基于硫磺素T核酸探针级联信号体系的荧光免疫分析方法用于食品中黄曲霉毒素B_(1)的检测

为开发能应用于复杂的食品基质中且准确高、灵敏高、特异性好的黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxins B_(1),AFB_(1))检测方法,该研究以抗体偶联的磁性纳米微球(MMPMs-AFB_(1)抗体)为捕获探针,包被原/葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOx)偶联的纳米微球(AFB_(1)-OVA-PPs-GOx)为信号探针,结合芬顿反应-硫磺素T荧光核酸探针体系开发了一种“Turn on”型AFB_(1)磁分离荧光免疫分析方法。结果显示,该方法对AFB_(1)的检测范围为0.05~50 ng/mL,最低检测限为0.027 ng/mL。在AFB_(1)的添加质量浓度为1、5、20、200 ng/g(ng/mL)的加标植物源性食品样品中,AFB_(1)的回收率良好,为81.6%~112.1%,变异系数值为1.2%~15.8%。该方法成功应用于玉米粉质控样品中AFB_(1)的检测。结果表明,所建立的方法灵敏度高,特异性好和抗基质干扰能力强,可用于食品中的AFB_(1)的精确定量检测。

维生素B_(1)、B_(12)穴位注射治疗膝骨关节炎的临床疗效观察

目的分析膝骨关节炎(KOA)的疾病特点,评价辅助维生素B_(1)、B_(12)穴位注射治疗的临床效果。方法选取60例经影像学检查确诊的KOA患者,均给予维生素B_(1)、B_(12)穴位注射治疗。观察治疗效果、患者满意度,比较治疗前后患者的症状评分、生活质量评分。结果60例患者的治疗总有效率为95.00%,患者满意度为98.33%。治疗后患者西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC)的疼痛、僵直、功能障碍评分分别为(2.90±1.05)、(1.60±1.20)、(8.02±2.20)分,均低于治疗前的(9.05±1.50)、(6.50±1.50)、(19.50±3.50)分(P<0.05)。治疗后患者的生活质量综合评定量表(GQOL-74)的躯体功能、心理功能、社会功能、物质生活状态评分分别为(90.50±3.50)、(91.30±3.20)、(90.80±4.20)、(90.60±4.50)分,均高于治疗前的(73.03±3.03)、(82.50±3.30)、(82.20±3.50)、(80.80±4.02)分(P<0.05)。结论辅助维生素B_(1)、B_(12)穴位注射治疗KOA,患者预后良好,可促进患者病情改善,减轻疼痛,提升患者生活质量,且患者的满意度高。

减轻AFB_(1)毒性作用的外源性化合物研究进展

黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))是黄曲霉素(AFs)的一种,主要存在于霉变的饲料中。为了解减轻AFB_(1)毒性作用的外源性化合物研究进展,本文描述了AFs和AFB_(1)的理化特性,以及AFB_(1)在体内的代谢解毒过程,并梳理了姜黄素、维生素E和酵母硒等8种可以缓解AFB_(1)中毒的外源性化合物及其作用机理。AFs是一类由黄曲霉和寄生曲霉产生的毒素,以肝脏作为主要靶器官,具有强致癌、致畸形和致突变等毒害作用。其中AFB_(1)的毒性最强,可引起机体氧化应激、细胞凋亡、基因突变及免疫系统损伤等,其在动物体内主要通过CYP450s等酶作用进行代谢和解毒。姜黄素等外源性化合物共同的作用机制是通过抑制或诱导体内代谢酶活性、改变毒素的代谢速率和代谢途径及缓解动物的氧化应激状态等途径,减缓AFB_(1)的毒性作用。本文为筛选新的解毒药物及动物AFB_(1)中毒的临床治疗提供参考。

