边鸡源乳酸菌饲喂雏鸡免疫效果初探

研究将边鸡肠道中分离出的3株优势菌株混合后,以不同剂量(1.0×10^(8)、1.0×10^(9)、1.0×10^(10)cfu/mL)添加到日粮中饲喂,并与添加抗生素的效果进行比较,研究乳酸菌对雏鸡体质量、免疫器官指数、免疫球蛋白含量、抗氧化能力和抗体水平的影响。结果表明,添加混合乳酸菌的试验组雏鸡体质量显著高于对照组,但中剂量组与抗生素组体质量差异不显著。试验组的脾脏、胸腺和法氏囊指数均高于对照组,且差异显著,中剂量组与抗生素组对比差异不显著,试验组的血清免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量均显著高于对照组,但中剂量组与抗生素组差异不显著;对照组丙二醛(MDA)含量显著高于抗生素组和中、高剂量组,抗生素组和中、高剂量组超氧化物歧化酶(SOD)含量均显著高于混合乳酸菌低剂量组和对照组,各组的谷胱甘肽过氧化物酶含量(GSH-Px)和总抗氧化能力(T-AOC)均与对照组存在显著差异,试验组和对照组的NDV抗体水平在2次免疫后均有显著上升。添加混合乳酸菌对雏鸡的体质量、免疫功能、抗氧化能力和抗体水平均具有促进作用,可代替抗生素添加且最适添加量为1.0×10^(9)cfu/mL。

广东三个柑橘品种不同生育期的黄龙病菌含量动态变化研究

采用实时荧光定量PCR检测了广东省3个柑橘品种在不同生育期的黄龙病菌含量,探索其动态变化规律,为病害防控提供依据。结果表明,第一年,3个品种春梢期的黄龙病菌平均含量分别为3.52×10~5、4.76×10~5、1.03×10~5拷贝/g,显著低于相应夏梢期(5.50×10~5、9.48×10~5、2.50×10~5拷贝/g)和秋梢期(5.32×10~5、9.84×10~5、2.59×10~5拷贝/g);夏梢期与秋梢期含量又显著低于相应冬梢期(21.60×10~5、17.65×10~5、6.86×10~5拷贝/g)及果实成熟期(14.57×10~5、16.45×10~5、7.96×10~5拷贝/g);砂糖橘全年黄龙病菌含量与贡柑无显著差异,但均显著高于柠檬;第二年的数据与第一年类似,但砂糖橘和贡柑在多个生育期的含菌量比上年均显著升高,而柠檬所有生育期菌量均无显著变化。结果显示:柑橘病树内的黄龙病菌含量在春梢期最低,夏梢、秋梢期次之,冬梢期及果实成熟期最高;‘柠檬’相对耐病,体现为含菌量相对较低、增速较慢。

产肠毒素大肠杆菌(ETEC)的两种抗原制品对蛋鸡免疫原性的对比研究

目的采用产肠毒素大肠杆菌(ETEC)K88标准菌株,研究其不同浓度的菌毛及全菌两种抗原对蛋鸡的免疫原性,并确定最佳的抗原浓度。方法用SDS-PAGE鉴定菌毛蛋白的纯度,通过间接ELISA法检测特异性卵黄抗体(IgY)的效价。结果菌毛蛋白对蛋鸡的免疫原性优于全菌;纯化的菌毛蛋白对蛋鸡的免疫原性优于粗菌毛蛋白,其诱导的抗体效价最高可达1∶480000,初免84天后未见有明显的下降趋势;菌毛蛋白最佳浓度为2mg/ml,全菌最佳浓度为1010cfu/ml。结论本研究为制备高效价特异性IgY抗体奠定了基础。

抗大肠杆菌O157：H7的卵黄特异性IgY的研究

以大肠杆菌O157:H7为抗原免疫产蛋母鸡,从鸡卵黄中提取免疫球蛋白,建立抗大肠杆菌O157:H7的特异性IgY的效价检测方法,并研究母鸡的免疫应答性,以及抗体的提取方法和体外抑菌效果。研究结果表明,初次免疫后第6d,在卵黄中可以检测到抗大肠杆菌O157:H7IgY,效价为1:7200;经加强免疫后效价迅速上升,至第44d达到最高效价1:230400;免疫后360d,效价仍维持在1:7200。用水稀释法、硫酸铵分级盐析和SephadexG-25凝胶过滤以提取IgY,提纯后IgY的效价是之前的4倍。SDS-PAGE鉴定抗体的纯度,电泳图谱中出现抗体的轻链和重链两条带。体外抑菌实验表明,IgY能抑制大肠杆菌O157:H7的生长。

奶山羊乳房炎二联灭活疫苗的制备及其免疫效果评估

为评估自制乳房炎灭活疫苗的免疫效果,以乳房炎山羊乳中分离出的金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌为材料,经甲醛灭活后与铝胶盐-转移因子佐剂混合,制成奶山羊乳房炎二联灭活疫苗。对泌乳期奶山羊进行2次间隔为15 d的颈部皮下注射接种,每次剂量均为2 mL。在二免后第0、15、35、60天检测乳清和血清中大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌的抗体效价,并统计隐性乳房炎的检出率。结果显示,两次免疫后奶山羊乳清和血清中的抗体效价均显著升高(P<0.05),在二免后第15天达到峰值,约为对照组抗体效价的32倍;隐性乳房炎检出率显著下降(P<0.01),由免疫前的50%,在二免后第35天下降到了6.25%。结果表明,制备的奶山羊乳房炎二联灭活疫苗不仅能刺激免疫羊产生较为强烈的体液免疫应答,而且对隐性乳房炎有一定的治疗效果。

