HPLC测定显齿蛇葡萄叶中4种黄酮类化合物的含量

目的:建立显齿蛇葡萄中二氢杨梅素、杨梅苷、香橙素和杨梅素含量同时测定的HPLC方法。方法:用色谱条件为Hypersil ODS 25μm(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱分离,检测波长为325 nm,流动相为甲醇∶乙腈(5∶11)-0.1%磷酸进行梯度洗脱,流速为1.0 mL,柱温为25℃。结果:二氢杨梅素、杨梅苷、香橙素和杨梅素浓度在7.8～7956、14.2～1174.4、2.9～290、0.7～46.5μg/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好。在精密度实验、稳定性实验、重复性实验中二氢杨梅素、杨梅苷、香橙素和杨梅素面积的相对标准偏差(RSD)<2.0%;二氢杨梅素、杨梅苷、香橙素和杨梅素的加样回收率范围及平均值和RSD分别为98.00%～100.12%,98.95%,0.85%; 98.75%～101.86%,100.14%,1.07%; 99.14%～101.24%,100.21%,0.84%; 98.25%～99.45%,98.81%,0.59%。所测的85份不同产地同一采收期的显齿蛇葡萄样品中,二氢杨梅素、杨梅苷、香橙素和杨梅素的含量范围分别为0.3003%～34.1934%,0.0722%～1.7105%,0.0033%～1.167%,0.0007%～0.3309%。24份同一产地不同采收期的显齿蛇葡萄样品中,二氢杨梅素、杨梅苷、香橙素和杨梅素的含量范围分别为0.3362%～7.6490%,0.0391%～2.9616%,0.0017～0.8361%,0.0019%～0.1050%之间。结论:本方法具有良好的专属性和重现性,加样回收率实验符合要求,能准确、稳定地对显齿蛇葡萄中二氢杨梅素、杨梅苷、香橙素和杨梅素含量进行同时定量测定。

玉米黄烷酮-3-羟化酶原核表达条件对香橙素生成量的影响

香橙素是类黄酮代谢途径中重要的中间化合物,黄烷酮-3-羟化酶(flavanone-3-hydroxylase,F3H)能以柚皮素为底物催化C;位接羟基从而生成香橙素。为实现香橙素绿色发展,该研究利用微生物法,对来自玉米的Zmf3h构建大肠杆菌原核表达系统后诱导ZmF3H蛋白表达。通过发酵实验验证ZmF3H在胞内可溶性表达并成功催化生成香橙素。为提高香橙素产量,对蛋白表达阶段的菌体密度、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导剂浓度、诱导时间和诱导温度等条件进行优化实验。单因素试验结果表明各实验组分别在菌种密度OD;=0.8~1.0,IPTG终浓度为0.6 mmol/L,诱导温度在23℃,诱导8 h时可明显提高香橙素生成量,综合各单因素优化条件进行实验验证后发现香橙素生成量为(32.27±1.98)mg/L,与初始条件相比提高了60.39%。

香橙素通过PPARγ介导改善血管内皮细胞胰岛素抵抗

目的研究鬼箭羽提取物香橙素(Aromadendrin,Aroma.)对高糖(High-Glucoes,HG)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelium cells,HUVECs)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的作用及机制。方法实验随机分为5组,分别为对照组(Control),模型组(IR),香橙素处理组I(1×10^(-6)mol·L^(-1))(IR+Aroma I)、香橙素处理组Ⅱ(1×10^(-5)mol·L^(-1))(IR+AromaⅡ)、香橙素处理组Ⅲ(1×10^(-4)mol·L^(-1))(IR+AromaⅢ)。其次证明Aroma改善IR由PPARγ介导,实验分为6组,即对照组(Control)、模型组(IR)、香橙素处理组(1×10^(-5)mol·L^(-1))(IR+AromaⅡ)、PPARγ抑制剂GW9662(PI,1.0μmol·L^(-1))组、IR+PI组(1.0μmol·L^(-1))组、香橙素处理Ⅱ+PI(IR+AromaⅡ+PI,1×10^(-5)mol·L^(-1),1.0μmol·L^(-1))组,除Control组和PI组(采用含5.5mmol·L^(-1)葡萄糖的DMEM培养48h)外,剩余各组先用含33mmol·L^(-1)葡萄糖的DMEM培养48h后,Aroma各组再分别用上述浓度的Aroma处理4h,抑制剂组再加抑制剂PI(1.0μmol·L^(-1))处理1h,最后所有各组均用胰岛素(100nmol·L^(-1))处理30min,收集细胞上清液并提取蛋白,分别进行指标检测。结果IR组NO水平显著下降、AngⅡ水平显著上升,说明IR模型建立成功;Aroma处理能显著逆转HG所致的NO与AngⅡ水平的改变,说明其可以改善HG诱导的IR,Aroma处理组p-PPARγ蛋白表达量与PPARγmRNA表达量较IR组明显上升。加入PI处理后,Aroma改善IR情况则被逆转。结论Aroma可以通过PPARγ介导改善HG诱导的IR。

HPLC法同时测定鬼箭羽药材中4种有效成分的含量

目的：建立高效液相色谱法测定鬼箭羽药材中4种主要有效成分儿茶素、去氢双儿茶素A、香橙素和柚皮素的含量。方法：采用DiamonsilTMC18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱,以甲醇-乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱（0-35min,9∶9∶82→17.5∶17.5∶65）,流速1mL·min-1,检测波长280nm（儿茶素、香橙素和柚皮素）、380nm（去氢双儿茶素A）,柱温30℃。结果：儿茶素、去氢双儿茶素A、香橙素和柚皮素线性范围分别为0.428~3.424μg（r=0.9998）,0.255~1.53μg（r=0.9992）,0.0788~0.630μg（r=0.9996）,0.026~0.208μg（r=0.9996）;平均加样回收率（n=6）分别为100.5%（RSD=3.5%）,101.5%（RSD=2.3%）,97.33%（RSD=1.1%）,97.81%（RSD=2.7%）。结论：9批样品测定结果表明本法简便、准确,重复性好,可用于鬼箭羽药材中儿茶素等4种成分的含量测定。

鬼箭羽饮片中香橙素含量的HPLC测定

目的:建立鬼箭羽中香橙素含量测定的分析方法。方法:采用Kromasil100-5C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-0.3%醋酸(24∶76)为流动相,检测波长292nm,流速1.0mL·min-1,检测波长292nm,柱温30℃。结果:香橙素在0.051～2.04μg呈良好的线性关系,r=0.9999。20批鬼箭羽中香橙素质量分数在0.00157%～0.0416%。结论:该方法简单、重复性好,可用于鬼箭羽的质量控制。