丙泊酚通过调控自噬改善ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的作用及机制

目的 探讨丙泊酚通过调控自噬改善载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(AS)的作用及机制。方法 采用C57BL6为对照组(n=5,每天腹腔注射等量生理盐水);Apo E^(-/-)小鼠随机分成模型组(n=5,每天腹腔注射等量生理盐水)、丙泊酚组[n=5,腹腔注射丙泊酚75 mg/(kg·d)^(-1)]、丙泊酚+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组[n=5,丙泊酚75 mg/(kg·d)^(-1)+3-MA 30 mg/(kg·d)^(-1)]。对照组给予普通饲料,另3组给予高脂饲料,连续饲喂12周,造模第10周起给药,腹腔注射,1次/d。检测胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TAG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)的水平。使用苏木精-伊红染色、油红O染色以及蛋白质印迹法评估动脉的组织学结构和重组自噬效应蛋白Beclin-1(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3 (LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达水平。结果 与对照组比较,模型组主动脉粥样斑块面积、红染脂质、血清TC、TAG、LDL-C、HDL-C均明显增加,主动脉中Beclin-1蛋白水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均明显升高(P<0.05);与模型组比较,丙泊酚组主动脉AS斑块面积、红染脂质、血清TC和LDL-C均显著下降(P<0.05)。主动脉中Beclin-1蛋白水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均明显增加(P<0.05)。与丙泊酚组比较,丙泊酚+3-MA组的主动脉AS斑块面积、红染脂质、血清TC、LDL-C均明显增加,主动脉内Beclin-1蛋白水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达均显著下降(P<0.05)。结论 丙泊酚表现出对Apo E^(-/-)小鼠AS的改善作用,其机制涉及激活自噬和调节脂质代谢。

化瘀祛痰方通过调节ApoE^(-/-)小鼠胆固醇代谢相关基因表达抗动脉粥样硬化

目的观察化瘀祛痰方对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠粥样斑块以及胆固醇代谢相关基因的影响,探讨化瘀祛痰方抗动脉粥样硬化(As)作用及可能的机制。方法 10只C57BL/6/J小鼠作为空白对照组,30只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰组[20 g/(kg·d)]和辛伐他汀组[0.005 g/(kg·d)]。全自动生化分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC),HE染色观察主动脉结构及动脉粥样硬化程度,油红O染色观察主动脉脂质沉积,RT-PCR和Western blot检测肝脏低密度脂蛋白受体(LDLR)、卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)及主动脉CD36 mRNA和蛋白表达水平,流式细胞术检测腹腔巨噬细胞CD36蛋白表达。结果与空白对照组相比,模型组小鼠血清TC、TG、LDLC水平显著升高;HDLC水平显著降低,主动脉管腔中形成较大粥样斑块,管壁形成大量脂质沉积,肝脏LDLR、LCAT基因表达显著下调,主动脉、巨噬细胞CD36基因表达显著上调。通过药物干预,与模型组相比,化瘀祛痰组和辛伐他汀组小鼠TC、TG、LDLC水平显著下降,HDLC显著升高,主动脉管腔中粥样斑块面积和管壁脂质沉积量明显减少,肝脏LDLR、LCAT基因表达显著上调,主动脉、巨噬细胞CD36基因表达显著下调。结论化瘀祛痰方可抑制ApoE-/-小鼠主动脉斑块形成,其机制可能与调控血脂及胆固醇代谢相关基因LDLR、LCAT及CD36的表达有关。

