ISG15蛋白对感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊的免疫调节作用

为研究重组绵羊ISG15蛋白(rISG15)对感染绵羊肺炎支原体后的盘羊杂交羊的免疫调节效果,本研究将18只盘羊杂交羊随机分为A、B、C 3个组,6只巴什拜羊为D组,全部人工感染绵羊肺炎支原体(CCU=106),感染5 d后A和D组肌肉每天注射生理盐水作为对照组;B和C组每天分别肌肉注射盘羊杂交羊和巴什拜羊的rISG15 200μg/只,并采用荧光定量PCR方法检测试验羊不同时间血液中ISG15、IL-12、IFN-γ的表达水平。结果显示,IFN-γ表达水平在感染第14 d,B组显著高于A、D组(p<0.05),第21 d,B、C组显著高于A、D组(p<0.05);ISG15的表达量在第14 d与21 d,B、C、D组的表达水平显著高于A组(p<0.05);而在此期间,A组的IL-12表达水平显著高于其它各组(p<0.05),但仅A组出现50%的死亡率。实验数据表明rISG15对易感的盘羊杂交羊具有一定的免疫调节效果,为绵羊支原体肺炎防治提供了实验依据。

BPI蛋白对感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊细胞因子水平的影响

研究重组BPI蛋白(rBPI)对感染绵羊肺炎支原体(MO)的盘羊杂交羊的免疫应答分析。将6只巴什拜羊作为A组,将12只盘羊杂交羊随机分为B、C组,全部人工感染MO,感染第4天开始,C组每天分别注射rBPI,A和B组注射生理盐水。采用ELISA方法检测试验羊不同时间血清中IL-8、IL-10、IFN-γ及TNF-α的含量。在试验结束后宰杀各组6只羊,取肺组织做病理切片,进行治疗效果评价。结果:在感染初期,3个组IL-8、TNF-α及IFN-γ含量都升高,而IL-10有降低趋势。在感染后第7天,C组IL-8浓度显著低于A组(P<0.05);在第14—21天,B组极显著高于A组(P<0.01)。在第5天,C组IL-10显著高于A组(P<0.05),极显著低于B组(P<0.01);在第14天,C组极显著低于A组(P<0.01),显著高于B组(P<0.05);在第21天,C组显著低于A组(P<0.05),极显著高于B组(P<0.01)。在第14天,C组IFN-γ含量显著高于A组(P<0.05);在第21天,C组显著低于B组(P<0.05),但极显著高于A组(P<0.01)。在感染第14天,C组TNF-α显著低于B组(P<0.05),显著高于A组(P<0.05);在第21天,C组的TNF-α显著低于B组(P<0.05),但极显著高于A组(P<0.01)。组织病理学评分结果:A组平均分为9.4,B组平均分19.9,C组平均分为12.8,B组评分显著高于A、C组(P<0.05、P<0.05)。rBPI对MO感染的杂交羊有治疗作用,对细胞因子有调节作用。

杀菌性/通透性增加蛋白对感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊的免疫调节作用研究

为研究重组杀菌性/通透性增加蛋白(r BPI)对感染绵羊肺炎支原体(MO)后的盘羊杂交羊的细胞因子变化情况,本研究以6只巴什拜羊为A组,12只盘羊杂交羊随机分为B和C两组,全部人工感染MO(ccu=106),感染4 d后C组每天肌肉注射r BPI 150 mg/只,A和B组注射生理盐水,并采用荧光定量PCR方法及ELISA检测实验羊不同时间外周血中BPI、IL-1β、IL-4及IL-6的表达水平。结果显示,B对照组死亡率为33.3%。BPI的表达水平在感染后第7 d,C组显著低于A和B组(p<0.05),第14 d^21 d C组极显著高于B组(p<0.01),而在第7 d^21 d,A组极显著高于B组(p<0.01)。IL-1β表达水平在感染后第7 d^21 d,C组极显著低于A和B组(p<0.01),第21 d,A组显著低于B组(p<0.05)。IL-4的表达水平在感染后第7 d^21 d,C组极显著高于A和B组(p<0.01),第14 d^21 d,A组显著高于B组(p<0.05)。IL-6表达水平在感染第14 d^21 d,C组极显著低于A和B组(p<0.01),A组显著低于B组(p<0.05)。以上结果表明r BPI对感染MO后的盘羊杂交羊具有一定的免疫调节作用。

