沙苑子蛋白组分分离提取及抗氧化活性比较

以药食同源物质沙苑子为原料,基于Osborne法对沙苑子组分蛋白进行分离提取,采用单因素分析对沙苑子蛋白质组分的提取工艺参数进行优化,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)对沙苑子组分蛋白进行亚基分析,并对各组分蛋白体外抗氧化活性进行比较分析。结果表明,沙苑子清蛋白最佳提取温度为45℃,球蛋白最佳提取盐(NaCl)浓度为6%,醇溶蛋白最佳提取醇浓度为70%,谷蛋白最佳提取碱浓度为0.15 mol/L。SDS-PAGE结果表明,不同提取条件不仅会影响蛋白提取率,同时也会影响蛋白组分的亚基组成。DPPH自由基、ABTS+自由基清除试验结果表明,沙苑子4种组分蛋白均具有一定的自由基清除能力,其中沙苑子谷蛋白的自由基清除能力最优。

微性状鉴定法在医疗机构中药饮片质量验收中的应用

目的针对易混淆中药饮片采用微性状鉴定法进行鉴别,研究其在医疗机构饮片验收中的应用价值。方法采用微性状鉴定法,借助相关仪器,以花、果实、种子、全草、根与根茎、茎、其他等不同入药部位为分类对10组31种易混淆中药表面肉眼和普通放大镜无法观察到的微观特征进行分析、归纳和总结,并拍照留存。结果观察到10组31种易混淆中药谷精草、华南谷精草、毛谷精草、枳壳、常山胡柚、木瓜、毛叶木瓜、紫苏子、白苏子、野生紫苏、沙苑子、华黄芪、卷柏(卷柏)、卷柏(垫状卷柏)、江南卷柏、深绿卷柏、翠云草、金钱草、点腺过路黄、广金钱草、绵马贯众、狗脊蕨贯众、苏铁蕨贯众、猫人参、藤梨根、雷公藤、野葡萄根、五灵脂、夜明砂、望月砂和蚕砂的微性状特征,发现各类中药具有独特的鉴别特征,花类中药可研究色泽、组织构造及表面特征(如纹理、毛被等);果实类可研究果皮结构、色泽、发达程度及外层特征(如角质层、蜡被等);种子类可研究形态、大小、色泽与纹理;全草类可研究叶的长宽比、最宽处、表面特性与分裂情况,以及茎的茸毛、气孔等;根与根茎、茎类中药可研究皮部、木部构造及维管束或导管的形态与排列,其他类别可从源头入手,借助微观镜头发现其特有微性状鉴别特征。结论微性状鉴定法作为传统性状鉴别的补充,能提高中药饮片鉴定的准确性,该方法经济实用、简便易行且结果直观,可作为一项常用的中药鉴定方法在医疗机构中推广普及,是实现中药快速检验的可行方案。

不同施肥处理下沙苑子产量及质量的变化

[目的]豆科植物扁茎黄芪(Astragalus complanatus R.Br.)的干燥成熟种子沙苑子有丰富的药用及营养价值,其市场需求量逐年增长、种植规模不断扩大,考察N、P、K配方施肥对沙苑子产量和质量的影响,可为沙苑子人工栽培合理施肥提供参考。[方法]在陕西省大荔县开展大田试验,通过三因素二次D-饱和最优设计对沙苑子进行施肥试验,统计不同小区的产量并以产量为指标建立产量肥效方程,以水溶性浸出物、总黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、沙苑子苷及芒柄花苷的含量为指标测定不同施肥处理下沙苑子的质量。采用熵权法结合灰色关联-TOPSIS法综合评价沙苑子的质量,以综合评价结果为指标建立质量肥效方程。采用频率分析法对产量及质量肥效方程进行优化筛选,综合二者的最佳施肥量交集得到沙苑子的推荐施肥量。[结果]不同施肥处理下沙苑子的产量增加9.11%~61.80%,其中F10(N_(3)P_(3)K_(1);N:135 kg·hm^(-2),P_(2)O_(5):140 kg·hm^(-2),K_(2)O:47.84 kg·hm^(-2))对其产量促进作用最为显著。研究发现NPK肥料对沙苑子产量的影响程度为:P>N>K。F7(N2P2;N:80.50 kg·hm^(-2),P_(2)O_(5):83.48 kg·hm^(-2),K_(2)O:0 kg·hm^(-2))处理下,沙苑子药材品质最佳。NPK肥料对沙苑子质量的影响程度为:N>P>K。综合产量与质量的最佳施肥量得到沙苑子种植时的推荐施肥量为N:69.19~87.28 kg·hm^(-2),P_(2)O_(5):82.43~103.89 kg·hm^(-2),K_(2)O:0.00~67.68 kg·hm^(-2)。[结论]不同施肥配比对种植沙苑子的产量与质量具有不同程度的影响,适当的NPK肥配合施肥可明显提高沙苑子的产量与质量。