鲤细胞因子多克隆抗体的制备及检测

为从蛋白质水平研究细胞因子在鲤体内免疫应答过程中的合成变化,本研究采用PCR技术克隆TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-10和TGF-β基因含有部分抗原决定簇的片段,引入双酶切位点Bam HⅠ和HindⅢ后连接至p ET-32a/21a,构建相应的表达载体,制备多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价,并以此作为实验工具,检测经嗜水气单胞菌感染后鲤血清中炎性细胞因子的合成变化。结果显示,基因TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-10和TGF-β融合蛋白分子量分别约为31.8、31.7、35.3、32.5、18.0和33.6 ku;抗体效价达到2.4×106;在病原菌感染后的不同阶段,促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12和抗炎细胞因子IL-10、TGF-β呈现出不同的合成变化。研究表明,制备的抗体具有较高的效价、亲和力和特异性,可用于鲤细胞因子的定量研究,该抗体的获得为鲤免疫应答与细胞因子合成的系统研究奠定了基础。同时,获取的鲤细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-10和TGF-β的抗体亦可用于其他鱼类细胞因子蛋白质水平的定量研究。

抗痢疾志贺氏菌的特异性IgY的研究

以痢疾志贺氏菌为抗原免疫产蛋母鸡,从鸡卵黄中提取免疫球蛋白,建立抗痢疾志贺氏菌的特异性IgY的效价检测方法,并研究母鸡的免疫应答性以及抗体的提取方法和体外抑菌效果。研究结果表明:用108cfu/mL和109cfu/mL剂量的抗原分别免疫的鸡的卵黄中,于初次免疫后的第12天出现抗痢疾志贺氏菌IgY,两组效价均为1∶3600。经加强免疫后效价迅速上升,至第48天低剂量免疫组达到最高效价1∶28800;第60天高剂量免疫组达到最高效价1∶57600。低剂量免疫组的效价维持了210d,高剂量免疫组的效价在免疫后360d时仍维持在1∶7200水平。用水稀释法、硫酸铵溶液分级盐析、SephadexG-25凝胶过滤以提取IgY,提纯后IgY的效价翻倍。SDS-PAGE鉴定抗体的纯度,电泳图谱中出现抗体的轻链和重链两条带。体外抑菌实验表明,IgY能抑制痢疾志贺氏菌的生长。

板蓝根类制剂抑菌生物效价测定方法的研究

目的：研究板蓝根微生物检定法的适用剂量范围,建立其对敏感菌株的剂量效应曲线,并且根据板蓝根量效曲线测定不同厂家板蓝根片的效价,从而建立板蓝根和板蓝根片的质量标准。方法：采用菌敏试验（最小抑菌浓度和最小杀菌浓度的测定）考察板蓝根水提液对5种标准菌株（伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、福氏志贺氏菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌）的抑菌性。利用不同浓度板蓝根提取液对敏感菌的抑菌圈直径大小和浓度的关系建立标准曲线,构建适用于板蓝根的生物检定法,通过测定不同厂家产地的板蓝根和板蓝根片的抑菌圈直径,代入量效曲线计算它们的生物效价。结果：抑菌实验表明,板蓝根对伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、福氏志贺氏菌、大肠杆菌及枯草芽孢杆菌等多种菌敏感,其中枯草芽孢杆菌的抑菌圈边缘清晰,敏感度较高。当板蓝根的质量浓度在0.029～0.136 g·mL^-1范围内时,对数浓度与反应效应呈线性关系,且相关性好（r=0.991 2）。板蓝根在高、中、低浓度的回收率在90.0%～110.0%范围内,可信限率均在10%以内,RSD为3.7%。结论：采用微生物检定法建立板蓝根、板蓝根片的质量控制方法是可行的,它可以有效配合传统检验方法对板蓝根药材及其制剂进行质量监控。

乳酸菌发酵上清液成分分析

目的 乳酸菌发酵上清液为益生菌生产企业的废弃物,为了开发其在食品和饲料中的应用,对其进行初步的成分分析。方法 采用本公司乳酸菌生产离心上清液为材料,用化学分析法测定其中的总固形物、总糖、总蛋白质和总酸等成分含量;采用抑菌圈法检测以大肠埃希菌为革兰阴性菌指示菌、金黄色葡萄球菌为革兰阳性菌指示菌的抑菌活性,并测定以大肠埃希菌为革兰阴性菌指示菌的抑菌效价;采用点样培养法测定菌种分泌淀粉酶、蛋白酶等消化酶的活力。结果 乳酸菌发酵上清液分别含总固形物4.96%~7.04%、总糖0.11%~0.60%、总蛋白质1.67%~2.45%、总酸(以乳酸计)2.41~7.12 g/L;其对革兰阴性菌、革兰阳性菌都具有一定的抑制作用,抑菌效价范围为374.87~878.05μ/g;测得菌种分泌淀粉酶活力(H/C)范围为4.33~8.67。结论 初步揭示了乳酸菌发酵上清液中含有一定量的营养成分及抑菌活性、抑菌效价和淀粉酶活力,为开发其在食品和饲料中的应用提供了依据。