重组SPLUNC1蛋白对感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊的免疫调节作用研究

为研究重组SPLUNC1蛋白对感染绵羊肺炎支原体(MO)后的盘羊杂交羊免疫调节作用,本研究将6只巴什拜羊分为A组,18只盘羊杂交羊随机分为B、C、D组,对实验羊人工感染MO后第5 d,C组气管注射巴什拜羊重组SPLUNC1蛋白、D组气管注射盘羊杂交羊重组SPLUNC1蛋白,每天150μg/只;A、B组每天气管注射等量的生理盐水作为对照组。采用ELISA方法检测各组羊血清中MO抗体水平以及IL-8、IL-12、IL-13表达水平。结果显示,感染前所有实验羊MO抗体均为阴性,感染后第14 d所有实验羊MO抗体均为阳性;IL-8水平在感染后第14 d^21 d,A、C、D组极显著和显著地低于B组(p<0.01;p<0.05;p<0.01)。IL-12水平在感染后第14 d,A、C和D组极显著和显著地低于B组(p<0.01;p<0.05;p<0.01),第21 d时,A、C和D组极显著低于B组(p<0.01)。IL-13水平在感染后第5 d,A组显著低于B、C和D组(p<0.05),在第7 d^21 d,A、C、D组显著和极显著低于B组(p<0.05;p<0.01;p<0.01)。实验数据表明重组SPLUNC1蛋白对盘羊杂交羊具有明显的免疫调节作用。本研究为绵羊支原体肺炎的治疗提供了实验依据。

巴什拜羊与其杂交羊对绵羊肺炎支原体感染的比较

为了比较巴什拜羊与其杂交羊对绵羊肺炎支原体(MO)感染的差异,将6只巴什拜羊和6只杂交羊人工感染MO,分别观察其临床症状和病理解剖变化,用ELISA方法分别检测血清中IL-1β、IL-6、IL-9及IFN-γ的浓度,制作肺部组织切片观察组织病理学变化,并进行组织病理学评分。结果显示,感染后杂交羊比巴什拜羊表现出更严重的、典型的支原体肺炎的临床症状和病理剖检变化。组织病理学评分结果显示,杂交羊的评分显著高于巴什拜羊。相关细胞因子检测结果显示,杂交羊血清中IL-1β、IL-6、IL-9及IFN-γ的浓度均显著高于巴什拜羊。结果表明,巴氏拜羊对MO感染具有一定的抗性,而杂交羊对MO较易感。

盘羊×欧拉羊杂交F1与欧拉羊屠宰性能及肉品质对比研究

以3岁的盘羊与欧拉羊杂交一代、欧拉羊为对象,研究杂交效果的优劣并进行评价。选择10只羊进行屠宰试验,检测其屠宰性能和肉品质;使用仪器测定其氨基酸、脂肪酸及风味成分。结果表明,盘羊×欧拉型杂交F1宰前活质量与欧拉型藏羊差异显著,胴体质量、屠宰率、眼肌面积差异不显著;盘羊×欧拉型杂交F1的GR值、失水率和熟肉率略优于欧拉型藏羊;组氨酸和半胱氨酸含量差异显著,其余氨基酸含量差异不显著;盘羊×欧拉型杂交F1的单不饱和脂肪酸及多不饱和脂肪酸含量均高于欧拉型藏羊;两者检测均发现34种风味物质,含量差异不大。综上,盘羊×欧拉型杂交F1在屠宰性能、肉品质、脂肪酸成分及构成比例等方面都表现出良好的肉品品质。

盘羊杂交羊SP-A基因克隆与真核表达

目的为了对盘羊杂交羊肺表面活性物质相关蛋白A(Pulmonary surfactant-associated protein A,SP-A)基因进行克隆和真核表达。方法采集盘羊杂交羊肺组织,提取总RNA,采用RT-PCR的方法克隆SP-A基因的ORF序列,测序正确后将其亚克隆到pPIC9K载体中构建pPIC9K-SP-A真核表达质粒,再将该质粒电转入毕赤酵母GS115中并用甲醇诱导进行真核表达,最后用SDS-PAGE和western blot检测鉴定目的蛋白。结果扩增出的基因片段经测序比对后与SP-A基因的ORF序列一致,构建的真核表达质粒pPIC9K-SP-A经双酶切和测序鉴定成功,真核表达产物用SDS-PAGE分析,可见大小为27.33 k D的目的条带,western blot鉴定也可见1条27.33 kD的目的蛋白条带。结论本研究成功克隆了盘羊杂交羊SP-A基因的ORF序列并对其进行了真核表达,为后续研究SP-A蛋白的结构和功能奠定了基础。

野生盘羊与巴什拜羊的杂交研究

对野生盘羊与巴什拜羊进行导入杂交,通过对带有1/2、1/4野血的杂种羔羊生长状况、肉用性能、尾型、外形体质和毛质的变化进行观察及测定,并与纯巴什拜羔羊进行了比较。研究结果表明:第一、二代杂种羔羊在胚胎期四肢生长强度比躯体强,这一点继承了盘羊的遗传特性,从初生到断奶期间躯体的生长速度和强度较好,这方面继承了巴什拜羊早期生长发育快的遗传特征,在体尺指标和外部特征上野生基因占优势,毛质和毛的颜色基因巴什拜羊占优势。研究为今后家养绵羊与野生盘羊杂交和充分利用野生动物资源,提供科学数据。

