慢性肾脏病循环中FGF23对心房纤维化的促进作用

目的探究慢性肾脏疾病(CKD)循环中成纤维细胞生长因子(FGF)23通过与心房组织成纤维细胞生长因子受体(FGFR)4结合促进心房纤维化的可能机制。方法选择健康雄性SD大鼠22只,随机数字表法抽取14只行5/6肾切除手术并且喂养15周建立CKD模型,剩余8只作为假手术(Sham)组。观察2组体质量、血压、肾功能、超声心动图、心外膜电标测以及病理指标。酶联免疫吸附试验测定2组大鼠循环中的FGF23水平,左心房组织转录组测序寻找差异表达基因。大鼠心房成纤维细胞分为对照组、FGFR抑制剂组、转化生长因子-β(TGF-β)组及TGF-β+FGFR抑制剂组,采用Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅰ(ColⅠ)以及磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白的表达。结果CKD组大鼠收缩压、肌酐以及血尿素氮水平升高。心脏电生理检查显示CKD可促进心房颤动及房室传导阻滞的发生。心脏超声提示CKD组左心房内径明显增大,病理染色显示CKD组左心房发生明显纤维化,心外膜电标测提示CKD组大鼠左心房电传导速度明显减慢并且传导异质性明显增加。CKD大鼠循环中的FGF23水平明显增加。Western blot检测发现CKD组大鼠FGFR4表达上调。阻断心房成纤维细胞FGF23/FGFR4信号通路后,纤维化相关蛋白α-SMA、ColⅠ及p-AKT/AKT降低。结论CKD可能通过诱导心房结构重构及电重构促进房颤的发生,循环中增加的FGF23可能通过与心房组织中FGFR4结合启动下游AKT通路,进而促进心房纤维化。

连接蛋白2和FGF23在房颤介导心肌病兔心房组织中的表达

目的 探究连接蛋白2(JP2)和成纤维细胞生长因子23(FGF23)在房颤介导心肌病(AMC)兔中的表达规律。方法 通过左心房快速起搏法建立心房颤动(AF)模型,4周后行超声心动图检查,射血分数下降>10%纳入AMC组,否则为AF组,对照组只植入起搏器不起搏。最终成功建立AF动物模型11只,其中AF组6只,AMC组5只,对照组6只。超声心动图检测左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室射血分数(LVEF)等指标,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清JP2和FGF23水平。处死动物后,取心房组织,Western blot和RT-qPCR检测JP2和FGF23蛋白及mRNA表达。结果 与对照组相比,AMC组左房内径、右房内径、右室内径增大,LVEF降低,与AF组相比,AMC组LVEF降低,主动脉增宽,右室扩大。与对照组相比,AF组左房心肌细胞FGF23(P<0.001)、JP2(P<0.01)的表达均明显增加,而AMC组JP2表达降低(P<0.001)。与AF组相比,AMC组FGF23和JP2的表达下降。与对照组相比,AF组FGF23和JP2血浆浓度升高,AMC组FGF23水平升高。与AF组相比,AMC组FGF23和JP2血浆浓度偏低。结论 在AMC兔模型中,FGF23表达增加,JP2表达下降。

持续性心房颤动患者血清FGF23、尿酸水平与其心房纤维化的相关性分析

目的分析持续性心房颤动患者血清成纤维细胞生长因子23(FGF23)、尿酸(UA)水平与其心房纤维化的相关性。方法选取2020年7月至2022年8月我院收治的心房颤动患者166例,根据病情严重程度不同分为持续性心房颤动组(n=86)和阵发性心房颤动组(n=80);另选取同期在我院确诊的50例窦性心律患者作为对照组。比较三组患者的血清FGF23、UA、心房纤维化生化标记物[Ⅰ型胶原羧基端前肽(PICP)、Ⅲ型胶原前多肽(PⅢNP)、层黏连蛋白(LN)、透明质酸(HA)]水平,分析持续性心房颤动患者血清FGF23、UA与其心房纤维化生化标记物的相关性。结果持续性心房颤动组血清FGF23、UA、PICP、PⅢNP、LN、HA水平高于阵发性心房颤动组与对照组,且阵发性心房颤动组血清FGF23、PICP水平高于对照组(P<0.05)。持续性心房颤动患者血清FGF23与PICP、PⅢNP、LN、HA呈明显正相关(P<0.05);血清UA与PICP、PⅢNP呈明显正相关(P<0.05),与LN、HA无明显相关性(P>0.05)。结论持续性心房颤动患者血清FGF23、UA水平异常升高,与其心房纤维化具有一定的相关性。