ApoE^(-/-)小鼠肾动脉狭窄及肾损害特点观察

目的建立动脉粥样硬化性肾动脉狭窄(atherosclerotic renal artery stenosis,ARAS)小鼠动物模型,并观察其肾损害特点。方法取载脂蛋白E基因缺陷(ApoE-/-)小鼠(25～51周龄)的肾动脉和肾脏,动态观察肾动脉病变进展各阶段相应的肾脏病变。根据ARAS程度分3组(A组:<50%;B组:50%～70%;C组:>70%)。A组又根据斑块是否破裂分为A1(未破裂)和A2(破裂)亚组。结果建立了ARAS小鼠动物模型。肾动脉和肾脏的变化是:①A1组未发现其下游肾脏病理改变;②A2组其下游肾内肾小管周围毛细血管减少,肾小管上皮细胞肿胀,电镜下可见细胞内线粒体肿胀;③B组和C组已发生斑块破裂,其肾内肾小管周围毛细血管减少明显,与A2组比较,差异显著(P<0.01);肾小管上皮细胞肿胀、脱落、坏死;肾小管间质病变严重。结论ApoE-/-小鼠建立的ARAS模型易行、稳定、重复性好。

丹参酮Ⅱ A对Apoe基因敲除动脉粥样硬化小鼠主动脉TNF-α/p38MAPK/NF-κ B/RBP4信号通路变化研究

目的 ：通过观察丹参酮Ⅱ A对Apoe基因敲除（ApoE-/-）小鼠主动脉肿瘤坏死因子-α（TNF-α）/p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）/血清核因子-κ B（NF-κ B）/视黄醇结合蛋白（RBP4）信号通路变化,探讨丹参酮Ⅱ A对动脉粥样硬化炎症反应过程的影响及其作用机制。方法 ：将20只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、丹参酮Ⅱ A组,每组10只,空白对照组选取具有相同遗传背景的同龄野生型C57BL/6J小鼠10只;模型组与丹参酮Ⅱ A组均给予高脂饲料喂养8周,空白对照组给予普通饲料喂养;丹参酮Ⅱ A组每日灌胃丹参酮Ⅱ A（30 mg/kg）,空白对照组与模型组给予等量生理盐水灌胃,8周后,分离3组小鼠血清,分离主动脉,分别保存于4%多聚甲醛和-80℃冰箱。Elisa法检测小鼠血清TNF-α、RBP4水平变化,全自动生化分析仪检测血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C水平,HE染色法观察主动脉组织形态学变化,Western blot法检测TNF-α、p38MAPK、NF-κ B、RBP4蛋白表达,RT-PCR法检测主动脉TNF-α、NF-κ B、RBP4基因表达情况。结果 ：与空白对照组相比,模型组小鼠血清中TG、TC、LDL-C水平显著升高（P〈0.05）,HDL-C水平显著降低（P〈0.05）;主动脉管腔内可见较大的AS斑块形成;TNF-α、p38MAPK、NF-κ B、RBP4蛋白和TNF-α、NF-κ B、RBP4基因m RNA水平显著升高（P〈0.05）。与模型组相比,丹参酮Ⅱ A组TG、TC、LDL-C水平显著降低（P〈0.05）,HDL-C水平显著升高（P〈0.05）;主动脉管腔内的AS斑块面积显著减小;TNF-α、p38MAPK、NF-κ B、RBP4蛋白和TNF-α、NF-κ B、RBP4基因m RNA水平显著降低（P〈0.05）。结论 ：丹参酮Ⅱ A具有调节血脂和抗AS的作用,其机制可能与其参与TNF-α/p38MAPK/NF-κ B/RBP4信号通路调控有关。

耐力训练对ApoE^(-/-)致AS小鼠IL-18和IL-10表达的影响

目的:深入观察耐力训练对载脂蛋白E基因敲除(Apo E^(-/-))致动脉粥样硬化(AS)小鼠白介素18(IL-18)和白介素10(IL-10)的影响,探讨运动防治AS的可能机制。方法:选取8周龄雄性Apo E^(-/-)小鼠20只:随机分为2组(n=10):AS模型组(AC组)和运动干预组(AE组),AE组进行跑台耐力训练;选取8周龄C57BL/6J雄性小鼠10只作为正常对照组(CC组)。实验持续12周,取主动脉制作冰冻切片,分别用于观察主动脉AS斑块和病理变化以及主动脉IL-18、IL-10蛋白表达;采用ELISA法检测血清IL-18、IL-10水平。结果:112周高脂膳食致Apo E^(-/-)小鼠发生典型的AS病变,耐力训练使AS斑块面积显著减少(P<0.01),病变程度显著减轻。2与CC组比较,AC组、AE组小鼠血清IL-18和IL-10水平均显著升高(P<0.01),且AC组IL-18/IL-10比值显著升高(P<0.01)。AE组血清IL-18水平及IL-18/IL-10比值均显著低于AC组(P<0.01)。3与CC组比较,AC组、AE组小鼠主动脉IL-10和IL-18蛋白表达均显著升高(P<0.01),AE组IL-10表达显著高于AC组(P<0.05),IL-18表达显著低于AC组(P<0.05)。结论:耐力训练通过降低血液和主动脉IL-18及提高IL-10水平,增强了主动脉血管抗炎能力,从而发挥抗AS的作用。