液质联用法同时测定沙苑子中11种黄酮类成分的含量

目的:建立超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定沙苑子中11种黄酮类成分(杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖苷、沙苑子苷A、沙苑子苷B、紫云英苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、鼠李柠檬素-3-O-β-D-葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、异槲皮苷、番石榴苷、芒柄花素、鼠李柠檬素)的含量。方法:采用Waters ACQUITY UPLC BEH C_(18)柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);以甲醇和0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.2 mL/min;柱温40℃;进样量为1μL;电喷雾离子化正、负离子模式,多反应监测模式。结果:在考察的浓度范围内,11种黄酮类成分线性关系良好(r≥0.99955);平均加样回收率和RSD分别为97.63%~102.87%和0.96%~2.73%。结论:该方法准确度、精密度、稳定性、线性关系良好,可用于沙苑子中11种黄酮类成分的含量测定。

HPLC测定沙苑子中沙苑子苷A的含量

目的:建立沙苑子中沙苑子苷A的含量测定方法。方法:运用高效液相色谱法测定。色谱柱为ZOR BAXEXTEND C18(4. 6mm×2 5 0mm ,5 μm) ,流动相乙腈水 磷酸(2 0∶80∶0 .2 ) ,测定波长2 6 7nm。结果:沙苑子苷A在0 . 0 86～0 . 4 30 μg呈良好的线性关系,加样回收率为99 .8% ,RSD 1. 0 %。结论:本法灵敏、快速、准确,可用于测定沙苑子中沙苑子苷A的含量。

沙苑子提取物中多酚含量的测定

研究Folin-Ciocalteu比色法测定沙苑子中多酚含量的优化条件,并以优化的条件测定沙苑子不同溶剂提取物中多酚的含量。结果表明:Folin-Ciocalteu显色剂(经稀释10倍)用量1.00mL、7.5g/100mLNa2CO3用量3.00mL、反应温度25℃、反应时间120min、测定波长647nm为沙苑子中多酚含量测定的最佳条件,所用没食子酸标准品在10～100μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系(y=0.0081x-0.0249,R2=0.9996);沙苑子甲醇、乙醇和丙酮溶液提取物的质量浓度为1g/100mL左右时较适合测定其多酚的含量。

白扁豆等4种中药多糖的体外抗氧化活性研究

利用Fenton反应检测石斛、益母草、沙苑子和白扁豆4种中药中的成分——多糖对羟基自由基和邻苯三酚自氧化体系产生的超氧阴离子自由基的清除作用,并对多糖抗氧化活性进行研究.结果表明,石斛、益母草和白扁豆中的多糖对超氧阴离子自由基和羟基自由基有不同程度的清除作用,而沙苑子中的多糖则具有促氧化活性.

沙苑子酚类提取物的抗氧化能力研究

为有效开发利用沙苑子,探究其抗氧化特性为深加工提供理论依据和经验参数,本文主要从沙苑子酚类提取物的总还原能力,对超氧阴离子自由基和羟基自由基的清除能力,及对Fe2+诱导的脂质过氧化的抑制作用等四个方面进行了研究并比较了三种不同沙苑子酚类提取物的抗氧化性能。结果表明沙苑子酚类提取物均具有一定的抗氧化能力,在实验浓度范围内呈现一定的量效关系。

沙苑子黄酮抗肝癌生长作用及对免疫功能的影响

目的:探讨中药提取物沙苑子黄酮(flavonoids extracts fromsemen Astragali complanati,FAC)对小鼠肝癌H22细胞生长的影响及其机制。方法:建立H22荷瘤小鼠模型,观察FAC对H22肝癌移植瘤生长的抑制作用及其对荷瘤小鼠免疫器官、巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞转化功能及生存期的影响。结果:高、中、低剂量组FAC对荷瘤小鼠肝癌细胞生长具有显著抑制作用,与正常对照模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05);其中环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)对照组的抑瘤率与FAC高剂量组相近(P>0.05)。FAC可以明显延长荷瘤小鼠的存活期,高、中、低剂量组的生命延长率分别为64.9%、56.7%和28.1%,与CTX对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。另外,高、中、低剂量组FAC明显提高荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数,与正常对照模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05);且高、中剂量组能显著提高巨噬细胞吞噬功能和淋巴细胞转化能力,与正常对照模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01);而CTX的作用方向相反,与正常对照模型组比较差异也具有统计学意义(P<0.01)。结论:FAC可抑制肝癌H22细胞生长,延长荷瘤小鼠存活期,并能提高荷瘤小鼠的非特异性免疫功能。FAC可能通过调节机体免疫功能来发挥抗肿瘤作用。

