鹿茸粉对小鼠酒精急性肝损伤的保护作用

利用酒精复制小鼠急性肝损伤模型,测定小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性,观察肝组织病理学形态及肝细胞的超微结构。结果表明,鹿茸粉大剂量组可显著降低血清中ALT、AST的水平(P<0.01),小剂量组差异不显著(P>0.05),中、高剂量组发生肝细胞坏死的动物例数减少,病变程度减轻,电镜检测结果表明,鹿茸粉能改善染色质边集、内质网扩张、线粒体肿胀、细胞质膜受损等病理改变,可见鹿茸粉对小鼠酒精急性肝损伤有明显的保护作用。

不同粒径鹿茸总氨基酸的含量及体外溶出度的测定

目的建立鹿茸细粉、超微粉总氨基酸的含量测定方法 ,并以总氨基酸为指标测定两种粉体的体外溶出度。方法采用单因素试验和正交试验优选总氨基酸的提取工艺;以甘氨酸为对照品,采用紫外分光光度法测定总氨基酸含量;测定鹿茸细粉、超微粉在p H值1.2、4.0、6.8三种溶出介质中溶出度。结果总氨基酸提取最优工艺为100倍量70%乙醇,超声提取60 min,提取1次;细粉和超微粉总氨基酸含量分别为4.16、4.30 mg/g;细粉在p H值1.2、4.0、6.8介质中的溶出率分别为38.55%、56.42%、107.88%;超微粉在p H值1.2、4.0、6.8介质中溶出率分别为30.97%、50.85%、99.67%。结论提取工艺合理、可靠;含量测定方法简便、准确;鹿茸两种粉体的总氨基酸均在p H值6.8的磷酸盐缓冲液中溶出度高,为鹿茸肠溶剂型的开发提供了一定的思路。

市售鹿茸饮片及鹿茸粉的DNA条形码鉴定

目的利用COI序列对市售鹿茸饮片、鹿茸粉进行鉴定,并建立统一的分子鉴定方法。方法对不同产地的鹿茸饮片及鹿茸粉分别进行DNA提取、COI序列扩增和序列测定,建立分子鉴定方法,并对市售鹿茸饮片、鹿茸粉进行调查分析。结果鹿茸饮片均可以使用COI通用引物进行PCR扩增和测序;物种之间相互区分明显;市售40份药材中14份为药典规定物种,26份为非药典规定物种;鹿茸粉未成功获得COI序列。结论COI序列的DNA条形码鉴定方法可准确、有效鉴定市售鹿茸饮片,此方法为市场监管鹿茸饮片提供科学手段。

鹿茸粉对四氯化碳急性肝损伤小鼠肝脏超微结构的影响

用四氯化碳复制小鼠急性肝损伤模型,60只小鼠被随机分为6组:空白组,模型组,鹿茸粉低剂量组,鹿茸粉中剂量组,鹿茸粉高剂量组,联苯双酯组(阳性对照)。处死小鼠采集样本制备电镜超薄切片,观察各组小鼠肝脏的超微结构。结果表明,各治疗组均能减轻四氯化碳对小鼠肝脏超微结构的损伤,尤其是鹿茸粉高剂量组和联苯双酯组,表现为线粒体及内质网等细胞器的损伤减轻,细胞质内脂滴减少,染色质边集,细胞质膜受损等病理改变明显减轻。可见,鹿茸粉对四氯化碳急性肝损伤小鼠肝脏的超微结构损伤具有一定的保护作用。

鹿茸粉对四氯化碳急性肝损伤的保护作用

利用四氯化碳构建小鼠急性肝损伤模型,测定小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性,观察肝组织病理学形态,分析肝损伤程度。结果显示:鹿茸粉中、高剂量组与四氯化碳模型组相比ALT、AST水平显著降低(P<0.01),小剂量组差异不显著(P(0.05),中、高剂量组发生肝细胞坏死的动物例数减少,病变程度减轻。鹿茸粉对小鼠四氯化碳急性肝损伤有保护作用,且呈剂量依赖性。

鹿茸粉对CCl4及APAP肝损伤小鼠蛋白合成贮备功能的影响

为了探讨鹿茸粉对肝损伤小鼠肝脏蛋白合成贮备功能的影响,本研究以小鼠为研究对象,建立CCl4及APAP肝损伤模型。除空白组外,其余各组小鼠灌胃给予鹿茸粉,7d后检测其血清TP和ALB含量。结果表明,鹿茸粉能明显提高CCl4及APAP肝损伤小鼠血清TP和ALB的含量,调节蛋白质代谢,改善肝脏的合成贮备功能。

