5种呼吸道病毒Array-ELISA检测方法的建立

目的:建立能够同时检测常见呼吸道病毒的Array-ELISA方法。方法:未经标记的单克隆抗体作为捕获抗体在96孔板的微孔中点制成阵列,生物素标记的单克隆抗体作为检测抗体,与待检病毒反应后,利用电化学发光法放大反应信号,通过CCD传感器读取反应结果。结果:经过优化后,使用的抗体组合能够检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒和副流感病毒3型,其最低检测限分别为3.1×102、1.3×103、5×103、2.5×103和1.5×104TCID50/m L,各病毒之间未见交叉反应。结论:建立的Array-ELISA方法可用于检测以上5种病毒,具有较高的灵敏性和较强的特异性。

Array-ELISA检测六项肿瘤标志物诊断结直肠癌的临床价值分析

目的:探讨微阵列酶联免疫法(Array-ELISA)检测六项肿瘤标志物诊断结直肠癌(CRC)的临床价值。方法:选择49例CRC患者作为CRC组,选择19例同期进行结直肠手术的良性病变患者作为良性组,另取同期71例健康体检者作为对照组。采集3组患者的静脉血,通过Array-ELISA技术进行六项肿瘤标志物(AFP、CEA、PSA、CA125、CA153及CA199)检测。比较3组血清六项肿瘤标志物检测结果、CRC组ROC AUC结果、以及CRC组PRE与6项肿瘤标志物的相关参数。结果:(1)CRC组血清CEA、AFP、CA199及CA125水平均高于良性组与对照组(P<0.05)。3组PSA与CA153水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)单项检测中CEA(AUC=0.916,P=0.001)具有最高的诊断价值,Logistic回归模型建立的PRE面积为0.932,均高于单项指标检测。(3)本组CRC患者中的CEA特异度、灵敏度与准确率在单项中最高;联合检测中Logistic回归预测变量PRE的特异度、灵敏度与准确率高于CEA(P<0.05)。结论:Array-ELISA对CRC患者六项肿瘤标志物均有理想的检测效果,但单项肿瘤标志物的特异度、灵敏度具有一定的局限性,六项指标联合检测可以有效提高CRC的检出率。

乙型脑炎病毒 EDⅢ蛋白的表达纯化及在 Array-ELISA 方法中的应用

目的：拟在大肠杆菌中高效表达纯化乙型脑炎病毒EDⅢ蛋白，希望能为乙型脑炎（乙脑）病毒（ JEV）感染血清的诊断试剂盒提供候选抗原。方法针对乙脑病毒的EDⅢ蛋白设计特异的PCR扩增引物，对提取的乙脑病毒RNA进行RT-PCR扩增，获取目的基因并构建重组质粒，将重组质粒转入E．coli BL21中并在IPTG作用下表达目的蛋白。将表达的乙型脑炎病毒EDⅢ抗原系列稀释后与对照抗原同时点制在ELISA微孔板中，采用Array-ELISA技术同时检测临床JEV感染患者及正常人血清，并与间接免疫荧光方法的检测结果进行比较。结果成功克隆了JEV EDⅢ蛋白基因段，并在E．coli BL21中表达，成功获得EDⅢ蛋白。该重组蛋白可用于Array-ELISA方法，进行JEV感染血清的检测，并且与传统免疫学检测方法---间接免疫荧光法结果一致。结论该重组抗原可作为JEV感染血清检测的候选抗原。

金黄色葡萄球菌肠毒素阵列ELISA检测方法的建立及评价

目的为实现对5种经典肠毒素的准确、快速鉴定及分型,本研究基于ELISA和芯片技术,建立金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)阵列ELISA(Array-ELISA)检测方法。方法通过原核表达、亲和纯化制备SE蛋白,利用杂交瘤腹腔注射制备腹水,纯化SE单克隆抗体,通过ELISA对抗体的灵敏度、特异性进行评价,点制Array-ELISA阵列,评价Array-ELISA对SE检测的灵敏度和特异性。结果采用Array-ELISA,在PBS中SE的检测限除葡萄球菌肠毒素C(SEC)为10 ng/mL外,其余均为0.0001 ng/mL,液态牛奶中SE的检测限为(0.001~10)ng/mL。在PBS和牛奶中SE检测的特异性均为100%,各型SE之间无交叉反应。同时显示与肉毒毒素也无交叉反应。结论成功建立Array-ELISA检测方法,能够灵敏、准确鉴定同一份样本中5种经典SE。

Array—ELISA技术对肾综合征出血热病毒诊断抗原的评价

目的分段表达并纯化肾综合征出血热病毒核蛋白，应用array-ELISA技术评价重组表达的核蛋白片段的诊断价值。方法构建肾综合征出血热病毒核蛋白表达质粒pET-32a（＋）／Pn、pET-32a（＋）／Pc，在大肠杆菌中诱导表达并用亲和层析法纯化，运用array-ELISA方法鉴定重组蛋白的检测特异性，检测结果与商品化胶体金试剂盒进行比较。结果在大肠杆菌中正确表达了肾综合征出血热病毒的核蛋白，亲和纯化得到较高纯度的蛋白质；应用array-ELISA技术从16份临床疑似血清样本中检出13份阳性血清，与商品化胶体金试剂盒一致性达到94％。结论获得的重组蛋白His-Pn可作为肾综合征出血热特异性诊断抗原之一；array-ELISA方法可以作为检测病毒抗体的有效手段。