沙苑子的HPCE指纹图谱鉴别

目的建立沙苑子HPCE指纹图谱鉴别方法。方法用高效毛细管电泳法测定沙苑子的指纹图谱,并作相似度比较分析。结果沙苑子不同样品指纹图谱相似度较好,而沙苑子和草沙苑的指纹图谱有明显区别。结论HPCE指纹图谱具有重现性好,特征性强,方法简便等特点,可用于沙苑子类药材的鉴别。

沙苑子黄酮类化合物的响应面法优化提取及其清除DPPH自由基能力

为了获得沙苑子黄酮类化合物的有效提取工艺参数,在单因素试验基础上选取液料比、提取温度、沙苑子粒度、提取时间作为试验因素,以提取物的吸光度为响应值,采用响应面法对提取工艺参数进行优化,并对优化条件下的提取物进行清除DPPH自由基能力研究。结果表明:60%甲醇是有效的提取剂;最佳工艺参数为粒度120目,温度42℃,提取时间47 min,液料比30∶1,该条件下沙苑子黄酮类物质的粗提率为10.66%;提取物具有一定的清除DPPH自由基效果,低浓度条件下呈现良好的量效关系,浓度为2%时清除率最高。

沙苑子提取物调脂和保肝作用的实验研究

目的 :观察沙苑子提取物A和B的调脂和保肝作用。方法 :将雄性大鼠给脂肪乳剂造成高脂模型 ,在连续给予沙苑子提取物 2 0d后 ,观察血清中TC、TG、LDL C、HDL C和肝重量系数的变化。雄性小鼠给沙苑子提取物 14d后腹腔注射 0 0 7%四氯化碳 0 1ml 10g ,然后观察血清中ALT和AST的变化。结果 :给予沙苑子提取物A和B后 ,均可降低高血脂大鼠血清TC、TG和LDL C ,升高LDL C ,四氯化碳肝损小鼠的血清ALT和AST也均明显下降。结论 :沙苑子提取物A和B均具有明显的调脂和保肝作用。

高效液相色谱法测定沙苑子及其炮制品中沙苑子苷的含量

目的建立沙苑子中沙苑子苷的含量测定方法,考察沙苑子炮制前后沙苑子苷的含量变化。方法采用高效液相色谱法,Apollo-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液(21∶79)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长为266nm。结果沙苑子苷在0.0416～0.6656μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为100.6%,RSD=0.73%。结论本法简便、准确、重复性好、专属性强,为沙苑子药材质量控制提供了方法。盐炙可导致沙苑子中沙苑子苷含量下降。

D301树脂对沙苑子酚类物质的吸附动力学研究

本文以D301树脂对沙苑子甲醇粗提物中酚类物质的吸附特性为研究内容,具体分析了D301树脂的静态吸附动力学、吸附等温线、吸附热力学性质和动态吸附参数,并用所优化的条件对沙苑子甲醇粗提物中酚类物质进行了纯化。结果表明,在静态吸附实验条件下,D301树脂对沙苑子酚类物质的吸附是吸热过程,等温线略向上凸起属具有物理吸附特性的优惠吸附类型,吸附参数能用Freundlich方程较好拟合,相关系数均大于0.99;动态吸附研究表明,用70%的乙醇作为洗脱剂即可获得较高的解吸率;提取物上样浓度在13.5 mg/mL、流速为2.0 mL/min时有利于吸附且能使吸附很快达到平衡;经D301树脂吸附纯化处理后,粗提物中总酚含量由10.2%提高到34.3%是原来的近3.4倍。本研究表明,可以用D301树脂对沙苑子酚类物质进行较好的纯化。