毛细管区带电泳法测定冬虫夏草及鹿茸制品中核苷和碱基成分

应用毛细管区带电泳法测定分别以冬虫夏草菌丝体粉和鹿茸血为主要原料制品中的多种核苷和碱基成分。对实验条件进行了优化,结果表明,以20mmol/L硼砂-15mmol/Lβ-环糊精为缓冲溶液(pH=9.4),分离电压22kV,检测波长254nm,电动进样为10kV、5s时,在10min内同时分离测定了虫草素、腺嘌呤、鸟嘌呤、尿嘧啶、腺苷、次黄嘌呤、尿苷、鸟苷和肌苷。各组分在0.2～200μg/mL范围内呈线性关系,检出限的范围是0.07～1.67μg/mL。5个批次的冬虫夏草菌丝粉保健品中腺嘌呤、尿嘧啶、腺苷、鸟苷、尿苷5组分的定量结果分别在0.15～0.19mg/g、0.72～0.92mg/g、1.44～1.59mg/g、1.51～2.32mg/g和1.77～2.56mg/g范围内,加标回收率的范围是82.83%～109.21%;2个批次的鹿茸血保健品中次黄嘌呤、尿苷的定量结果在36.55～49.97μg/mL和86.08～108.97μg/mL范围内,加标回收率的范围分别是89.68%～96.79%和99.05%～102.81%。

微切变-助剂互作技术制备鹿角盘微切助粉及其活性物质的检测

[目的]检测鹿角盘微切助粉中与骨质疏松症有关的活性物质的含量。[方法]采用微切变-助剂互作技术制备鹿角盘微切助粉,通过与中药粉碎技术相比,考察该技术对鹿角盘颗粒粒径、形态的影响并检测其中活性成分的含量。[结果]经微切变-助剂互作技术处理后,鹿角盘粒径在1~30μm范围内的颗粒数占82.73%,且细胞已被充分破碎,有效成分呈释放的状态。鹿角盘微切助粉中含有丰富的性激素（包括雌二醇、睾酮、孕酮）、类胰岛素样生长因子-1、柠檬酸钙和钙,且含量均高于其粗粉组,说明微切变-助剂互作技术有利于鹿角盘中活性成分的释放,体现了该技术的优越性。[结论]该研究可为合理开发利用鹿角盘提供一种新的粉碎技术,并为阐明鹿角盘防治骨质疏松症提供理论依据。

3D打印鹿角粉/聚乙烯醇支架与纳米级羟基磷灰石/聚乙烯醇支架的性能比较

目的:构建一种新型支架材料(鹿角粉/PVA支架),并与n-HA/PVA支架对比,通过检测其理化、生物性能,评价并探讨其作为骨组织工程支架的可行性。方法:利用3D打印技术,分别制备出鹿角粉/PVA支架、n-HA/PVA支架,进行孔隙率、孔径、吸水率、压缩力学性能及生物相容性的检测。结果:两组支架孔隙率比较无差别,鹿角粉/PVA孔径大于n-HA/PVA支架(P=0.004);在不同时间点上,n-HA/PVA支架的吸水率大于鹿角粉/PVA支架,但鹿角粉/PVA支架持续吸水的时间较长;两组支架的抗压缩性能无差别(P=0.243),但韧性较n-HA/PVA支架好;鹿角粉/PVA支架细胞相容性优于n-HA/PVA支架。结论:鹿角粉/PVA支架具有良好的机械力学性能及细胞相容性,可作为异种骨支架材料研究的新方向。

复方鹿茸超微混悬酒工艺优化及对血虚小鼠模型的影响研究

目的优化复方鹿茸超微混悬酒制备工艺,并对其补血作用进行研究。方法将鹿茸超微粉碎配制为鹿茸药液;采用单因素考察法结合正交试验法优化提取条件,配制不含鹿茸的药液;二者混合得到复方鹿茸超微混悬酒。采用乙酰苯肼与环磷酰胺联合应用方法制备血虚模型,观察各组小鼠体重变化、游泳时间、外周血常规、免疫器官指数的差异,探讨不同给药剂量对小鼠补血的影响。结果配制的鹿茸药液为类乳白色混悬液。提取条件为:乙醇浓度60%、液料比20倍量、提取时间1 h、提取次数3次;配制不含鹿茸的药液为深红棕色药液。补血试验结果表明:与模型组比较,中剂量组与高剂量组可增加小鼠体重(P<0.01),延长游泳时间(P<0.01或P<0.05),升高外周血象中红细胞、血红蛋白、红细胞压积、血小板指数(P<0.01或P<0.05),降低白细胞、单核细胞百分比(P<0.01或P<0.05),提高免疫器官中胸腺重量与胸腺指数(P<0.05),降低脾脏重量与脾脏指数(P<0.01或P<0.05),降低肝脏重量与肝脏指数(P<0.01或P<0.05)。结论复方鹿茸超微混悬酒制备工艺设计合理,简便可行;能明显改善小鼠血虚症候,具有确切补血功效。