酶抑制型比色分析花生油中黄曲霉毒素B_(1)的含量

为建立一种高效便捷的黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))检测方法,该研究以硫代乙酰胆碱(acetylcholine thio,ATCh)为底物,探究AFB_(1)对乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)生物活性情况的影响。结果表明,硫代胆碱(thiocholine,TCh)能以Au-S共价形式吸附在金纳米粒子(gold nanoparticles,AuNPs)表面,导致AuNPs发生聚合,其颜色由酒红色逐渐转变为蓝灰色,同时在波长522 nm处的局域表面等离子共振吸收峰也顺次降低。当样品中存在AFB_(1)时,乙酰胆碱酯酶的生物活性受到抑制,减弱硫代乙酰胆碱水解生成TCh的能力。基于测定抑制前后522 nm处的紫外-可见吸收峰值变化,该研究构建一种快速、简便、灵敏的AFB_(1)可视化比色方法,并实现了样品中痕量AFB_(1)的检测。最优试验条件为试验介质pH7.4,乙酰胆碱酯酶浓度2500 mU/mL,底物浓度5μmol/L,反应时间60 min。AFB_(1)检测的线性范围为0.1~20 ng/mL,检出限达到0.03 ng/mL,实际花生油样品的加标回收率为93.4%~104.9%,综上,该方法具有较高的灵敏度与准确性。

伏马菌素B_(1)脱毒研究进展

伏马菌素B_(1)(FB_(1))是由镰刀菌产生的水溶性代谢产物,存在于镰刀菌污染了的谷物、油料作物、坚果、饲草和饲料中,是常见的真菌毒素之一。FB_(1)会对神经系统、呼吸系统、消化系统和生殖系统产生不同毒性作用,给农牧业造成不可估量的经济损失。如何对FB_(1)进行脱毒,以降低其毒性作用,是目前研究的热点。因此,本文对FB_(1)的物理脱毒、化学脱毒、生物脱毒及其应用进行综述,重点对常用于FB_(1)生物脱毒的菌株和酶及其脱毒效果、脱毒机制进行了深入探讨,以期为提高FB_(1)脱毒效率和开发新的FB_(1)脱毒方法提供参考和思路。

微嗜酸寡养单胞菌A2对摄食AFB_(1)污染日粮鹌鹑的保护效果

为研究微嗜酸寡养单胞菌(Stenotrophomonas acidaminiphila)A2对采食AFB_(1)日本鹌鹑的保护效果,本研究在含黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))(95.34±2.62)μg/kg日粮中添加不同浓度(1 kg/t和2 kg/t)A2菌剂,饲喂30 d,通过检测鹌鹑的生产性能、器官指数、血清生化、肝肾抗氧化性能、蛋品质以及肝脏和蛋中的AFB_(1)含量等,评定A2对AFB_(1)造成危害的保护作用。结果表明:添加A2菌剂显著降低了AFB_(1)导致的鹌鹑料蛋比、肝脏和脾脏指数、血清中碱性磷酸酶(ALP)、谷丙转氨酶(ALT)、总甘油三酯(TG)等指标升高的负面影响;A2菌剂显著提高了AFB_(1)导致鹌鹑肝肾组织中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)水平降低的现象;A2菌剂显著提高了AFB_(1)导致的蛋壳重量、蛋壳强度和蛋形指数降低的负面影响;A2菌剂减少了肝脏和蛋中AFB_(1)的残留。且随着A2浓度增加,改善效果越明显。综上,S.acidaminiphila A2对AFB_(1)造成鹌鹑的负面影响有一定的改善作用。

以“维生素B_(1)质量分析”为例探索药物分析实验教学改革

以药物分析综合性实验《维生素B_(1)原料药及片剂的质量研究》为例,将新教学模式应用于药物分析综合实验项目,参照药物质量控制研究岗位的工作特点把项目培养方案与该岗位的职业需求相对接,设置岗位情景、明确岗位目标、增加岗位实例。最终提高学生的岗位适应能力和职业技能。以此,培养具备专业基础扎实、严格控制药品质量、具有良好药学职业道德的综合型药学人才。

同时测定复方四维女贞子胶囊中维生素B_(1)和维生素B_(6)的含量

目的:建立高效液相色谱法测定复方四维女贞子胶囊中维生素B_(1)和维生素B_(6)的含量。方法:采用C 18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-庚烷磺酸钠溶液(0.32 g庚烷磺酸钠,加水800 mL溶解,加三乙胺2 mL,冰醋酸10 mL,加水稀释至1000 mL)(体积比7∶93)为流动相,流速:1.0 mL/min,检测波长:274 nm,柱温为40℃,进样体积10μL。结果:维生素B_(1)在0.4988~99.76μg范围内线性关系良好,回归方程Y=12976x-2190.4(R 2=1);维生素B_(6)在0.4822~96.44μg范围内线性关系良好,回归方程Y=11071x+1567(R 2=1);维生素B_(1)回收率为100.76%(n=9),RSD为0.7%;维生素B_(6)回收率为99.51%(n=9),RSD为0.8%。结论:该方法简便、快速、准确,为复方四维女贞子胶囊中维生素B_(1)和维生素B_(6)的含量测定提供了科学的测定方法。