沙苑子总黄酮和百草酸的体内外抗肿瘤作用

目的观察沙苑子总黄酮和百草酸的体内外的抗肿瘤作用。方法 110只接种S180肉瘤腹水昆明鼠随机分为模型组、环磷酰胺组、羟基喜树碱组、沙苑子总黄酮组和百草酸组,MTT法观察沙苑子总黄酮和熊果酸对S180肉瘤和人结肠癌细胞SW620的体外抑制作用,RT-PCR法测定百草酸对凋亡基因Bax、Bcl-2及P53的mRNA表达。结果沙苑子总黄酮和百草酸对S180肉瘤小鼠均有抑制作用,百草酸的抑制作用更加明显。两者对胸腺和脾脏均无明显抑制作用;沙苑子总黄酮对人结肠癌细胞SW620无明显抑制作用,而熊果酸却能明显的抑制该肿瘤细胞;熊果酸显著上调促凋亡基因P53和Bax的表达,下调抑凋亡基因Bcl-2的表达。结论百草酸在体内和体外均有抗肿瘤作用,沙苑子总黄酮的抗肿瘤作用尚需进一步研究。

沙苑子提取液对不同体系中草酸钙晶体生长影响的研究

通过与水、氯化钠、正常人尿液体系的比较,重点研究了结石患者尿液体系中加入中药沙苑子提取液对草酸钙晶体生长的的影响,利用SEM,FTIR和XRD等测试手段对所得晶体进行表征。结果发现:在结石患者尿液体系中形成的草酸钙晶体为一水草酸钙(COM)晶体,而在这4种体系中加入沙苑子提取液后,只形成二水草酸钙(COD)晶体,表明沙苑子提取液能抑制COM晶体生长,并且随着沙苑子提取液浓度增大,抑制作用增强。沙苑子抑制草酸钙晶体生长的可能机理进行了探讨。

不同地区商品沙苑子中沙苑子苷A的含量比较

目的:以沙苑子苷 A 为指标,对不同地区商品沙苑子进行含量测定及质量评价。方法:运用高效液相色谱法,采用 Hy-persil ODS 2(5 μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱,以乙腈-水-磷酸(20:80:0.2)为流动相,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长为267 nm,测定不同地区市售沙苑子样品中沙苑子苷 A 的含量。结果:各地市售沙苑子的植物来源不同,沙苑子苷 A 的含量差异较大。结论:正品中以陕西渭南所售沙苑子中沙苑子苷 A 含量最高,与我国古代确认的道地药材相吻合;不同地区沙苑子中沙苑子苷 A 含量可作为药材质量评价的一项指标,该方法灵敏、准确。

响应面法优化沙苑子中黄酮类化合物超声辅助提取工艺

为了获得沙苑子黄酮类化合物的最佳提取工艺参数,选取液料比、超声温度、沙苑子粒度、超声时间作为实验因素,以提取物的吸光度为响应值,采用响应面实验设计法对工艺参数进行优化。结果表明:沙苑子黄酮类丙酮提取物在323nm处有最大吸光值;60%丙酮为最佳提取剂;最佳工艺参数为粒度120目,超声温度50℃,超声时间60min,液料比40:1(mL/g),粗提率为16.19%。环境扫描电镜显示,超声处理后沙苑子粉的表面出现了蜂窝状形貌图,从而促使胞内物质溶出,提高了提取率。

HS-SPME-GC-MS联用分析沙苑子中挥发性成分

目的:分析沙苑子中挥发性成分的化学组成。方法:采用顶空固相微萃取法(HS-SPME)萃取沙苑子中挥发性成分,并用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对沙苑子的挥发性成分进行分析。结果:从沙苑子中共分离出51个色谱峰,鉴定出其中25种化合物,占总量的78.85%。其中主要成分为L-乙酸龙脑酯(14.10%)、樟脑(5.98%)、右旋龙脑(4.27%)等。结论:首次采用HS-SPME-GC-MS联用技术分析沙苑子挥发性成分,为沙苑子的进一步开发利用提供了科学依据。

不同产地沙苑子中总黄酮和沙苑子苷A的含量比较

目的:比较不同产地沙苑子中总黄酮和沙苑子苷A的含量差异。方法:采用分光光度法测定沙苑子中总黄酮的含量,HPLC法测定沙苑子中沙苑子苷A的含量。结果:不同产地的沙苑子中总黄酮和沙苑子苷A的含量差别较大。来自于陕西渭南的沙苑子样品总黄酮和沙苑子苷A的含量明显高于其他样品。不同样品中总黄酮和沙苑子苷A的含量趋势是一致的。结论:从一个侧面证明作为道地药材的潼蒺藜的确品质优良,值得进一步研究开发。