血清FGF-23对心房颤动患者射频消融术后复发的预测价值

目的 探讨成纤维细胞生长因子-23(FGF-23)对心房颤动(AF)患者射频消融术后复发的预测价值。方法选取接受射频消融术治疗的AF患者132例,依射频消融术后12个月的复发情况分为复发组(41例)和未复发组(91例)。另根据患者血清FGF-23的表达水平将其分为FGF-23高表达组和FGF-23低表达组。采用彩色多普勒超声诊断仪检测左心房内径(LAD),采用酶联免疫吸附试验试剂盒检测血清FGF-23的水平。结果 与未复发组比较,复发组持续性AF比例以及LAD、血清FGF-23水平升高(P<0.05);持续性AF以及LAD、血清FGF-23水平过高均是AF患者射频消融术后复发的危险因素(P<0.05);经受试者工作特征(ROC)曲线分析发现,血清FGF-23、LAD及两者联合检测预测AF患者射频消融术后复发的曲线下面积分别为0.770(95%CI:0.681~0.859)、0.743(95%CI:0.651~0.836)、0.828(95%CI:0.752~0.904)。FGF-23高表达组(FGF-23≥224.42μg/L,56例)的射频消融术后复发率明显高于FGF-23低表达组(FGF-23<224.42μg/L,76例),差异有统计学意义(44.64%vs. 21.05%,χ^(2)=8.379,P<0.05)。结论 血清FGF-23过高是AF患者射频消融术后复发的危险因素,且其对AF患者射频消融术后复发有较高的预测价值。

机械敏感离子通道Piezo1通过激活β-catenin诱导心房成纤维细胞衰老

目的 衰老心房成纤维细胞中新型机械敏感离子通道Piezo1的基因表达明显升高,观察其是否通过激活β-catenin参与心房成纤维细胞的衰老进程。方法 通过酶消化法分离培养3~4周龄雄性C57BL/6小鼠原代心房成纤维细胞,给予叔丁基过氧化氢(TBHP)刺激建立衰老模型,检测衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)活性。Western blot检测TBHP(100μmol·L^(-1))处理的细胞中Piezo1、β-catenin/p-β-catenin及衰老相关蛋白p53和p21的表达水平。衰老的小鼠心房成纤维细胞(MAFs)分别给予Piezo1通道抑制剂GsMTx4(3、10μmol·L^(-1))或Piezo1 siRNA,以及β-catenin抑制剂XAV939(3、10μmol·L^(-1));年轻的MAFs给予Piezo1特异性激动剂Yoda1(1、10μmol·L^(-1)),观察对细胞中β-catenin和衰老相关蛋白表达和活性的影响。结果 TBHP处理后,MAFs的SA-β-Gal染色阳性率明显增加,提示细胞发生衰老;且细胞中Piezo1、β-catenin/p-β-catenin和p53/p21的蛋白表达明显增加(P<0.05)。分别抑制Piezo1(GsMTx4/Piezo1 siRNA)或β-catenin(XAV939),可明显降低TBHP诱导的MAFs衰老率,以及减少β-catenin/p-β-catenin,p53/p21等蛋白表达和活性的增加(P<0.05)。而Yoda1可促进年轻细胞衰老,且β-catenin活性和衰老相关蛋白表达升高(P<0.05)。结论 机械敏感离子通道Piezo1通过激活β-catenin诱导心房成纤维细胞衰老的病理过程。