基于核酸杂交反应的荧光生物传感器的制备及在黄曲霉毒素B_1检测中的应用

采用核酸适配体作为特异性识别元件,SYBR Green I(SGI)荧光染料为信号输出单元,构建了黄曲霉毒素B_1(AFB_1)生物传感器,并对试验条件进行了优化。优化的试验条件如下:适配体互补链与适配体的物质的量比为1.5,SGI加入量为10μL,适配体双链与SGI的作用时间为2 min,适配体与AFB_1作用时间为14 min。结果表明,在AFB_1质量浓度为0.1~1 000μg·L^(-1)时,荧光强度变化量与其质量浓度对数呈线性关系,检出限(3S/N)为0.081μg·L^(-1)。对实际玉米样品进行加标回收试验,回收率为95.2%~105%,测定值的相对标准偏差(n=7)均小于6.0%。与其他适配体传感器进行比较,该方法所构建的荧光适配体传感器对AFB_1的检测具有操作简便、检测范围宽、灵敏度高、特异性强、成本低廉等优点,适合现场快速测定。

2022—2023年合肥市市售花生黄曲霉毒素B_1污染状况及膳食暴露风险评估

目的了解合肥市市售花生中黄曲霉毒素B_1(aflatoxins B_1,AFT B_1)污染情况,进行相应的膳食暴露和健康风险评估,为相关防控措施的制定提供参考。方法2022—2023年通过随机抽样的方式采集合肥市9个县(市、区)中的花生样品,使用同位素稀释液相色谱-串联质谱法对样品中AFT B_1的含量进行测定;通过问卷调查的方式了解合肥市人群的坚果消费情况,以坚果消费量代替花生消费量。分析不同特征人群经花生AFT B_1暴露的情况,估算暴露限值(margin of exposure,MOE)和肝癌发病风险。结果2022—2023年共对合肥市79份花生样品开展AFT B_1检测,检出率为45.57%(36/79),超标率为13.92%(11/79)。男性、女性坚果消费量分别为(4.61±6.12)g/d和(5.21±6.44)g/d,差异无统计学意义(t=1.279,P>0.05);6~17岁、18~59岁以及≥60岁人群的坚果消费量分别为(4.90±6.28)g/d、(3.53±5.66)g/d和(3.90±6.14)g/d,差异有统计学意义(F=7.134,P<0.01)。6~17岁、18~59岁和≥60岁人群经花生的AFT B_1每日膳食暴露量分别为1.70、0.99和1.04 ng/(kg·d),MOE分别为236、403和385,引发的肝癌发病风险分别为每年0.04例/10万人、0.03例/10万人和0.03例/10万人;当严格执行AFT B_1限量标准后,MOE分别为7003、11961和11438,发病风险可分别降至每年0.0015例/10万人、0.0008例/10万人和0.0009例/10万人。结论合肥市售花生样品中AFT B_1检出率较高,建议对合肥市花生中AFT B_1污染水平开展更加全面和持续性的监测工作,并积极采取有效的控制措施,以保障居民的食品安全。

维生素B_(1)联合肠内营养治疗重症脑卒中的效果

目的探讨维生素B_(1)与肠内营养联合治疗重症脑卒中的临床效果。方法选取2022年1月至2023年10月萍乡市人民医院收治的80例重症脑卒中患者作为研究对象,按照随机数字表法分为研究组和对照组,各40例。对照组采用肠内营养治疗,在此基础上研究组加用维生素B1治疗。比较两组治疗前后营养指标[总蛋白(TP)、血红蛋白(Hb)、白蛋白(ALB)],免疫功能指标[免疫球蛋白(Ig)A、IgG、IgM],预后情况。结果治疗后两组TP、Hb水平低于本组治疗前,且研究组TP、Hb水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后研究组MDA、SOD水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组IgA、IgG及IgM水平低于本组治疗前,且研究组IgA、IgG及IgM水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组预后良好的占比(47.50%)高于对照组(15.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论维生素B1和肠内营养的联合应用在重症脑卒中的治疗中显示出潜在的益处,可能通过改善营养指标、增强免疫应答来促进患者的恢复。