红景天甙对间歇性低压低氧诱导的ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响

目的观察红景天甙对间歇性低压低氧诱导的载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响及其可能机制。方法 30只8周龄健康雄性ApoE-/-小鼠随机分为常压常氧组、间歇性低压低氧组、低压低氧+红景天甙组,其中间歇性低压低氧组和低压低氧+红景天甙组被放置在模拟海拔5000 m低压低氧舱内每天8h,每组给予相同的普通饮食喂养,低压低氧+红景天甙组灌服红景天甙30 mg/(kg·d),而常压常氧组和间歇性低压低氧组灌服等量蒸馏水,连续灌胃12周后取小鼠血样测空腹血糖和血脂,取小鼠主动脉根部,HE染色观察动脉粥样硬化斑块的大小,Masson染色观察斑块内胶原含量,Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和组织型基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)蛋白的表达。结果三组空腹血糖和血脂水平无统计学差异(P>0.05);与常压常氧组比较,间歇性低压低氧组动脉粥样硬化斑块面积明显增加(P<0.01),胶原含量明显减少(P<0.01);与间歇性低压低氧组比较,低压低氧+红景天甙组斑块面积、MMP-2和MMP-9蛋白水平明显降低(P<0.01),而斑块内胶原含量、TIMP-2蛋白水平明显增加(P<0.01)。结论红景天甙能抑制间歇性低压低氧诱导的动脉粥样硬化斑块形成,并提高斑块的稳定性,其机制可能与红景天甙增加斑块内胶原含量有关。

艾塞那肽对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型中VCAM-1、ICAM-1表达的影响

目的探讨胰高血糖素样肽1(GLP-1)受体激动剂艾塞那肽对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型中主动脉病变的影响。方法 ApoE-/-小鼠随机分为普通饮食组(n=14)和高脂饮食组(n=68),喂养12周后随机抽取普通饮食组4只和高脂饮食组8只小鼠检测造模情况。将高脂饮食组小鼠再分为非药物干预组、阿托伐他汀钙片组、艾塞那肽小剂量组、艾塞那肽大剂量组、阿托伐他汀+艾塞那肽小剂量组、阿托伐他汀+艾塞那肽大剂量组(每组10只)。药物干预6周后,各组小鼠眶周静脉丛取血,并取主动脉弓行石蜡切片,HE染色观察。ELISA法检测血清血脂水平,Western blotting检测主动脉血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的蛋白表达水平。结果 HE染色结果显示:普通饮食组及阿托伐他汀+艾塞那肽大剂量组镜下观察未见异常;阿托伐他汀钙片组,艾塞那肽小、大剂量组,阿托伐他汀+艾塞那肽小剂量组可见广泛的病理性内膜增厚;非药物干预组有脂质斑块形成,可见脂核。单独应用艾塞那肽或联合阿托伐他汀可不同程度降低血清血脂(TC、TG、LDL-C)水平(P<0.05)。艾塞那肽不同剂量单独或联合阿托伐他汀可降低主动脉VCAM-1、ICAM-1的表达(P<0.05)。结论艾塞那肽可能通过下调ApoE-/-小鼠主动脉VCAM-1、ICAM-1的表达,抑制ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变的形成。