血管紧张素Ⅱ通过抑制人心房成纤维细胞BKCa通道诱导心房纤维化

目的探讨在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心房纤维化的过程中,大电导钙激活钾通道(BKCa通道)的作用机制。方法通过组织块贴壁法获取原代人心房成纤维细胞,使用免疫荧光染色进行鉴定。用浓度为500 nmol/L的AngⅡ处理人心房成纤维细胞24 h,实时荧光定量PCR与蛋白质印迹法用于检测处理前后纤维化标志基因α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)和胶原蛋白Ⅲ(collagenⅢ),以及BKCa通道的α与β亚基的mRNA和蛋白表达水平,全细胞膜片钳技术检测AngⅡ处理前后的BKCa通道的电流变化。结果(1)人心房成纤维细胞经AngⅡ处理后,α-SMA、collagenⅠ和collagenⅢ的mRNA和蛋白表达水平升高;(2)经过AngⅡ处理后,BKCa通道α及β亚基mRNA和蛋白表达水平降低;(3)人心房成纤维细胞存在功能正常的BKCa通道,具有电压依赖性;(4)人心房成纤维细胞BKCa通道的宏观电流幅度在经AngⅡ处理后降低;(5)在人心房成纤维细胞上过表达BKCa通道α亚基后,纤维化标志物α-SMA、collagenⅠ和collagenⅢ的表达受到了明显抑制。结论AngⅡ可能通过抑制人成纤维细胞BKCa通道的表达和功能来诱导人心房成纤维细胞的纤维化,并最终导致心房纤维化。

心房颤动患者人成纤维细胞的单细胞RNA序列的生物信息学分析

目的 筛选心房颤动(atrial fibrillation,AF)促纤维化的关键基因及信号通路,探讨AF诱导的人心房成纤维细胞的促纤维化重塑的分子机制。方法 从公共基因数据库(gene expression omnibus,GEO)下载单细胞RNA序列表达谱GSE148506,通过主成分分析和T分布式随机邻接嵌入得到差异基因,利用SingleR软件包进行细胞类型注释和轨迹分析,使用Clusterprofiler软件包,对成纤维细胞的差异基因进行基因本体(geneontology,GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genome,KEGG)信号通路分析。利用在线STRING数据库和Cytoscape软件进行蛋白质相互作用网络和模块分析。利用插件CytoHubba筛选出关键基因。结果 共得到6个细胞类型注释群,包括成纤维细胞、脂肪细胞、内皮细胞、单核细胞、成纤维细胞、骨骼肌细胞。共鉴定出367个成纤维细胞差异基因,包括37个下调基因和330个上调基因。GO功能富集分析结果显示,成纤维细胞的差异基因生物过程主要富集于细胞外基质组织等;细胞组成主要富集于含胶原细胞外基质等;分子功能主要富集于细胞外基质结构成分等。KEGG信号通路分析表明,差异基因主要富集于黏着斑、细胞外基质-受体相互作用等。STRING分析从蛋白质网络互作图中鉴定出6个成纤维细胞关键基因,即FN1、TIMP1、LAMB1、FBN1、C3、VCAN。结论 利用生物信息学分析,鉴定出FN1、TIMP1、LAMB1、FBN1、C3、VCAN在内的基因及黏着斑、细胞外基质-受体相互作用、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白酶信号通路和转化生长因子-β信号通路可能是AF诱导的人心房成纤维细胞促纤维化重塑的重要分子机制。

心房颤动病人血清SLC7A11、FGF23水平检测及临床意义

目的:检测心房颤动(AF)病人与窦性心律者血清溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、血清成纤维细胞生长因子23(FGF23)的水平,分析二者与AF之间的相关性及临床意义。方法:选取住院的AF病人118例作为观察组,根据相关指南分为阵发性AF组67例和非阵发性AF组51例。对照组选取窦性心律健康者96名。选择酶联吸附免疫实验法(ELISA)测出血清中SLC7A11、FGF23浓度;比较3组病人的临床资料及血清学指标,利用Pearson相关性分析血清SLC7A11、FGF23水平与超声心动图中左房内径(LAD)、左室舒张内径(LVD)、左心室射血分数(LVEF)和左心室缩短分数(FS)相关性。采用多元logsitic回归分析AF病人AF发生持续相关因素。结果:与对照组相比,血清SLC7A11在阵发性AF组和非阵发性AF组均下降(P<0.01),且非阵发性AF组中SLC7A11低于阵发性AF组(P<0.01),血清FGF23在阵发性AF组和非阵发性AF组均升高(P<0.01),且非阵发性AF组中FGF23高于阵发性AF组(P<0.01);Pearson相关性分析显示,LAD与血清SLC7A11呈负相关关系(r=-0.534,P<0.01),与血清FGF23呈正相关关系(r=0.532,P<0.01)。多元logsitic回归分析结果显示,SLC7A11是AF独立的保护因素(OR=0.231,P<0.01),而FGF23是独立危险因素(OR=1.097,P<0.01)。结论:SLC7A11、FGF23可能与AF的发病、进展有关。

