和脏器系数无显著影响。结论鹿角脱盘胶原蛋白对去卵巢所致的骨质疏松大鼠有一定的治疗作用。

2015年版《中华人民共和国药典》收载的鹿源药材中硫酸软骨素含量分析

目的:研究2015年版《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)收载的鹿源药材中硫酸软骨素的含量差异。方法:采用稀碱-浓盐法提取,硫酸软骨素ABC酶酶解样品中的硫酸软骨素,应用高效液相色谱法对样品中的总硫酸软骨素及硫酸软骨素A、B、C含量进行测定;色谱条件:Hypersil SAX强阴离子硅胶色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以2 mol·L^(-1)的氯化钠溶液(盐酸调pH至3.5)和水(盐酸调pH至3.5)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长232 nm,柱温40℃。结果:梅花鹿鹿茸、鹿角(鹿角脱盘)、鹿角胶(鹿角脱盘胶)、鹿角霜(鹿角脱盘霜)中硫酸软骨素含量分别为2.06、0.46(0.42)、0.93(1.10)、0.22(0.17)g·kg^(-1);马鹿鹿茸、鹿角(鹿角脱盘)、鹿角胶(鹿角脱盘胶)、鹿角霜(鹿角脱盘霜)中硫酸软骨素含量分别为1.83、0.41(0.34)、0.91(0.87)、0.19(0.15)g·kg^(-1)。结论:《中国药典》收载的鹿源药材中硫酸软骨素的含量差异很大,鹿茸中的最高,鹿角胶、鹿角、鹿角霜中的依次递减。

梅花鹿鹿角盘小肽的提取及体外抑菌活性研究

为了研究梅花鹿鹿角盘小肽提取工艺及体外抑菌活性,试验采用酸提、醇沉、超声辅助、凝胶除盐、Sephadex G-50凝胶层析和热提、酶解等方法制备鹿角盘小肽,利用二甲酸喹啉法、SDS-PAGE电泳、电喷雾质谱等方法对所制备的小肽分子进行分析,利用滤纸片扩散法对2种小肽的体外抑菌活性进行初步研究。结果表明：两种方法得到的鹿角盘小肽分子质量均在5.0 ku以下,对革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌均有不同程度的抑制作用。说明梅花鹿鹿角盘中含有抑菌活性的小肽。

火烧和刈割对关中地区紫花苜蓿生长特性及土壤水分变化的影响

为了探究紫花苜蓿生育期内植株动态生长规律及对土壤0-300 cm深度水分变化的影响,试验以2年生的紫花苜蓿为研究对象,在返青前对前茬分别进行火烧和刈割处理,记录整个生育期内植株株高的动态变化,并在开花期植株生长基本停滞阶段采集0-300 cm深度土层土壤测定含水量。结果表明：火烧和刈割处理后的紫花苜蓿生长轨迹一致;火烧处理后的紫花苜蓿相比刈割处理返青期提前、最大生长速率出现时间提早,在返青期到现蕾期火烧处理后的紫花苜蓿株高显著高于刈割处理,但在结荚成熟期两者株高无显著差异;火烧处理后的紫花苜蓿土壤含水量分布曲线呈＂〈＂字型,刈割处理后呈＂3＂字型;火烧处理后的紫花苜蓿相比刈割处理土壤含水量更低,相对土壤干层厚度更厚,在0-200 cm土层深度两者土壤含水量差异显著,在200-300 cm土层深度两者无显著差异;紫花苜蓿生长对土壤水分是消耗过程,株高动态变化与土壤垂直层面含水量变化呈显著负相关,尤以火烧处理后0-200 cm土层负相关性更强。说明根据植株生长轨迹和土壤水分分布规律,在保证土壤水分充足的情况下火烧处理相比刈割处理有利于紫花苜蓿提早、提快生长。