载脂蛋白E基因敲除及高脂饮食小鼠海马CA1和CA3区神经元内IP3及IP3R-1表达的变化

目的观察载脂蛋白E(ApoE)基因敲除(KO)及高脂饮食小鼠海马CA1和CA3区神经元内三磷酸肌醇(IP3)和三磷酸肌醇受体-Ⅰ(IP3R-1)表达的变化。方法将30只C57BL/6J小鼠分为对照组(C组)、ApoE KO组(KO组)、ApoE KO高脂饮食组(KO-HF组)。小鼠造模成功后称重;取血检测血脂;取小鼠脑组织分别进行HE染色、免疫组织化学染色和计算机图像分析。结果与C组比较,KO、KO-HF组体重、总胆固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白胆固醇含量明显升高(P<0.05)。HE染色观察到,KO和KO-HF组小鼠海马锥体细胞排列较松散,胞体较小。与C组比较,KO组小鼠海马CA1和CA3区神经元内IP3和IP3R-1平均光密度值均降低,KO-HF组小鼠海马CA1和CA3区神经元内IP3和IP3R-1平均光密度值均降低明显(P<0.05)。结论 ApoE KO及高脂饮食可导致小鼠海马CA1和CA3区神经元内IP3和IP3R-1表达降低,这两种蛋白可能参与了ApoE异常,由此引发阿尔茨海默病的病理发生发展过程。

OX40-OX40L信号对ApoE^(-/-)小鼠颈动脉斑块中亲环素A表达的影响

目的观察OX40-OX40L信号对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠颈动脉粥样硬化斑块内亲环素A(CyPA)表达的影响。方法采用颈动脉硅胶圈植入法快速诱导ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块形成,48只雄性ApoE-/-小鼠随机分成抑制组、刺激组、对照组,刺激组腹腔注射鼠抗OX40 200μg,抑制组腹腔注射鼠抗OX40L200μg,对照组腹腔注射IgG2b 200μg,均每周一次,连续6周。分别采用免疫组织化学、Western blot和qRT-PCR检测小鼠颈动脉斑块内CyPA蛋白和mRNA的表达。结果 ApoE-/-小鼠颈动脉置管并6周高脂饮食后,对照组可见斑块形成,部分内膜和中膜增厚,弹力板变形,刺激组颈动脉斑块面积与对照组相比显著增加,而抑制组颈动脉斑块面积明显减少。与对照组相比,刺激组颈动脉斑块内CyPA蛋白和mRNA表达明显增强,而抑制组颈动脉斑块内CyPA蛋白和mRNA表达明显减弱。结论 OX40-OX40L信号能调控ApoE-/-小鼠颈动脉斑块中CyPA的表达。

吡格列酮对载脂蛋白E^(-/-)小鼠动脉粥样硬化中Toll样受体4/丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的探讨吡格列酮对载脂蛋白E(Apo E)-/-小鼠主动脉粥样硬化病变中Toll样受体4/丝裂原活化蛋白激酶(TLR4/MAPKs)信号通路的影响。方法取8只10周龄雄性C3H小鼠作为对照组,用普通饲料喂养;另取24只同周龄雄性Apo E-/-小鼠用高脂饲料喂养,复制动脉粥样硬化模型成功后按随机数表法分成3组:模型组、吡格列酮低剂量(5 mg·kg-1·d-1)组和高剂量(10 mg·kg-1·d-1)组各8只。干预4周后,HE染色观察主动脉粥样硬化病变情况。应用Western Blot技术检测对照组和干预组动脉粥样硬化中丝裂原活化蛋白激酶ERK1/2、JNK1/2及p38MAPK磷酸化水平。结果与对照组比较,各组Apo E-/-小鼠动脉粥样硬化斑块中TLR4表达增强,其中ERK1/2与JNK磷酸化水平明显升高(均为P<0.05),但p38MAPK水平变化不明显(均为P>0.05);与模型组比较,吡咯列酮低剂量组和高剂量组小鼠动脉粥样硬化斑块中ERK1/2与JNK磷酸化水平均降低(ERK1/2:吡咯列酮低剂量组比模型组:0.5037±0.0438比0.8800±0.0436,吡咯列酮高剂量组比模型组:0.3843±0.0236比0.8800±0.0436;JNK:吡咯列酮低剂量组比模型组:0.5037±0.0437比0.7900±0.0308,吡咯列酮高剂量组比模型组:0.3843±0.0237比0.7900±0.0308,均为P<0.05)。结论吡格列酮可能通过影响TLR4/MAPKs/ERK1/2与TLR4/MAPKs/JNK信号通路,延缓动脉粥样硬化的发生与发展。