巴什拜羊与野生盘羊后代杂种的适应性分析

对野生盘羊与纯巴什拜羊杂种后代的生长发育、总繁殖率、常见病发病率、抗寒能力等适应性性状与纯巴什拜羊进行了比较。结果表明,杂种一代羊的适应性较差,而回交二代羊的适应性(其总繁殖率105%,4.5月龄体重达35.8kg,常见病发病率3.3%)最好,杂交效果明显,是培育瘦肉型巴什拜羊新品系的主要组合。

野生盘羊·家羊及其杂交F_1代的血液生化指标比较

[目的]了解盘羊及其杂交后代的血液生理生化指标。[方法]对新疆野生盘羊、绵羊及其杂交F1代的血液生理指标和生化指标进行了测定与比较。[结果]盘羊及与其绵羊的杂交F1代的血红蛋白含量高于绵羊,而其碱性磷酸酶含量低于绵羊,差异极显著(P<0.01)。盘羊的红细胞总数、红细胞压积、淋巴细胞、谷丙转氨酶和钠含量高于绵羊与杂交F1代,差异极显著(P<0.01),而杂交F1代与绵羊之间差异不显著(P>0.05)。杂交F1代白细胞和粒细胞数目极显著高于野生盘羊(P<0.01),显著高于绵羊(P<0.05)。杂交F1代的血小板数目高于盘羊和绵羊,差异极显著(P<0.01)。杂交F1代的钙含量低于盘羊与绵羊,差异显著(P<0.05)。盘羊的中间细胞、总胆红素、直接胆红素和氯含量显著低于绵羊和杂交F1代,而杂交F1代与绵羊之间差异不显著(P>0.05)。绵羊、盘羊及其杂交F1代的平均红细胞体积、红细胞平均血红蛋白含量、葡萄糖、镁、磷和钾含量差异不显著(P>0.05)。[结论]该研究可为今后盘羊的杂交繁育研究提供基础数据。

绵羊肺炎支原体感染羊细胞因子的动态变化

为检测绵羊在感染绵羊肺炎支原体（MO）前后细胞因子的含量变化情况，将6只巴什拜羊和6只盘羊杂交羊人工感染MO，在感染前后分别采集静脉血，分离血清，用ELISA方法检测IL-1β、TNF—α、IL-8、IL-10及IFN-γ含量。结果显示：两组羊在感染后IL-1β浓度均升高，第21天巴什拜羊的IL-1β含量降低，且显著低于杂交羊（P〈0．05）；感染后两组的TNF—α含量逐渐升高，第14～21天巴什拜羊TNF-α含量开始下降，且第14天显著低于杂交羊（P〈0．05），第21天极显著低于杂交羊（P〈0．01）；感染后第14和21天，巴什拜羊的IL-8含量开始下降，而杂交羊则继续升高，且杂交羊IL-8含量均极显著高于巴什拜羊（P〈0．01）；两组羊的IL-10含量在第5天达到最高，且杂交羊极显著高于巴什拜羊（P〈0．01），而第14和21天巴什拜羊显著（P〈0．05）和极显著（P〈0．01）高于杂交羊；感染后两组羊的IFN-1含量逐渐升高，第14～21天，巴什拜羊的IFN-γ含量开始下降，而杂交羊则继续升高，第14和21天巴什拜羊显著（P〈0．05）和极显著（P〈0．01）低于杂交羊。结果提示：绵羊感染MO前后细胞因子变化明显，巴什拜羊和杂交羊细胞因子变化也有差异，这对研究支原体肺炎发病机理及免疫治疗有指导意义。

感染绵羊肺炎支原体前后绵羊血清中相关细胞因子的动态检测

为研究绵羊感染绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)前后体内细胞因子含量的变化,将6只盘羊杂交羊和6只巴什拜羊人工感染MO,在感染前后采集静脉血,分离血清,用ELISA方法检测IL-5、IL-9、IL-12及IL-13含量。结果显示:2组羊在感染后IL-5浓度均升高,第7(P<0.05)、14(P<0.01)和21天(P<0.01)盘羊杂交羊IL-5含量显著和极显著高于巴什拜羊;感染后第7(P<0.01)、14(P<0.01)和21天(P<0.05)盘羊杂交羊的IL-9浓度极显著和显著地高于巴什拜羊;在感染后的第7(P<0.05)、14(P<0.01)和第21天(P<0.01),盘羊杂交羊的IL-12浓度显著和极显著地高于巴什拜羊;在感染后的第5(P<0.05)、7(P<0.05)、14(P<0.01)和21天(P<0.01),IL-13浓度巴什拜羊显著和极显著低于盘羊杂交羊。结果表明:绵羊感染MO前后血清中IL-5、IL-9、IL-12及IL-13的浓度有明显变化,巴什拜羊和盘羊杂交羊的上述细胞因子变化也有显著差异,这对研究支原体肺炎发病机理及临床诊断有指导意义。