绿脓杆菌apoazurin在溶液中存在两种天然构象(英文)

如何解释绿脓杆菌apoazurin变性过程的复杂机制是一个有争议的问题.最近的研究表明apoazurin的复杂变性机制可以归结为其天然态存在着至少两种构象.利用内源荧光发射谱和圆二色谱进一步研究了apoazurin的脲变性机制,发现其稳态脲变性符合表观的二态过程,但其动力学为双相过程.在高浓度脲中快反应在几秒钟内完成,而慢反应要经过几个小时.快反应和慢反应的mu值分别为2.24和2.45kJ·mol-1·M-1,去折叠活化能的差值为22kJ·mol-1.时间分辨的荧光发射谱和圆二色谱可以用天然态和完全变性态的谱图通过一个固定的比例参数进行重建.结果表明,过去被广泛接受的存在着变性中间体的机制是不正确的,而apoazurin在天然态存在至少两种构象的假设是合理的.

去辅基天青蛋白两种天然构象共存的热力学证据——差热温度扫描和圆二色的研究(英文)

天然态蛋白质能否在溶液中存在多种构象是一个有争议的问题. 在前报道中已经鉴定出绿脓杆菌去辅基天青蛋白突变体M121L可以多种构象共存. 用差热扫描量热和圆二色性的方法研究了野生型去辅基天青蛋白的热变性. 结果表明在pH从4.0到9.0的范围内存在着两个摩尔热容最大值. 较低温度下的去折叠反应在所研究pH范围内均部分可逆,而较高温度下的去折叠反应均不可逆. 蛋白质去折叠的热容变化双峰用可相互转化的两种构象共存模型进行拟合. 较低温度下能够去折叠的构象在pH 4.0时占64%,在pH 9.0时占55%. 监测热变性过程中圆二色谱在219 nm处的信号变化也可以观测到两个独立的去折叠变化. 信号变化的比值与在相同条件下差热扫描法测得的两种构象摩尔比一致. 上述结果进一步支持了前文提出的去辅基天青蛋白在溶液中至少存在着两种构象的设想.