腱糖蛋白-C在载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块不同时期表达的变化

目的:探讨腱糖蛋白-C(TN-C)在载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化斑块形成过程中不同时期表达的动态变化。方法:取雄性SPF级ApoE^(-/-)小鼠50只(模型组),高脂饲料喂养,建立小鼠动脉粥样硬化模型,雄性SPF级野生型C57BL/6小鼠50只为对照组,同样高脂饮食。分别于喂养4、8、16、24、32周时处死小鼠,检测血脂,显微镜观察斑块病理改变并进行定量分析,免疫组化方法检测动脉粥样硬化斑块内TN-C表达。结果:模型组小鼠总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均高于对照组小鼠(P均<0.05)。随着造模时间的进展,模型组小鼠斑块面积及斑块面积/管腔面积比值不断增加,各时期比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。模型组小鼠斑块内TN-C表达量随着动脉粥样硬化进展而增多,32周小鼠斑块内部TN-C表达升高最显著,高于8、16、24周小鼠(分别为0.49±0.07 vs 0.04±0.02、0.12±0.03、0.21±0.04,P<0.05)。结论:TN-C的表达量随着斑块进展不断增加,可能与动脉粥样硬化进展及斑块不稳定性有关。

大蒜素对apoE^-/-小鼠动脉粥样硬化易损斑块细胞凋亡及P53蛋白表达的影响

目的探讨大蒜素对载脂蛋白E基因敲除(apoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化易损斑块的作用及其机制。方法以高脂饲料喂养apoE~(^(-/-))小鼠8周造模,并随机分为模型组、低剂量大蒜素组和高剂量大蒜素组,每组8只。模型组小鼠给予0.50mL生理盐水灌胃,低剂量大蒜素组给予0.25mL生理盐水+0.25mL大蒜素溶液灌胃,高剂量大蒜素组给予0.50mL大蒜素溶液灌胃,每天1次,连续8周。然后取主动脉根部,采用TUNEL染色检测斑块凋亡阳性面积,采用免疫组化方法检测斑块内凋亡巨噬细胞、血管平滑肌细胞含量及凋亡相关蛋白P53的表达。结果大蒜素灌胃处理后斑块凋亡阳性面积均减小,其中低剂量大蒜素组减小具有统计学意义(F=42.32,P<0.05),高剂量大蒜素组减小差异无统计学意义(P>0.05)。低剂量大蒜素组斑块内凋亡巨噬细胞含量较模型组和高剂量大蒜素组降低,差异具有统计学意义(F=28.13,P<0.05);各组斑块内凋亡血管平滑肌细胞含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。低剂量大蒜素组和高剂量大蒜素组斑块内P53蛋白表达均显著低于模型组,差异有统计学意义(F=22.11,P<0.05)。结论大蒜素可通过下调P53蛋白的表达、抑制细胞凋亡,发挥稳定晚期不稳定斑块的作用。