基于纳米抗体的可再生免疫亲和柱结合高效液相色谱-串联质谱法测定玉米中的黄曲霉毒素B_(1)

目的研究黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxinB_(1),AFB_(1))纳米抗体的表达产量的影响因素,开发具有可再生性的AFB_(1)免疫亲和柱,构建免疫亲和处理-高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)测定玉米中AFB_(1)污染的分析方法。方法研究诱导温度、诱导时间和诱导剂浓度等对AFB_(1)纳米抗体表达量的影响,比对验证AFB_(1)纳米抗体可再生免疫亲和柱的耐受性和可再生使用次数。使用70%甲醇水溶液提取玉米样品中AFB_(1),提取液通过免疫亲和柱净化富集后进行HPLC-MS/MS检测,最后进行方法学验证并应用到实际样品检测。结果诱导AFB_(1)纳米抗体表达的最优条件分别为诱导温度16℃、诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷浓度0.5 mmol/L、诱导时间14 h,在最优条件下产量可达7.8 mg/L。AFB_(1)纳米抗体具有良好灵敏度、亲和性、特异性和甲醇耐受性,制备的AFB_(1)免疫亲和柱具有极好的可再生性,重复使用150次以上,对AFB_(1)回收率仍可达80%以上。同时,建立的免疫亲和处理-HPLC-MS/MS,在0.1~100.0μg/L范围内呈现良好的线性关系,检出限为0.014μg/L,定量限为0.047μg/L。在3个不同加标浓度下,回收率在92.0%~104.1%,变异系数小于3.9%。结论本研究开发的AFB_(1)纳米抗体免疫亲和柱表现出优秀的再生性和高特异性,节约了检测成本,建立的免疫亲和处理-HPLC-MS/MS检测方法操作简便、回收率高、结果准确,适用于实际玉米样品中AFB_(1)的含量测定。

白藜芦醇对黄曲霉毒素B_(1)致兔肾脏损伤的保护作用

【目的】探究白藜芦醇(resveratrol,Res)对黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))致兔肾脏损伤的保护作用。【方法】将21只40日龄的家兔随机分为3组,每组7只,分别为对照组、AFB_(1)组和AFB_(1)+Res组,其中对照组饲喂基础饲粮,AFB_(1)组饲喂含0.3 mg/kg BW AFB_(1)的基础饲粮、AFB_(1)+Res组饲喂含0.3 mg/kg BW AFB_(1)和30 mg/kg BW Res的基础饲粮,试验期21 d。试验结束后观察家兔肾脏组织病理变化,检测血清中肌酐(creatinine,CRE)、尿素氮(urea nitrogen,BUN)和尿酸(uric acid,UA)含量,检测肾脏组织中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)和丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量/活性。【结果】与对照组相比,AFB_(1)组家兔肾脏可见肾小囊腔扩张、肾小管上皮细胞排列紊乱、细胞核模糊和脱落,且肾脏中糖原沉积增多;血清中CRE、BUN和UA含量均显著升高(P<0.05);肾脏组织中GSH-Px、SOD活性和T-AOC均显著降低(P<0.05),MDA含量显著升高(P<0.05)。与AFB_(1)组相比,AFB_(1)+Res组家兔肾脏组织结构损伤得到缓解,且糖原沉积减少;血清中CRE、BUN和UA含量均显著降低(P<0.05);肾脏组织中GSH-Px、SOD活性和T-AOC均显著升高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。【结论】饲料中添加Res可以通过提高兔肾脏抗氧化能力、调节氧化应激水平而有效缓解AFB_(1)引起的兔肾脏损伤。

