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鸡新城疫病毒和禽肺炎病毒二重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:2
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作者 谢志勤 谢芝勋 +11 位作者 邓显文 谢丽基 范晴 罗思思 黄莉 黄娇玲 张艳芳 王盛 刘加波 庞耀珊 梁亮 冯务玲 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期546-551,共6页
【目的】建立一次性可同时扩增鉴别鸡新城疫病毒(NDV)和禽肺炎病毒(APV)的二重RT-PCR,为有效防控鸡新城疫和禽肺炎病毒病提供技术支持。【方法】根据Gen Bank已发表NDV的F基因序列(Gen Bank登录号JX840454)和APV的F基因序列(Gene Bank... 【目的】建立一次性可同时扩增鉴别鸡新城疫病毒(NDV)和禽肺炎病毒(APV)的二重RT-PCR,为有效防控鸡新城疫和禽肺炎病毒病提供技术支持。【方法】根据Gen Bank已发表NDV的F基因序列(Gen Bank登录号JX840454)和APV的F基因序列(Gene Bank登录号AF187154)分别设计2对特异性引物,应用这2对引物建立可同时检测鉴别NDV和APV的二重RT-PCR,对扩增条件进行优化,并通过特异性试验、敏感性试验和临床样品检测等验证其实用性。【结果】优化后的二重RT-PCR可特异性扩增出参试NDV毒株(La Sota株、F48E9株、I株)及APV/MN-10毒株的目的条带,其大小分别为247和424 bp,而其他对照参试毒株在247和424 bp处均无特异条带出现。二重RT-PCR针对NDV和APV的最低检出限均为10 pg的RNA。应用建立的二重RT-PCR对132份从广西采集的病鸡样品进行检测,结果得到NDV阳性样品26份、APV阳性样品2份,与血清学方法的鉴定结果一致。随机选取的2份NDV阳性PCR产物与NDV(Gen Bank登录号JX840454)的F基因序列一致,同源性达100%;2份APV阳性PCR产物与APV(Gen Bank登录号AF187154)的F基因序列也完全一致,同源性达100%。【结论】针对NDV和APV建立的二重RT-PCR具有特异性好、灵敏度高、简便快速的特点,可用于临床快速鉴别诊断,为有效防控鸡新城疫和禽肺炎病毒病提供了技术支持。 展开更多
关键词 鸡新城疫病毒(NDV) 禽肺炎病毒(apv) 二重RT-PCR 检测
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H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒二重RT-PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 谢志勤 谢芝勋 +11 位作者 范晴 邓显文 谢丽基 罗思思 黄莉 黄娇玲 张艳芳 王盛 张民秀 奉彬 刘加波 庞耀珊 《动物医学进展》 北大核心 2016年第12期7-12,共6页
根据GenBank中H9亚型禽流感病毒HA基因和禽肺病毒F基因的保守序列,通过Blast进行比对,在各自保守的基因序列中分别设计了两对特异性扩增引物,引物扩增的片段大小分别为569bp和424bp,应用这两对引物建立了H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒的二... 根据GenBank中H9亚型禽流感病毒HA基因和禽肺病毒F基因的保守序列,通过Blast进行比对,在各自保守的基因序列中分别设计了两对特异性扩增引物,引物扩增的片段大小分别为569bp和424bp,应用这两对引物建立了H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒的二重RT-PCR检测方法,对建立的方法进行了特异性试验、敏感性试验和临床样品验证。对检测为阳性的样品进行克隆和序列分析,以验证本方法的准确性。特异性试验结果表明,所有参试的H9亚型禽流感病毒都能扩增出大小为569bp的片段,参试的禽肺病毒毒株扩增出424bp的片段,没有其他条带出现,而对照的参试毒株在569bp和424bp处没有任何条带;敏感性试验结果表明,本试验建立的方法能检测到10pg的H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒RNA模板。应用本试验建立的方法对广西采集的病鸡样品132份进行检测,H9亚型禽流感病毒阳性的样品有6份,禽肺病毒阳性的样品2份;随机各挑取2份H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒阳性PCR产物进行克隆和序列分析,经比对分析,2份H9亚型禽流感病毒阳性PCR产物与H9亚型禽流感病毒(No.JF715045.1)100%同源,2份禽肺病毒阳性PCR产物与禽肺病毒株(No.AF187154)100%同源。本试验建立的H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒二重RT-PCR检测方法具有特异、敏感、快速的特点,可以用于临床快速准确检测H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒。 展开更多
关键词 H9亚型禽流感病毒 禽肺病毒 二重反转录-聚合酶链反应 检测
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禽肺病毒病
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作者 郭志宏 《畜牧兽医杂志》 2003年第1期12-13,共2页
从病原学、流行病学、临床症状、病理变化方面对禽肺病毒病进行了详尽的分析和  论述 ,并提出了诊断和防治应注意的问题。
关键词 肺病毒病 肺病毒 鼻气管炎 肿头综合症 流行病学 火鸡 症状 病理变化 诊断 防治
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环介导等温可视扩增(LAMP)检测禽肺炎病毒方法的建立 被引量:4
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作者 谢志勤 谢芝勋 +5 位作者 邓显文 谢丽基 庞耀珊 刘加波 范晴 罗思思 《中国动物检疫》 CAS 2013年第3期48-51,共4页