通心络胶囊干预载脂蛋白E基因敲除小鼠TXB_2 6-Keto-PGFF_1α机理的研究

目的:通过通心络胶囊对载脂蛋白E基因敲除[(ApoE(-/-)]模型组小鼠血清血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)指标的干预变化,探究其防治冠心病(CHD)的机理。方法:将40只ApoE(-/-)小鼠作为实验组,建立高脂血症和冠状动脉粥样硬化(AS)模型,随机分为模型组等5组,分别给予辛伐他汀及不同剂量的通心络胶囊进行干预,另选8只同系的小鼠作为正常对照组。通过对模型组小鼠血清TXB2、6-Keto-PGF1α水平的观察,分析通心络胶囊对ApoE(-/-)小鼠冠状AS的调节作用和机理。结果:模型组ApoE(-/-)小鼠血清TXB2含量高于正常组,6-Keto-PGF1α含量低于正常组,与正常组相比均有统计学意义(P<0.05);通心络胶囊干预后,通心络胶囊高剂量组和辛伐他汀组与模型组相比,血清TXB2、6-Keto-PGF1α含量差异均有统计学意义(P<0.05);通心络胶囊高、中、低剂量组与辛伐他汀组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:通心络胶囊能降低ApoE(-/-)小鼠血清TXB2、升高6-Keto-PGF1α水平,表明通心络胶囊具有抗凝,抑制血栓形成,达到恢复内皮功能,改善心肌缺血损伤,防治CHD的作用。

LXR激动剂对ApoE基因敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块内组织因子和基质金属蛋白酶-9表达及胶原含量的影响

目的:探讨肝X受体(LXR)激动剂对南脂饲养ApoE基因敲除小鼠(ApoE^(-/-))在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)病变形成的早期阶段斑块内组织因子和基质金属蛋白酶-9表达及胶原含量的影响。方法:8周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠12只,随机分入LXR激动剂T0901317干预组或二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组,每组各6只。均高脂饲养8周,在高脂饲养的后4周,分别给予T0901317 20 mg·kg^(-1)·d^(-1)或相当剂量的DMSO腹腔注射。麻醉后处死小鼠,取小鼠主动脉,以石蜡包埋,行主动脉根部连续切片:以HE染色观察形态学变化,生化法检测小鼠血脂,免疫组化法检测主动脉壁斑块内组织因子(tissue factor,TF)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达水平,苦味酸-天狼星红染色检测斑块内胶原含量,以Image Pro Plus 6.0软件进行图像分析。结果:T0901317干预组血浆总胆固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白胆固醇明显高于对照组(P<0.01,P<0.01和P<0.05);T0901317干预组主动脉AS斑块面积明显小于对照组(P<0.05),分别为(4285±2133)μm^2和(8403±2535)μm^2;T0901317干预组主动脉AS斑块面积/血管壁面积比值明显小于对照组(P<0.05);T0901317干预组动脉粥样硬化斑块内TF表达水平较对照组明显减低(P<0.05),平均吸光度值分别为(0.0309±0.0109)与(0.0764±0.0346);动脉粥样硬化斑块内MMP-9表达水平较对照组明显减少(P<0.01),平均吸光度值分别为(0.0293±0.0163)与(0.0671±0.0200);T0901317干预组动脉粥样硬化班块内胶原纤维的含量较对照组明显增加(P<0.01),平均吸光度分别为(0.0311±0.0101)与(0.0142±0.0054)。结论:LXR激动剂不仅可以抑制动脉粥样硬化的发展,而且可能通过减少动脉粥样硬化斑块内组织因子和基质金属蛋白酶-9的产生,改变斑块内的胶原构成,而起到稳定动脉粥样硬化斑块的作用。

茯砖茶对APOE^(-/-)小鼠肝脂合成和氧化应激影响

观察茯砖茶对非酒精性脂肪肝治疗效果及对肝脂合成和氧化应激的影响。选取2月龄雄性APOE^(-/-)小鼠55只,连续高脂饲料喂养13周后随机抽取5只进行HE染色判断成模率。造模成功后随机分为模型组,阿托伐他汀组,茯砖茶高、中、低剂量组,持续高脂饲料喂养并灌胃干预8周。同时选2月龄C57小鼠作为空白对照组,普通饲料喂养13周后予以生理盐水连续灌胃8周。实验末取小鼠肝脏组织用于肝功能、氧化应激、HE染色及RT-qPCR。病理学显示茯砖茶高、中剂量组小鼠肝脂轻于模型组。与空白对照组比较,模型组肝组织GSH-PX、SOD活力较低;MDA质量摩尔浓度,ALT活力,AST活力,NAS积分,SCD-1、PPAR-γ、HMGCR基因表达较高(P<0.05)。与模型组比较,茯砖茶不同剂量组肝组织MDA质量摩尔浓度,ALT、AST活力,NAS积分,SCD-1、PPAR-γ、HMGCR基因表达较低;GSH-PX、SOD活力较高。茯砖茶通过抑制肝脂合成和减少肝脏氧化应激损伤而达到逆转早期非酒精性脂肪肝的效果。