心房颤动患者血清IL-10、sCD14、FGF-21检测对左心房血栓形成的预测价值

目的观察心房颤动患者血清白细胞介素-10(IL-10)、可溶性白细胞分化抗原14(sCD14)、成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)水平,并探究其对左心房血栓形成的预测价值。方法选取2020年8月至2021年8月上海市浦东新区人民医院收治的86例心房颤动患者作为观察组,另选取60例健康体检者作为对照组。比较两组受检者的血清IL-10、sCD14、FGF-21水平,以及观察组中发生与未发生左心房血栓患者的临床资料、超声心动图指标和血清IL-10、sCD14、FGF-21水平,采用Logistic回归分析心房颤动患者左心房血栓形成影响因素,采用Pearson相关系数模型分析血清IL-10、sCD14、FGF-21水平与超声心动图指标的相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)评价血清IL-10、sCD14、FGF-21水平对心房颤动患者左心房血栓形成的预测价值。结果观察组患者的血清IL-10水平为(18.74±5.32)pg/mL,明显低于对照组的(25.87±7.49)pg/mL,sCD14、FGF-21水平分别为(12.58±4.17)mg/L、(224.15±28.76)pg/mL,明显高于对照组的(4.82±1.23)mg/L、(145.16±13.94)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);发生左心房血栓患者的左心房内径(LAD)、sCD14、FGF-21水平分别为(44.56±6.13)mm、(16.94±4.06)mg/L、(250.87±32.77)pg/mL,明显高于未发生患者的(39.12±4.98)mm、(11.66±2.98)mg/L、(218.50±25.69)pg/mL,IL-10水平为(15.26±4.12)pg/mL,明显低于未发生患者的(19.48±5.94)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);经Logistic回归分析结果显示,LAD及血清IL-10、sCD14、FGF-21均为心房颤动患者左心房血栓形成的影响因素(P<0.05);经Pearson相关系数模型分析结果显示,心房颤动患者血清IL-10与超声心动图指标LAD呈负相关(r=-0.809,P<0.05),sCD14、FGF-21水平与超声心动图指标LAD呈正相关(r=0.772、0.832,P<0.05);血清IL-10、sCD14、FGF-21联合预测心房颤动患者左心房血栓形成的曲线下面积(AUC)值大于单独指标(P<0.05)。结论心房颤动患者血清IL-10、sCD14、FGF-21水平异常,联合检测其水平可预测患者左心房血栓形成,为临床工作提供参考依据。

白藜芦醇抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的实验研究

目的观察白藜芦醇对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠心脏成纤维细胞（cFs）增殖的影响及其机制。方法差速贴壁法培养新生大鼠cFs，在体外建立AngⅡ诱导的cFs增殖模型。采用MTT法检测细胞增殖，分别观察一氧化氮合酶抑制剂（L-NAME）、鸟苷酸环化酶抑制剂（ODQ）及白藜芦醇对AngⅡ诱导的cFs增殖的影响；采用心钠素（ANP）及脑钠素（BNP）mRNA表达检测细胞肥厚反应；放免法及ELISA法测细胞培养液中ANP及BNP水平；RT-PCR方法检测ANP、BNPmRNA表达；硝酸还原酶法测细胞培养液中一氧化氮（NO）水平；化学比色法测细胞上清液中一氧化氮合酶（NOS）水平；放免法测定细胞内环磷酸鸟苷（cGMP）水平。结果白藜芦醇25-100μmol／L呈时间及剂量依赖性抑制AngⅡ诱导的cFs增殖，但这种作用可被L-NAME及ODQ部分阻断。白藜芦醇作用细胞后NO、cGMP水平升高，ANP、BNP水平降低，ANP、BNPmRNA的表达下降。结论白藜芦醇在一定浓度范围对AngⅡ诱导的cFs增殖及细胞肥厚有抑制作用。上调NO-cGMP信号通路可能是其发挥作用的途径之一。