细胞膜片复合3D打印马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架对羊下颌骨缺损的修复效果

目的探讨细胞膜片复合马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架修复下颌骨极限性骨缺损的效果。方法通过3D打印制备马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架及纳米级羟基磷灰石/丝素蛋白/聚乙烯醇支架,采用全骨髓培养法制备阿勒泰大尾羊髂骨骨髓血细胞膜片;按观察时间1、2、3个月分别建立阿勒泰大尾羊双侧下颌骨极限性缺损模型4只,实验组为细胞膜片包裹马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架,对照组为细胞膜片包裹纳米级羟基磷灰石/丝素蛋白/聚乙烯醇支架,阴性对照组为细胞膜片包裹无支架的凝胶海绵;按动物双侧下颌骨缺损区自身对照的方法分别植入包裹细胞膜的支架或包裹细胞膜的凝胶海绵。在支架材料植入后第1、2、3个月末处死实验动物,拍摄锥形束CT(cone beamCT,CBCT)、取组织行石蜡切片HE染色观察,评价不同支架材料的骨再生效果与支架的降解。结果扫描电镜结果显示:两组支架孔隙规则,连续性好,孔径及孔隙率比较均无差别(P>0.05)。CBCT结果显示,术后3个月实验组对骨缺损的修复效果明显优于对照组,且支架降解速率与骨组织修复速率较为匹配,缺损中央骨密度高于对照组,与正常骨组织接近。实验组在各时间点的骨缺损区中央骨密度计量均高于对照组、阴性对照组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示:实验组成骨细胞较为活跃,有较多新生毛细血管及骨小梁形成,同时支架材料的吸收多于对照组。结论细胞膜片复合马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架能够促进临界骨缺损的修复,其降解性与骨组织愈合速率较为匹配,有望成为修复骨缺损的新方法。

鹿角粉复合支架与纳米级羟基磷灰石复合支架的性能比较

目的探索不同胶体材料结合鹿角粉和纳米级羟基磷灰石(n-HA)支架的理化、生物性能。方法取鹿角粉和纳米级羟基磷灰石,分别与15%聚乙烯醇(PVA)、5%丝素蛋白液(SF)、15%PVA和5%丝素蛋白液(4∶1)混合,制备鹿角粉/PVA支架、鹿角粉/SF支架、鹿角粉/PVA/SF支架、n-HA/PVA支架、n-HA/SF支架、n-HA/PVA/SF支架,检测其抗溶解性能、抗压缩力、抗剪切力及支架细胞毒性。结果鹿角粉/SF支架、n-HA/SF支架溶解变形程度为Ⅲ级,其余4组为Ⅱ级。鹿角粉/SF支架、n-HA/SF支架抗剪切力、抗压缩力均较差,鹿角粉/PVA支架、鹿角粉/PVA/SF支架分别与n-HA/PVA支架、nHA/PVA/SF支架抗剪切性能相似,鹿角粉/PVA支架、鹿角粉/PVA/SF支架抗压缩性能分别优于n-HA/PVA支架、n-HA/PVA/SF支架。鹿角粉/PVA支架、鹿角粉/SF支架、鹿角粉/PVA/SF支架细胞相容性优于n-HA/PVA支架、n-HA/SF支架、n HA/PVA/SF支架。结论鹿角粉复合支架具有良好的机械性能及细胞相容性,可以作为异种骨支架材料研究的新方向。单纯丝素作为水凝胶复合支架抗溶解性不佳,机械性能差,无法满足骨组织工程支架要求。

