新的候选抑癌基因Bach2在胰腺导管腺癌中的表达

目的探讨Bach2在胰腺癌中的表达及意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测胰腺癌(37例)、癌旁正常组织(29例)、人胰腺癌细胞株(3株)和正常导管上皮细胞株中Bach2的表达,采用蛋白质免疫印迹法和免疫组织化学(IHC)方法分别检测胰腺癌冰冻组织(18例)和石蜡包埋组织(15例)中Bach2的表达。结果 Bach2在胰腺癌表达明显下降(6.264±2.148)(P<0.05),在人胰腺癌细胞株BXPC-3、PANC-1和SWl990中表达明显下降(2.705±0.473)、(2.481±0.381)和(4.629±0.592)(P<0.01);胰腺癌组织和细胞株中Bach2蛋白质表达相对下降;胰腺癌神经侵犯者癌组织中Bach2表达更低(4.891±2.664)(P<0.05)。结论 Bach2在胰腺癌组织和细胞株中表达下降,可能与胰腺癌发生和神经侵犯相关。

MiR30b与小鼠Bach2相互作用的研究

目的研究B细胞末端分化过程中miR30b新的作用靶点。方法经生物信息学分析,利用特异性引物以及定点突变引物从小鼠c DNA中分别扩增大小为530、361和189bp三个目的片段,胶回收并对361和189bp进行拼接,获得野生型、突变型小鼠Bach2 mRNA特异性片段,分别与pmir GLO载体连接,构建野生型、突变型重组荧光素酶报告基因质粒pmir GLO-m Bach2、pmir GLO-m Bach2 mt;与miR30b共转染至HEK293 T细胞,分析其荧光素酶活性。结果重组荧光素酶报告基因质粒经双酶切及测序证实构建正确;共转染后,与pmir GLO+miR30b组相比,pmir GLO-m Bach2+miR30b组的荧光素酶活性明显降低(P<0.05),而pmir GLO-m Bach2 mt+miR30b组的荧光素酶活性则无明显改变(P>0.05)。结论小鼠Bach2 mRNA是miR30b的靶点。

bach1和bach2在斑马鱼早期发育中的表达分析

目的研究bach1和bach2基因在斑马鱼早期发育中的表达规律。方法以不同发育时期的野生型斑马鱼胚胎和幼体为材料，采用地高辛标记的反义RNA探针以及整体原位杂交技术确定两个基因在斑马鱼早期发育中的表达特征。结果在斑马鱼早期胚胎发育过程中bach1，和bach2基因在整个胚胎都有表达，48hpf后其表达区域则主要集中到头部和内脏。结论bach1和bach2基因可能在斑马鱼的早期发育以及脑部和肝脏形成中发挥作用。

转录因子Bach2的构建及表达

目的构建高效表达人Bach2基因的慢病毒重组质粒,并探索其在免疫疾病中的机制。方法取健康人外周血分离单个核细胞并提取总RNA逆转录为c DNA,扩增Bach2基因CDS序列,插入p LVX-IRES-Zs Green1慢病毒质粒。磷酸钙共转染法包装慢病毒,感染人HEK293T细胞。空白质粒感染HEK293T细胞作为对照。免疫印迹分析空白质粒和过表达质粒HEK293T细胞中Bach2基因表达。结果 PCR结果显示,Bach2成功插进p LVX-IRES-Zs Green1质粒中,real-time PCR以及Western blot证实,Bach2基因成功在HEK293T细胞中高效表达。结论成功构建高效表达Bach2基因的慢病毒穿梭质粒,并成功在HEK293T细胞表达。