成纤维细胞生长因子FGF23与心房颤动

心房颤动（房颤）是临床上最常见的心律失常之一，而随着社会人口的老龄化，全球范围内心房颤动的发病率和患病率有逐渐增加的趋势，房颤导致心力衰竭、卒中的发生率及病死率明显增加，已经成为危害公众健康的重要心血管疾病之一，引起全社会的重视和关注。

采用组织块法培养心房颤动患者心房成纤维细胞

目的建立心房颤动（简称房颤）患者心房肌成纤维细胞培养模型。方法通过心脏外科手术获得房颤患者右心耳组织30mg，对经典的大鼠组织块培养法作改进，采用组织块放入75％酒精中浸泡1min，培养基配方和植块方法改进，第二代传代时采用差速贴壁法除去内皮细胞，培养房颤患者心房肌成纤维细胞。结果形态学观察显示，心肌成纤维细胞生长较慢，3天左右开始从组织块边缘爬出，10天呈接合状态，细胞呈梭形，细胞排列较紧密，有的交叉重叠生长，胞核较大，呈椭圆形，通常含1～3个核，胞浆透明，胞体较大，无搏动；免疫细胞化学染色可见，心肌成纤维细胞波形蛋白呈强阳性反应，第八因子呈阴性反应；成功培养的心肌成纤维细胞纯度达95％以上。结论采用组织块法可成功培养人心房的心肌成纤维细胞，且简单、易行。

成纤维细胞在心房纤颤发生中的作用机制

心肌成纤维细胞在各种致病因素的作用下,转化为肌成纤维细胞并过度增殖,同时产生过量的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)蛋白,这一过程涉及一系列复杂的信号通路及电生理机制,可导致心房纤维化的发生,并引起心房在结构、功能、电生理方面的重构,而心房重构是心房纤颤动发生最重要的过程之一。文中就成纤维细胞在心房纤维化、心房重构、心房纤颤发生中的作用作一综述。

风湿性心脏病患者心房成纤维细胞的原代培养

目的建立一种人心房成纤维细胞原代培养简单有效的方法。方法新鲜右心耳组织取自心外科风湿性心脏病手术患者,采用0.25%胰蛋白酶和0.2%Ⅱ型胶原酶消化法分离细胞,用含2O%胎牛血清的DMEM培养液进行培养并传代,显微镜下观察心房成纤维细胞生长状况。波形蛋白(Vimentin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅷ因子(VWF)抗体对细胞进行免疫荧光鉴定。结果获取大量细胞,形态典型;Vimentin、α-SMA表达阳性,VWF阴性,鉴定为心房肌成纤维细胞。结论胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶消化法是一种简单有效的人心房成纤维细胞原代培养方法。

靶向沉默HDAC6对乳鼠心房肌成纤维细胞活化增殖的作用

目的探究组蛋白去乙酰化酶(HDAC6)对乳鼠心房肌成纤维细胞活化增殖的影响作用。方法将50只乳鼠(雄性)分别提取心房肌成纤维细胞,应用Western blot法测定HDAC6和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况;运用qRT-PCR技术检测HDAC6和α-SMA mRNA的表达情况;MTT法检测心房肌成纤维细胞的细胞增殖活性;使用LipofectamineTM2000 Reagent向心房肌成纤维细胞中转染小干扰RNA HDAC6(siRNA-HDAC6)后观察对心房肌成纤维细胞增殖的影响。结果转染心房肌成纤维细胞siRNA-HDAC6组HDAC6和α-SMA的蛋白表达明显下降;qRT-PCR技术检测siRNA-HDAC6组中HDAC6和α-SMA的mRNA表达明显下降;转染siRNA-HDAC6明显抑制心房肌成纤维细胞的增殖活性。结论靶向沉默HDAC6可抑制心房肌成纤维细胞活化增殖,提示其在心房纤维化中可能发挥调控作用。