建立一种快速简单检测禽肺炎病毒的方法。根据已发表的禽肺炎病毒的F基因序列,设计并合成6条特异扩增禽肺炎病毒F基因片段的引物,通过条件优化,成功建立了针对禽肺炎病毒的环介导等温扩增(LAMP)检测法,测定其特异性和敏感性,并对采集的... 建立一种快速简单检测禽肺炎病毒的方法。根据已发表的禽肺炎病毒的F基因序列,设计并合成6条特异扩增禽肺炎病毒F基因片段的引物,通过条件优化,成功建立了针对禽肺炎病毒的环介导等温扩增(LAMP)检测法,测定其特异性和敏感性,并对采集的禽临床样品的DNA分别进行了检测。结果表明该法只检出禽肺炎病毒;敏感性扩增结果表明,Lamp检测禽肺炎病毒为100fg的RNA模板。该LAMP方法有简便、快速和特异性高的优点,可用于临床上对禽肺炎病毒的快速检测。 展开更多
关键词 禽肺炎病毒 环介导等温扩增(LAMP) 检测
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禽肺炎病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:3
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作者 谢志勤 谢芝勋 +5 位作者 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢丽基 范晴 罗思思 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第10期1-6,共6页
根据C亚型禽肺炎病毒F基因序列,设计了一对针对C亚型禽肺炎病毒的特异性引物,应用该引物建立了SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测C亚型禽肺炎病毒的方法,并对建立的方法进行特异性、敏感性测定和临床样品检验。经检验该方法能特异性... 根据C亚型禽肺炎病毒F基因序列,设计了一对针对C亚型禽肺炎病毒的特异性引物,应用该引物建立了SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测C亚型禽肺炎病毒的方法,并对建立的方法进行特异性、敏感性测定和临床样品检验。经检验该方法能特异性地鉴别检测禽肺炎病毒,特异性好;敏感性可检测到10个拷贝的禽肺炎病毒质粒DNA模板;对收集的54份鸡肺病料样品进行检测,没有检测到C亚型禽肺炎病毒阳性病料。建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法检测C亚型禽肺炎病毒具有特异、敏感、快速、定量等优点,用该方法检测证实,采集的临床样品中还没有C亚型禽肺炎病毒的存在。 展开更多
关键词 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量RT-PCR 检测 禽肺炎病毒
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鸡新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒和禽肺炎病毒三重RT-PCR检测方法的建立 被引量:5
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作者 谢志勤 谢芝勋 +9 位作者 邓显文 谢丽基 范晴 罗思思 黄莉 黄娇玲 张艳芳 王盛 奉彬 刘加波 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第2期6-9,13,共5页
本研究建立三重RT-PCR快速检测鉴别鸡新城疫病毒(NDV)、H9亚型禽流感病毒(AIV)和禽肺炎病毒(APV)的方法。根据Gen Bank中H9亚型AIV HA基因和鸡NDV以及APV F基因的保守序列分别设计合成了三对特异性扩增引物,通过优化反应条件建立了三重R... 本研究建立三重RT-PCR快速检测鉴别鸡新城疫病毒(NDV)、H9亚型禽流感病毒(AIV)和禽肺炎病毒(APV)的方法。根据Gen Bank中H9亚型AIV HA基因和鸡NDV以及APV F基因的保守序列分别设计合成了三对特异性扩增引物,通过优化反应条件建立了三重RT-PCR检测鉴别鸡NDV、H9亚型AIV和APV的方法。对该方法进行特异性、敏感性和临床样品检测。特异性试验结果显示,所有参试的NDV、H9亚型AIV、APV分别扩增出大小为247 bp、569 bp和424 bp的片段,而对照的其他毒株不扩增;敏感性试验结果表明,本试验建立的方法能检测到10 pg的各自RNA模板。检测临床样品132份,NDV阳性26份,H9亚型AIV阳性6份,APV阳性2份,结果与病毒分离结果一致。PCR阳性产物测序结果与各自毒株序列100%同源。表明本试验建立的三重RT-PCR检测鉴别鸡NDV、H9亚型AIV和APV方法具有特异、敏感、快速的特点,可用于临床快速、准确的鉴别检测。 展开更多
关键词 鸡新城疫病毒 H9亚型禽流感病毒 禽肺炎病毒 三重RT-PCR 检测
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Taqman探针荧光定量RT-PCR检测禽肺炎病毒方法的建立 被引量:1
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作者 谢志勤 谢芝勋 +7 位作者 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢丽基 范晴 罗思思 曾婷婷 黄娇玲 《中国家禽》 北大核心 2014年第19期14-19,共6页
本试验旨在研究建立Taqman探针实时荧光定量RT-PCR检测禽肺炎病毒的方法。根据C亚型禽肺炎病毒F基因序列,设计了1对针对C亚型禽肺炎病毒的特异性引物和1条用荧光基团标记的Taqman探针,建立实时荧光定量RT-PCR检测C亚型禽肺炎病毒的方法... 本试验旨在研究建立Taqman探针实时荧光定量RT-PCR检测禽肺炎病毒的方法。根据C亚型禽肺炎病毒F基因序列,设计了1对针对C亚型禽肺炎病毒的特异性引物和1条用荧光基团标记的Taqman探针,建立实时荧光定量RT-PCR检测C亚型禽肺炎病毒的方法,并对建立的方法进行敏感性、特异性测定和临床样品检验。结果显示该方法能特异性地鉴别检测禽肺炎病毒,特异性好;敏感性可检测到10个拷贝的禽肺炎病毒质粒DNA模板;对收集的54份鸡肺病料样品进行检测,没有检测到C亚型禽肺炎病毒阳性病料,与常规RT-PCR检测和病毒分离结果吻合。本研究建立的实时荧光定量RT-PCR方法检测C亚型禽肺炎病毒具有特异、敏感、快速、定量等优点,该方法适合用于检测鸡中C亚型禽肺炎病毒的存在。 展开更多
关键词 TAQMAN探针 荧光定量RT-PCR 检测 禽肺炎病毒
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