桦褐孔菌提取物对黄曲霉素B_(1)暴露小鼠肝损伤的缓解作用

[目的]探究桦褐孔菌提取物(IOE)对黄曲霉毒素B1(AFB_(1))暴露小鼠肝损伤的保护作用及机制。[方法]选取30只6周龄、体重相近的SPF级雄性C57BL/6小鼠,随机分为5组,对照组连续灌胃蒸馏水10 d;AFB_(1)组第1~7天连续灌胃蒸馏水,第8~10天连续灌胃2 mg/kg AFB_(1);不同浓度IOE组第1~7天分别连续灌胃25、50和100 mg/kg IOE,第8~10天各组均连续灌胃2 mg/kg AFB_(1),灌胃剂量均为0.2 mL,每天1次。试验结束后对小鼠称重并采集血液、肝脏组织,统计肝脏指数;通过苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏组织病理变化;利用流式细胞仪分析肝脏细胞凋亡情况。通过细胞毒性试验,筛选AFB_(1)诱导AML12细胞损伤最适条件,并以此建立肝损伤模型,给予不同浓度IOE进行干预,利用CCK-8法测定细胞活力,确定IOE防治AFB_(1)诱导AML12细胞损伤的剂量范围。使用ELISA法检测血清和细胞中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;利用实时荧光定量PCR检测肝脏和AML12细胞中TNF-α、IL-6、IL-1β、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因mRNA表达量;采用Western blotting检测肝脏和AML12细胞中NLRP3、Bax和Bcl-2蛋白表达量。[结果]与对照组相比,AFB_(1)组肝细胞排列紊乱、细胞肿胀,细胞凋亡率极显著升高(P<0.01);血清中TNF-α、IL-6、IL-1β含量均极显著升高(P<0.01);肝脏中TNF-α、IL-6、IL-1β、NLRP3和Bax基因表达量均极显著升高,Bcl-2基因表达量极显著降低(P<0.01);NLRP3和Bax蛋白水平极显著升高,Bcl-2蛋白水平极显著降低(P<0.01)。与AFB_(1)组相比,不同浓度IOE组小鼠炎性细胞浸润减少,细胞排列整齐,细胞凋亡率极显著降低(P<0.01);血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量极显著降低(P<0.01);肝脏TNF-α、IL-6、IL-1β、NLRP3和Bax基因mRNA表达量极显著降低,Bcl-2基因表达量极显著升高(P<0.01);NLRP3和Bax蛋白水平均极显著降低,Bcl-2蛋白水平极显著升高(P<0.01)。细胞毒性试验结果显示,AFB_(1)诱导AML12细胞损伤最适条件为10μg/mL AFB_(1)作用24 h, IOE防治AFB_(1)诱导AML12细胞损伤的浓度梯度为1.5、3、6μg/mL。体外试验结果显示,AML12细胞中各炎性因子分泌、凋亡相关基因及蛋白表达量变化趋势与体内试验结果均一致。[结论]IOE可通过调节NLRP3、Bax和Bcl-2表达抑制炎性因子分泌,降低细胞凋亡,进而缓解AFB_(1)暴露引起的小鼠肝脏损伤。

益生菌对黄曲霉毒素B_(1)的降解作用及其在家禽生产上的应用

黄曲霉毒素(aflatoxin,AF)主要存在于污染粮油及其制品中,常见的有AFB_(1)、AFB_(2)、AFG_(1)和AFG_(2)四种类型,以黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))毒性最强,对全球农业和食品安全造成极大危害。目前,常用的缓解AFB_(1)毒性的方法包括物理法、化学法和生物法,其中生物脱毒法中,益生菌作为绿色无污染的添加剂成为研究的热点。本文综述了黄曲霉毒素对家禽的危害,列举了对黄曲霉毒素具有降解作用的益生菌,阐述了益生菌的解毒机制以及在禽类生产中的应用,以期为利用益生菌降解AFB_(1)的研究及应用提供借鉴和指导。

黄曲霉毒素B_(1)降解菌株的分离鉴定、发酵条件的优化及活性组分分析

为筛选出一株高效降解黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))的菌株,选取土壤为菌株来源,进行富集培养,经过以香豆素为唯一碳源的初筛和添加AFB_(1)的复筛后,对筛选得到的各菌株进行16S rDNA鉴定,比对其测序结果,选取降解AFB_(1)最高的菌株,探究发酵时间、发酵温度、初始pH、接种量、培养基对菌株降解AFB_(1)的影响规律,通过正交试验优化发酵条件,并对降解方式进行初步探索。结果表明:经过初筛和复筛得到7株能够降解AFB_(1)的菌株,经鉴定均为伯克霍尔德菌属,其中Burkholderiasp.D6的AFB_(1)降解率最高;最优发酵条件为以LB培养基为发酵培养基、发酵时间84h、发酵温度37℃、初始pH 7.0、接种量10%,在此条件下Burkholderiasp.D6对AFB_(1)的降解率为(87.91±2.32)%;初步判断降解AFB_(1)的活性组分是蛋白质或者酶。综上,通过筛选得到了一种能够高效降解AFB_(1)的菌株,蛋白质或酶参与了AFB_(1)的降解。