不同比率n-6/n-3多不饱和脂肪酸对apoE基因敲除小鼠炎症相关因子表达的影响

目的研究不同比率n-6／n-3多不饱和脂肪酸饮食对模型小鼠脾脏和主动脉组织中炎症相关因子表达的影响。方法8周龄雄性apoE基因敲除小鼠分别经不同比率n-6／n-3（组1：1．28；组2：5．03；组3：9．98；组4：68．26）多不饱和脂肪酸分别饮食干预，全长主动脉经油红O染色显示动脉粥样硬化（AS）病变程度，用实时定量RT-PCR技术分析不同饮食组小鼠脾脏和主动脉中炎症相关因子的表达特征。结果随着饮食中n-6／n-3比率升高，小鼠动脉粥样硬化病变逐渐加重。与组4相比，组1，2，3饮食显著抑制AS病变（P〈0．05），并显著抑制主动脉组织中趋化因子MCP-1和黏附因子VCAM-1基因表达（P〈0．05）。与组4相比，组1饮食显著抑制脾脏促炎因子IL-6和TNFα表达（P〈0．05）。各组饮食均不影响脾脏和主动脉中抗炎因子IL-4表达（P〉0．05）。结论低比率n-6／n-3多不饱和脂肪酸（1．28～9．98）饮食可通过抑制促炎因子IL-6、TNFα和趋化因子MCP-1、黏附因子VCAM—1基因表达延缓apoE基因敲除小鼠AS的发展。

血小板微粒对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块形成及稳定性的影响

目的探讨C57BL/6小鼠来源血小板微粒(platelet microparticles,PMPs)对载脂蛋白E基因敲除(apolipoprotein E knockout,ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)斑块形成及稳定性的影响。方法选取8周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠40只,采用高脂饲料饲养4周后,按随机数字表分为4组(每组10只),分别给予PBS(PBS组)、不含PMPs的上清液(supernatants,SUP组)、低剂量1×10~7个PMPs (low-dose PMPs,LDP组)、高剂量3×10~7个PMPs(high-dose PMPs,HDP组),均由尾静脉注射,每周1次,共8周。实验结束时,检测小鼠血常规、血脂、肝肾功能和血清炎症因子(CRP、IL-1β、TNF-α)水平,并留取ApoE^(-/-)小鼠主动脉和头臂干动脉用于AS方面的病理检测,包括油红O染色、HE染色、Masson染色及免疫组化检测(CD68、MMP-9、α-SMA),对AS斑块的形成及稳定性进行评估。结果 4组小鼠体质量差异无统计学意义,血常规(WBC、RBC、PLT、HGB)、血脂(TG、TCH、LDL、HDL)、肝功(ALT、AST)、肾功能(UN、Cr)等指标差异均无统计学意义。LDP组和HDP组的血清CRP、IL-1β、TNF-α水平显著高于PBS组或SUP组(P<0.05)。LDP组和HDP组主动脉AS斑块的总面积显著高于PBS组或SUP组(P<0.05)。与PBS组相比较,其他3组的斑块内脂质核心占斑块总面积的比例均显著增加(P<0.05);斑块部位的胶原含量和平滑肌细胞在HDP组均显著低于PBS组(P<0.05),而巨噬细胞则显著增加(P<0.05)。结论 PMPs可促进高脂饲养ApoE^(-/-)小鼠AS斑块的形成以及斑块局部的巨噬细胞浸润和炎症反应,减少其中胶原和平滑肌细胞的含量,从而进一步降低斑块的稳定性。

