人胰岛素基因在幼仓鼠肾细胞中的表达及降血糖实验研究

目的 :构建并筛选人胰岛素基因真核高效表达载体。方法 :常规法构建重组质粒pEF1α ImINS。将重组质粒pEF1α ImINS和胰岛素其他 3个重组质粒分别转染幼仓鼠肾 (BHK )细胞 ,经G418筛选 ,阳性克隆传至 2 0代 ,分别用放射免疫和免疫组化技术分析胰岛素和 (或 )胰岛素原在BHK细胞中表达的情况。并用重组质粒pEF1α ImINS转染BHK细胞的阳性克隆 2 0代的PBS细胞悬浮液 (5× 10 7个 /只 )及其培养上清 (0 .5ml/只 )对昆明小鼠行腹腔注射 ,通过对注射前后小鼠血糖值测定 ,分析转基因产物降血糖的生物学效应。结果 :胰岛素的表达量最高为 7.984μIU/ml ,胰岛素表达水平的灰度值在BHK细胞质中为 177.5± 15.10 ,细胞核中为 150 .3±2 1.43 ;昆明小鼠注射 pEF1α ImINS转染BHK克隆细胞株的悬浮液后 6h与注射前 2 4h血糖值比较 ,差异极显著 (P <0 .0 1)。结论 :BHK细胞中重组质粒 pEF1α ImINS是胰岛素表达量最高的质粒 ;pEF1α ImINS转染的克隆细胞株在小鼠体内有胰岛素表达 。