骨髓间充质干细胞膜片复合3D打印马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架的体内成骨

背景:马鹿角粉是一种生物相容性及机械性能良好的组织工程骨材料。采用细胞膜片技术、3D打印技术构建组织工程骨,可实现极限骨缺损的个性化治疗。目的:探讨骨髓间充质干细胞膜片复合3D打印马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇骨支架修复羊下颌骨极限缺损的能力及成骨效果。方法:全骨髓法培养羊骨髓间充质干细胞,采用细胞膜片技术及3D打印技术构建骨髓间充质干细胞膜片复合3D打印马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架的组织工程骨。取12只新疆阿勒泰大尾羊,随机分为术后1,2,3个月组,每组4只,于双侧下颌骨制备20 mm×3 mm×5 mm骨缺损,每组2只羊一侧植入细胞膜片复合3D打印鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架,另一侧植入细胞膜片复合明胶海绵,每组另外2只羊,一侧植入细胞膜片复合纳米羟基磷灰石/丝素蛋白/聚乙烯醇支架,另一侧植入细胞膜片复合明胶海绵。植入1,2,3个月末处死实验动物,取下颌骨标本进行大体观察、锥形束CT、组织学观察及RT-PCR检测相关成骨指标。结果与结论:①锥形束CT观察:第1,2个月末,细胞膜片复合马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇组骨缺损区呈稀薄云雾状,支架吸收较多,细胞膜片复合纳米羟基磷灰石/丝素蛋白/聚乙烯醇组吸收相对较少;第3个月末,细胞膜片复合马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇组有大量的新骨形成,密度接近周围骨质,但细胞膜片复合纳米羟基磷灰石/丝素蛋白/聚乙烯醇组骨缺损区未长满,骨密度较低。细胞膜片复合明胶海绵组3个月内变化均不明显,均没有新骨生成;②组织学观察:第3个月末,与其他两组相比,细胞膜片复合马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇组支架材料吸收较多,可见骨小梁排列规则及成熟板状骨,细胞膜片复合纳米羟基磷灰石/丝素蛋白/聚乙烯醇组也有少量新骨形成,细胞膜片复合明胶海绵组3个月内变化均不明显;③RT-PCR检测:细胞膜片复合马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇组骨桥蛋白、骨钙蛋白、Ⅰ型胶原的mRNA表达水平均高于其他两组,在第3个月时成骨基因的表达量达到最高;④结果表明,骨髓间充质干细胞膜片复合3D打印马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架的组织工程骨能够修复羊下颌骨极限骨缺损,可满足羊颌骨实验性缺损的修复重建。

乳宁冲剂中鹿角粉的PAGE鉴别

目的 :对鹿角粉、含鹿角粉的乳宁冲剂、乳宁冲剂阴性样品进行检测。方法 :采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (Polyacrylamidegelelectrophoresis,简称PAGE) ,以 pH8.3系统制备凝胶及缓冲液 ,浓缩胶浓度 2 .5 % ,分离胶浓度 15 %。 结果 :乳宁冲剂电泳图谱中有 4个蛋白斑点。结论 :实验取得了较满意的效果 ,为该类样品的鉴别提供了较可靠的方法。

仝小林运用鹿茸粉、鲜牛脊髓粉、黄芪粉治疗脊髓空洞症

脊髓空洞症是一种慢性、进行性的脊髓病变,病因及发病机制尚不明确。西医目前多采用维生素B族、辅酶A、镇痛药等对症治疗,或手术为主的综合治疗,但尚存许多弊端。基于多年的临床经验及研究总结,仝小林院士治疗脊髓空洞症(髓海不足证)常用“仝氏益髓起痿汤”,以益髓补脑为基本治则,以鹿茸粉、鲜牛脊髓粉(冷冻干燥)、黄芪粉作为常用药对,同时服用金匮肾气丸或地黄饮子,临床收获良效。

微粉化对鹿茸粉体的影响

对梅花鹿茸进行超微粉碎,并对鹿茸细粉和微粉的粉体学特征进行了系统的比较研究。在扫描电子显微镜下观察了粉体的显微结构,通过激光粒度分析仪测定微粉粒径、粒径分布宽度和比表面积,检测粉体的休止角、堆密度、水溶性蛋白含量和水溶性浸出物的累计溶出度。结果表明微粉化使鹿茸粉体粒径明显变小,比表面积增大,能增加鹿茸水溶性蛋白质和水溶性浸出物的溶出度,可充分有效的利用鹿茸,增强药效,为开发新剂型奠定了基础。