风湿性心脏病心房颤动患者心房组织碱性成纤维细胞生长因子及转化生长因子β_1的表达及意义

目的观察风湿性心脏病(风心病)心房颤动(房颤)患者心房组织中碱性成纤维细胞因子(bFGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)的表达情况,并探讨其在风心病房颤心房纤维化中的作用及意义。方法将38例风心病二尖瓣病变接受换瓣手术者于术中获取的右心耳分为3组,其中窦性心律组8例,阵发性房颤组10例,持续性房颤组大于或等于6个月20例。应用羟脯氨酸含量测定法检测各组心房组织胶原含量;应用免疫组织化学技术检测各组心房组织中bFGF和TGF-β1的蛋白表达及分布。结果bFGF和TGF-β1主要表达在心肌细胞的胞质;与风心病窦性心率组相比,bFGF和TGF-β1表达及胶原含量在阵发性和持续性房颤组均显著增加(P<0.01);与阵发性房颤组相比,持续性房颤组中这两种细胞因子的表达及胶原含量继续明显增加(P<0.05)。bFGF和TGF-β1与胶原含量进行相关分析,发现bFGF及TGF-β1的表达程度与心房胶原含量均呈正相关,即随心房胶原含量的增加,bFGF(r=0.52,P<0.05)、TGF-β1(r=0.70,P<0.01)表达增强。结论风心病患者心房组织中bFGF和TGF-β1的表达上调可能是心房纤维化发生的分子机制之一,在风心病房颤的发生和维持中可能起重要作用。

转化生长因子-β1和阿托伐他汀对人心房成纤维细胞Ⅰ型胶原和Smads蛋白表达的影响

目的 :通过转化生长因子-β1(TGF-β1)和阿托伐他汀对培养的人心房成纤维细胞进行干预,观察其Ⅰ型胶原,Smad2、Smad4和Smad7 m RNA及蛋白表达的变化,探讨心房纤维化和抗纤维化机制。方法 :通过心外科手术获得患者右心耳组织,并培养出人心房成纤维细胞;将细胞传代培养,应用四唑盐比色(MTT)法检测不同浓度(0、0.1、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0 ng/ml)TGF-β1和不同浓度(0、0.1、1.0、10.0、100.0μmol/L)阿托伐他汀对心房成纤维细胞生长影响;应用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹杂交(Western blot)技术检测10.0 ng/ml TGF-β1、10.0μmol/L阿托伐他汀以及10.0 ng/ml TGF-β1+10.0μmol/L阿托伐他汀联合对心房成纤维细胞中Ⅰ型胶原,P-Smad2,Smad4和Smad7 m RNA和蛋白表达的变化。结果:MTT法检测示:与对照(0 ng/ml)比,1.0 ng/ml和10.0 ng/ml TGF-β1干预使心房成纤维细胞Ⅰ型胶原、P-Smad2、Smad4的m RNA和蛋白表达水平增高(P<0.05),而Smad7的m RNA和蛋白表达水平减低(P<0.05),差异均有统计学意义;与10.0 ng/ml TGF-β1相比,TGF-β1加用或单用阿托伐他汀(10.0μmol/L)心房成纤维细胞Ⅰ型胶原、P-Smad2、Smad4的m RNA和蛋白表达水平减低(P<0.05),而Smad7 m RNA和蛋白表达水平增高(P<0.05),差异均有统计学意义。结论:TGF-β1促进心房成纤维细胞增殖和Ⅰ型胶原表达,阿托伐他汀抑制其增殖和Ⅰ型胶原表达,可能是通过影响TGF-β1/Smads途径起作用。

房颤患者血清对心肌成纤维细胞趋化运动的影响

目的:研究心肌成纤维细胞的运动特性,以及房颤与非房颤患者血清对成纤维细胞趋化运动诱导能力的差异。方法:用胰酶和胶原酶消化、差速贴壁法培养新生SD大鼠的心肌成纤维细胞,取3-4代采用Transwell装置检测房颤组血清与非房颤组血清诱导成纤维细胞运动的能力差异。结果:在各组血清的趋化诱导作用下,与对照组相比,迁移至下室的细胞数明显增多。其中持续性房颤组最多,非房颤房性心律失常组明显高于阵发性房颤组,对照组细胞数最少,各组比较均具有显著差异。Logistic回归分析表明,迁移至滤膜下的细胞数与左房直径以及房颤有相关性。结论:(1)各组血清的趋化诱导能力高于对照组,不同组间的差异说明心房纤维化是一个慢性、隐匿、迁延的过程。以修复为目的的成纤维细胞迁移浸润数量间接反映了心肌损伤的存在、范围和程度。(2)迁移浸润的细胞数变化先于左房直径变化,提示房颤和左房直径增大的正相关关系可能并非直接的因果关系,心房肌损伤后的纤维化可能参与其中。

