根癌农杆菌attM基因的克隆及表达

目的:利用γ-丁内酯在基因工程菌中合成聚-4-羟基丁酸酯。方法:利用PCR技术克隆内酯水解酶attM基因,进行体外表达,并导入质粒pKSSE5.3,构建新的工程菌,进行摇瓶培养。结果:测序结果显示DNA序列全长1 077 bp,包含771bp的开放阅读框,编码256个氨基酸。携带attM基因的表达载体能够进行正常表达,内酯酶活性为5.82U/mL;在摇瓶培养条件下,工程菌E.coli XL1-Blue(pKSSE5.3M9)的培养液中P(4HB)占细胞干重的含量为29%。结论:成功克隆了attM基因,新构建的工程菌能利用γ-丁内酯为碳源合成聚-4-羟基丁酸酯。