不同粒度鹿茸微粉促进小鼠皮肤创伤愈合效果研究

目的比较不同粒度鹿茸微粉对小鼠皮肤缺损创面的愈合效果。方法在26℃条件下,超微粉碎机加工鹿茸3~12min。根据粒度特征值,从中筛选出粗粉、中粉、细粉、超细粉4种粒度微粉。制造小鼠皮肤缺损创伤模型,选取72只造模成功的小鼠随机分为6组,第1组为模型对照组(不给药);第2~5组依次用粗粉、中粉、细粉、超细粉敷药;第6组用莫匹罗星作为阳性对照,各给药组每日每只小鼠均敷药100mg。每日观察各组创面并拍照,统计伤口愈合率。饲养14d后,测定小鼠脾脏指数、胸腺指数;取创面组织测定羟脯氨酸含量;对新生皮肤组织取样,常规HE染色。结果第3、4、5组创面愈合率显著高于第1组;第4组创面组织中羟脯氨酸含量显著高于第1组;第4组胸腺指数显著高于第1组;HE染色结果显示第3、4、5组新生创面组织表皮较厚,且与真皮层连接紧密,毛囊和新生毛细血管较多,分化程度高,成纤维细胞分布密集,皮肤创面已基本修复。结论粒度特征值D50为26.729μm、D90为48.532μm的鹿茸细粉对小鼠皮肤创伤愈合效果最佳。

鹿角粉辅助低频脉冲电刺激治疗产褥期急性乳腺炎的临床效果

目的探讨鹿角粉辅助低频脉冲电刺激治疗产褥期急性乳腺炎的临床效果。方法选取2017年1月~2019年1月我院收治的200例产褥期急性乳腺炎患者为研究对象,通过随机抽样的方法分为实验组和对照组,每组100例。对照组仅给予常规治疗,实验组给予常规治疗的同时给予鹿角粉辅助低频脉冲电刺激治疗。利用视觉模拟评分法(VAS)比较两组产褥期急性乳腺炎患者的疼痛状况,同时观察治疗前后乳房肿块以及临床疗效的变化。结果治疗前,两组VAS评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);实验组治疗后的VAS评分为(3.57±0.75)分,明显低于对照组的(4.42±1.02)分,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组的乳房肿块比较,差异无统计学意义(P>0.05);实验组治疗后的乳房肿块为(2.61±1.34)cm明显低于对照组的(4.17±2.04)cm,差异有统计学意义(P<0.05);实验组的治疗总有效率为99.00%,明显高于对照组的87.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论临床采用鹿角粉辅助低频脉冲电刺激治疗产褥期急性乳腺炎的临床效果显著,可减轻患者的疼痛,有效改善乳房肿块的大小,有利于患者产后的康复,值得在临床推广。

梅花鹿花盘粉对小鼠股骨性能、雌性生殖器官及激素的影响

为了研究梅花鹿花盘粉在小鼠上应用的效果,采用随机分组的试验设计,将150只4周龄雌性小鼠随机分成A、B、C、D、E共5组,每组30只,A组作为对照组,B、C、D、E为试验组,梅花鹿花盘粉在日粮中添加的比例依次为0%、2%、3%、4%、5%,饲养56 d。试验结果显示,在小鼠的日粮中添加梅花鹿花盘粉后,平均日增重和平均日采食量增加、料重比降低,D组与A组差异达统计显著水平(P<0.05);添加梅花鹿花盘粉使子宫指数增加、雌二醇含量降低、孕酮含量升高,E组与其余各组相比差异显著(P<0.05);D组、E组IL-8、TNF-α的浓度显著降低(P<0.05)。表明梅花鹿花盘粉在小鼠日粮中的最宜添加比例为4%~5%,梅花鹿花盘粉具有促进生长、增加骨密度、预防乳腺增生、预防炎症发生的作用。

市售鹿茸粉药材的DNA条形码鉴定

为研究DNA条形码技术在粉末类药材的应用,本文以市售鹿茸粉为对象,对其基原物种进行鉴定。依据2010版《中国药典》第三增补本中动物药材DNA条形码分子鉴定标准操作流程获得COI序列。对于测序峰图杂合度较高,可能为混合物的鹿茸粉,采用分子克隆方法得到序列。结果表明,利用PCR产物直接测序获得鹿茸粉的65条COI序列,其中有38%待检样品基原为2010版《中国药典》规定的梅花鹿Cervus nippon Temminck或马鹿Cervus elaphus Linnaeus,而62%为其他基原,以驯鹿Rangifer tarandus Linnaeus为主。进一步分析显示,不同价格、不同地域、不同公司抽检的样品或多或少存在非《中国药典》规定基原。利用分子克隆方法成功获得混合物样品的36条COI序列,主要基原为马鹿和梅花鹿。此外,有些待检样品包装明确标示为梅花鹿鹿茸粉,但鉴定结果为马鹿或驯鹿。因此,本研究证实DNA条形码技术可准确、有效鉴别市售鹿茸粉,为保障临床用药安全和市场监管提供新的技术手段,也为粉末类药材和饮片的鉴定提供示范。