心房颤动患者心房组织碱性成纤维细胞生长因子及转化生长因子-β_1基因表达与心房纤维化的关系

目的探讨心房颤动(简称房颤)患者心房纤维化的分子机制。方法75例风湿性心脏瓣膜病(简称风心病)接受换瓣手术者按术前心脏节律分为窦性心律组(n=34),阵发性房颤组(n=11),持续性房颤组(n=30);分别采用半定量逆转录聚合酶链反应和免疫组化技术测定Ⅰ型胶原(ColⅠ)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和转化生长因子-β1(TGFβ-1)的mRNA和蛋白含量。结果阵发性房颤组、持续性房颤组心房组织胶原容积分数明显高于窦性心律组;持续性房颤组增加更明显(P均<0.05)。心房组织胶原容积分数与左房内径、房颤持续时间呈正相关。与窦性心律组比较,ColⅠ、bFGF和TGFβ-1的mRNA和蛋白表达水平在阵发性房颤组、持续性房颤组均显著上调,持续性房颤组相对于阵发性房颤组亦明显增高(P均<0.05)。同时ColⅠ、bFGF的mRNA、蛋白表达均与房颤持续时间及左房内径呈正相关。结论心房组织中bFGF和TGFβ-1的基因表达上调可能是成纤维细胞增殖导致胶原增加和心房纤维化的分子机制之一。

肝细胞生长因子/转化生长因子-β_1对人心房成纤维细胞增殖的作用

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)和转化生长因子-β_1(TGF-β_1)在体外培养的人心房成纤维细胞增殖中的作用,观察HGF对人心房成纤维细胞TGF-β_1表达的影响。方法入选福建省立医院心血管外科接受换瓣手术的风湿性心脏病(RHD)患者20例,其中窦性心律(SR)者和慢性心房颤动(CAF)者各10例,分别作为SR组和CAF组。记录患者左心房内径(LAD)。换瓣术中无菌条件下取适量右心耳组织,人心房成纤维细胞原代培养。水溶性磷酸化四唑盐-1(WST-1)比色法检测HGF和TGF-β_1在不同浓度(HGF:25,50,100,200 ng/ml;TGF-β_1:0.1,1,10,100 ng/ml)和不同时间(12,24,48,72h)对人心房成纤维细胞增殖的影响。检测HGF/TGF-β_1对人心房成纤维细胞增殖的影响。半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测心房成纤维细胞TGF-β_1 mRNA水平,分为3组:SR组、CAF组和HGF干预组(CAF组中再加入100 ng/ml HGF干预48 h)。采用SPSS 19.0软件进行数据处理。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果 CAF组患者的LAD显著高于SR组[(5.76±1.37)vs(4.43±0.77)cm]。HGF和TGF-β_1对人心房成纤维细胞的增殖分别具有抑制和促进作用,且与剂量(r_(HGF)=-0.686;r_(TGF-β_1)=0.655)和时间(r_(HGF)=0.557;r_(TGF-β_1)=0.840)显著相关(P<0.05),其中:100 ng/ml HGF作用48 h抑制作用最显著;10 ng/ml TGF-β_1作用48 h促进作用最显著。HGF/TGF-β_1对人心房成纤维细胞增殖具有抑制作用。与CAF组相比(1.78±0.98),SR组(0.92±0.66)和HGF干预组(0.67±0.64)的TGF-β_1 mRNA表达水平均显著减少,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 CAF患者LAD增大,TGF-β_1分泌增多。HGF能够抑制人心房成纤维细胞TGF-β_1的生成,部分拮抗TGF-β_1促增殖作用。