New insights into ATR inhibition in muscle invasive bladder cancer:The role of apolipoprotein B mRNA editing catalytic subunit 3B

Background:Apolipoprotein B mRNA editing catalytic polypeptide(APOBEC),an endogenous mutator,induces DNA damage and activates the ataxia telangiectasia and Rad3-related(ATR)-checkpoint kinase 1(Chk1)pathway.Although cisplatin-based therapy is the mainstay for muscle-invasive bladder cancer(MIBC),it has a poor survival rate.Therefore,this study aimed to evaluate the efficacy of an ATR inhibitor combined with cisplatin in the treatment of APOBEC catalytic subunit 3B(APOBEC3B)expressing MIBC.Methods:Immunohistochemical staining was performed to analyze an association between APOBEC3B and ATR in patients with MIBC.The APOBEC3B expression in MIBC cell lines was assessed using real-time polymerase chain reaction and western blot analysis.Western blot analysis was performed to confirm differences in phosphorylated Chk1(pChk1)expression according to the APOBEC3B expression.Cell viability and apoptosis analyses were performed to examine the anti-tumor activity of ATR inhibitors combined with cisplatin.Results:There was a significant association between APOBEC3B and ATR expression in the tumor tissues obtained from patients with MIBC.Cells with higher APOBEC3B expression showed higher pChk1 expression than cells expressing low APOBEC3B levels.Combination treatment of ATR inhibitor and cisplatin inhibited cell growth in MIBC cells with a higher APOBEC3B expression.Compared to cisplatin single treatment,combination treatment induced more apoptotic cell death in the cells with higher APOBEC3B expression.Conclusion:Our study shows that APOBEC3B’s higher expression status can enhance the sensitivity of MIBC to cisplatin upon ATR inhibition.This result provides new insight into appropriate patient selection for the effective application of ATR inhibitors in MIBC.

肝细胞癌组织中APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员的表达观察

目的观察载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3(APOBEC3s)类胞苷脱氨酶基因家族成员在肝细胞癌(HCC)组织中的表达变化,并探讨其意义。方法分别采用实时定量PCR和免疫组化法检测155例HCC患者癌组织和癌旁组织中的APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员A3A、A3B、A3C、A3D、A3F、A3G、A3H的mRNA和蛋白。以癌组织中APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员mRNA相对表达量的中位数为界,将155例HCC患者分为高表达组和低表达组,并分析APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族各成员mRNA相对表达量与HCC预后的关系。结果 HCC患者癌组织中APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员A3A、A3B、A3C、A3D、A3F、A3G、A3H mRNA相对表达量分别为4. 08±0. 11、6. 61±0. 17、6. 42±0. 10、5. 29±0. 12、6. 64±0. 12、7. 49±0. 07、4. 32±0. 08,HCC患者癌旁组织中APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员A3A、A3B、A3C、A3D、A3F、A3G、A3H mRNA相对表达量分别为2. 93±0. 11、4. 60±0. 11、5. 48±0. 11、5. 22±0. 08、6. 97±0. 08、5. 91±0. 12、4. 21±0. 10,癌组织与癌旁组织中A3A、A3B、A3C、A3G mRNA相对表达量相比,P均<0. 05。HCC患者癌组织中APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员A3A、A3B、A3C、A3D、A3F、A3G、A3H蛋白阳性表达率分别为92. 3%、96. 8%、89. 0%、58. 1%、69. 7%、85. 9%、52. 9%,HCC患者癌旁组织中APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员A3A、A3B、A3C、A3D、A3F、A3G、A3H蛋白阳性表达率分别为61. 3%、63. 2%、57. 4%、61. 9%、74. 8%、47. 7%、47. 7%,癌组织与癌旁组织中A3A、A3B、A3C、A3G蛋白阳性表达率相比,P均<0. 05。155例HCC患者癌组织中A3A mRNA低表达者、高表达者5年生存率分别为27. 3%、17. 7%,两者相比,P <0. 05; A3B mRNA低表达者、高表达者5年生存率分别为30. 0%、17. 1%,两者相比,P <0. 05; A3G mRNA低表达者、高表达5年生存率分别为33. 6%、13. 7%,两者相比,P <0. 05。结论APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员A3A、A3B、A3C、A3G mRNA和蛋白表达水平在HCC癌组织中显著上调,且A3A、A3B、A3G mRNA高表达的HCC患者术后生存率低。