基于胶体金-适配体的层析试纸条检测玉米中黄曲霉毒素B_(1)

黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))因其剧毒性及在粮食中分布广泛而成为人类健康和粮食安全的重大风险因素之一,因此建立快速、灵敏的检测方法十分必要。利用胶体金和适配体作为金标探针,构建一种新型层析试纸条以实现玉米中AFB_(1)的快速检测。根据体系中AFB_(1)存在会减弱生物素标记的适配体与金标探针的结合,从而导致试纸条检测线的颜色强度降低或消失,进而实现对AFB_(1)高效灵敏检测。在最佳条件下,试纸条检测AFB_(1)的检出限值低至0.5 ng/mL,在0.5~500 ng/mL范围内快速准确检测且对AFB_(1)具有高度的特异性。本研究制备的适配体试纸条能够成为玉米中AFB_(1)检测的有效方法,具有良好的应用前景。

植物维生素B_(1)生物合成及生物强化的研究进展

维生素B_(1)是所有生物所必需的微量元素,其作为多个酶的辅因子,参与重要的细胞代谢途径。人体缺乏维生素B_(1)会增加罹患心血管及神经失调性疾病的风险。与植物和微生物不同,人类和其他动物不能从头合成维生素B_(1),必须从饮食中获取。因此,研究植物中维生素的生物合成途径,并在此基础上对植物中的维生素B_(1)含量进行生物强化具有重要意义。维生素B_(1)合成途径中有许多酶的参与,如嘧啶合成酶(THIC)、噻唑合成酶(THI1)、硫胺素磷酸合成酶(TH1)、硫胺素单磷酸酶(TH2)和硫胺素焦磷酸激酶(TPK)等。结合相关研究,对维生素B_(1)在植物中的生物学功能、生物合成途径及合成相关基因的功能进行总结,并介绍了通过代谢工程实现生物强化的研究进展,以期为进一步提高植物中维生素B_(1)含量提供参考。

Ag^(+)/Cys介导的核酸探针级联荧光信号免疫检测法测定玉米和大米中黄曲霉毒素B_(1)

以葡萄糖氧化酶(GOx)催化Ag^(+)/Cys介导的富G-ssDNA/Tb^(3+)核酸探针体系引发荧光强度变化为方法学基础,开发了一种新型ELISA双重级联荧光信号放大系统,对葡萄糖氧化酶具有高的灵敏度响应(低至0.05μg/mLGOx)。将此体系与对GOx负载的纳米微球为信号探针的磁分离免疫体系相结合,建立了一种用于食品中AFB_(1)的高灵敏的双重级联信号放大的荧光免疫检测方法。该方法对AFB_(1)的检出限为0.05 ng/mL,在加标的玉米和大米样品中,添加回收实验结果表明,AFB_(1)的回收率在85.09%~105.2%之间,变异系数(CV)值为6.8%~15.7%。

降解黄曲霉毒素B_(1)菌株的筛选鉴定及降解条件优化

【目的】从分离源中筛选得到黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))高降解率的菌株并进行鉴定,优化菌株降解AFB 1的条件。【方法】以青贮饲料、泡菜液及腌酸菜为分离源,以香豆素为唯一碳源的培养基进行菌株初筛。采用高效液相色谱法检测AFB_(1)含量,以高AFB_(1)降解率进行复筛,对所得菌株进行鉴定,确定菌株名称。以AFB_(1)降解率为指标,探明发酵时间、初始pH、接种量及AFB_(1)浓度对菌株降解AFB_(1)的影响,通过正交试验进行降解条件优化。【结果】初筛共筛选出16株可以利用香豆素的菌株,复筛时QC7有最高降解率,为86.00%,经鉴定为空气芽孢杆菌(Bacillus aerius)。当AFB_(1)质量浓度为0.2μg/mL时,其最优降解条件为发酵时间72 h、初始pH 6.5、接种量5%。最高降解率为89.41%。【结论】筛选得到了对AFB_(1)有较佳降解能力的菌株,通过条件优化,提高了菌株对AFB_(1)的降解率,为后续降解机制探究提供了基础。