三七总皂苷对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块形成及自噬的影响

目的:探讨三七总皂苷对载脂蛋白E基因敲除ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)斑块形成的影响及其作用机制。方法:8只雄性C57BL/6J小鼠为对照组,32只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、三七总皂苷低剂量组(40 mg·kg^(-1))、三七总皂苷中剂量组(80 mg·kg^(-1))、三七总皂苷高剂量组(160 mg·kg^(-1)),每组各8只。对照组给予普通饲料喂养,其余各组采用高脂饲料喂养的同时进行药物干预,对照组、模型组给予等量生理盐水灌胃,每日1次,共干预8周,观察小鼠体质量和精神状态。全自动生化仪检测小鼠血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triacylglycerol,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)的水平;油红O染色观察主动脉斑块分布情况;HE染色观察小鼠主动脉病理变化;Western Blot检测小鼠主动脉中Beclin1蛋白表达水平;免疫荧光法检测LC3的表达水平;透射电镜观察小鼠主动脉自噬体形成情况。结果:与对照组比较,模型组小鼠体质量增加,血清TG、TC、LDL-C水平升高,主动脉内壁斑块增多,Beclin1、LC3蛋白表达水平升高,自噬体数量增多;与模型组比较,三七总皂苷可降低动脉粥样硬化小鼠体质量及血清中TG、TC、LDL-C水平,减少主动脉内壁斑块,降低Beclin1、LC3蛋白表达水平及自噬体数量,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:三七总皂苷可抑制ApoE^(-/-)小鼠AS斑块的形成,其作用机制可能与调控自噬水平相关。

高热量饮食和年龄对载脂蛋白E基因敲除小鼠脑功能的影响

目的探讨高热量饮食和年龄对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠脑功能的影响。方法选取8月龄成年ApoE^(-/-)小鼠和18月龄老年ApoE^(-/-)小鼠共20只,随机分为正常饮食成年组、正常饮食老年组、高热量饮食成年组、高热量饮食老年组,每组5只。正常饮食成年组、正常饮食老年组小鼠喂食实验室标准饲料,高热量饮食成年组、高热量饮食老年组小鼠喂食高脂饲料,干预8周。用体质量监测和葡萄糖耐量实验测试小鼠体质量、血糖变化,核磁共振波谱检测海马和下丘脑N-乙酰天冬氨酸(NAA)、胆碱(Cho)含量,Y迷宫和旷场实验检测认知功能,Western blot检测脑组织突触体相关蛋白25(SNAP-25)、突触素(synaptophysin)、突触后致密蛋白95(PSD-95)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素1β(IL-1β)表达。结果与正常饮食成年组比较,高热量饮食成年组海马NAA、下丘脑Cho和NAA、自发交替率、SNAP-25、synaptophysin、PSD-95表达降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高,差异有统计学意义(P<0.01);与正常饮食成年组比较,正常饮食老年组海马NAA、下丘脑Cho、SNAP-25、synaptophysin、PSD-95表达降低(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高(P<0.01);与正常饮食老年组比较,高热量饮食老年组海马和下丘脑Cho和NAA、中心路程/总路程、SNAP-25、synaptophysin、PSD-95表达降低(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高(P<0.01);与高热量饮食成年组比较,高热量饮食老年组海马NAA、中心路程/总路程、平均速度、synaptophysin表达降低(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高(1.61±0.10 vs 1.35±0.13,2.04±0.08 vs 1.54±0.11,P<0.05,P<0.01)。结论高热量饮食导致ApoE^(-/-)小鼠代谢障碍和神经炎症,抑制突触蛋白表达引起认知功能障碍;长期高热量饮食和年龄增加促进ApoE^(-/-)小鼠脑功能衰退。

Very low and intermediate density lipoprotein fractions from apolipoprotein E gene-knockout mice induce cholesteryl ester accumulation in J774 macrophages

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅａｔｈｅｒｏｇｅｎｉｃｒｏｌｅｏｆｖｅｒｙｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ（ＶＬＤＬ）ａｎｄｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ（ＩＤＬ）ｆｒａｃｔｉｏｎｉｓｏｌａｔ...