APOBEC3蛋白与HPV及宫颈癌的研究进展

宫颈癌是严重威胁女性健康的恶性肿瘤之一,已知人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染是宫颈癌的主要病因,但具体机制尚不明确。人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide,APOBEC)家族是一组能够编辑DNA或RNA序列的胞苷脱氨酶。APOBEC3成员是固有免疫系统的重要成员,在抗病毒感染防御过程中扮演重要角色。APOBEC3与多种肿瘤的发生发展密切相关,可能与HPV感染以及宫颈癌的关系尤为密切。APOBEC3B可能通过“协助”HPV病毒使抑癌蛋白失活及促进HPV病毒癌蛋白的突变,从而促进癌症的发生。本文就APOBEC3与HPV清除、突变和宫颈癌发生方面的研究进行综述。

FOLR1-induced folate deficiency reduces viral replication via modulating APOBEC3 family expression

Folate receptor alpha(FOLR1)is vital for cells ingesting folate(FA).FA plays an indispensable role in cell pro-liferation and survival.However,it is not clear whether the axis of FOLR1/FA has a similar function in viral replication.In this study,we used vesicular stomatitis virus(VSV)to investigate the relationship between FOLR1-mediated FA deficiency and viral replication,as well as the underlying mechanisms.We discovered that FOLR1 upregulation led to the deficiency of FA in HeLa cells and mice.Meanwhile,VSV replication was notably sup-pressed by FOLR1 overexpression,and this antiviral activity was related to FA deficiency.Mechanistically,FA deficiency mainly upregulated apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic subunit 3B(APOBEC3B)expression,which suppressed VSV replication in vitro and in vivo.In addition,methotrexate(MTX),an FA metabolism inhibitor,effectively inhibited VSV replication by enhancing the expression of APOBEC3B in vitro and in vivo.Overall,our present study provided a new perspective for the role of FA metabolism in viral infections and highlights the potential of MTX as a broad-spectrum antiviral agent against RNA viruses.

携带HPV11基因组的HaCaT细胞APOBEC3s表达及α干扰素的调控

目的探讨携带HPV11基因组的HaCaT细胞（HPV11．HaCaT）中载脂蛋白B信使RNA编辑酶催化多肽样蛋白3家族（APOBEC3s，A3s）mRNA表达、主要A3蛋白在细胞内的表达、分布，以及外源性仅干扰素对其调节。方法qRT—PCR检测HPV11．HaCaT细胞中A3A、A3B、A3C和A3H mRNA的基础表达水平，并与正常HaCaT细胞作比较；分别用不同浓度的重组人IFN—α2b（rhIFN—α2b）作用于HaCaT、HPV11．HaCaT、Hela细胞6、24、48h后，qRT—PCR检测A3A、A3B、A3C和A3H mRNA表达水平。细胞免疫荧光染色法观察rhIFN—α2b刺激6h时，A3A蛋白在3种细胞中的表达和分布情况。结果HPV11．HaCaT细胞内A3A、A3B、A3CmRNA表达量均明显高于正常HaCaT细胞（P〈0．05）。在不同浓度rhIFN—α2b刺激下，3种细胞4种A3成员mRNA表达趋势存在差异，其中A3A升高最为明显。与各自正常对照组相比，10^6IU／ml rhIFN—α2b刺激6h时3种细胞的A3AmRNA表达明显升高，差异有统计学意义（HaCaT细胞35．77±5．01比1．00±0．05，P〈0．05；HPV11．HaCaT细胞15．34±2．14比0．99±0．01，P〈0．05；Hela24．60±5．45比0．97±0．03，P〈0．05），而A3B、A3C和A3HmRNA相对表达量均低于10倍。经10^6IU／ml rhIFN-α2b处理6h后，3种细胞胞质和胞核中均可见到A3A蛋白的阳性染色增加。结论HPV11进入HaCaT细胞后，可激活A3s（尤其是A3A）免疫系统。α干扰素诱导A3A的高表达可能是其发挥免疫调控功能的机制之一。

APOBEC3家族减少乙型肝炎病毒cccDNA库的作用机制进展

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(Hepatitis B virus covalently closed circular DNA,HBV cccDNA)是乙肝病毒基因组存在于受感染肝细胞中高度稳定和持久的形式,是病毒清除失败和目前抗病毒治疗停止后病毒学复发的原因之一。作为天然宿主病毒限制因子,载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3(Apolipoprotein B mRNAediting catalytic polypeptide-like protein 3,APOBEC3)家族,具有使病毒基因组或cccDNA G-to-A超突变功能,可减少或消除HBV cccDNA库,成为有潜力抗病毒方法之一。故本文结合目前国内外实验研究对APOBEC3家族介导的致突变机制在减少HBV cccDNA库中的作用机制作一综述。