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Protective effects of bactericidal/permeability-increasing protein onrats after endotoxic shock
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作者 蒋建新 朱佩芳 +3 位作者 王正国 刘大维 何娅妮 谢国旗 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 1999年第3期180-183,共4页
objective: To investigate the protective effects of bactericidal/permeability-increa protein (BPIP) on rats after endotoxic shock as to provide more experimental evidence for studies on its clinical use. Methods:E. co... objective: To investigate the protective effects of bactericidal/permeability-increa protein (BPIP) on rats after endotoxic shock as to provide more experimental evidence for studies on its clinical use. Methods:E. coli 026:B6 LPS was injected at a dosage of 12. 5 mg/kg through the artery to reproduce endo toxic shock. BPIP at a dosage of 5 mg/kg (BPIP-treated group) or equal volume of normal saline (control group) were injected immediately after the injection of LPS. Results: ①Survival time of the shocked animals was prolonged and the 24 h survival rate was also significantly increased in BPIP-treated group as compared with the control group. ②The mean arterial pressure, left intraventricular systolic pressure, isovolemic ven tricular pressure and ±dp/dtmax. were significantly higher in BPIP-treated group than in control group. ③ Plasma levels of glutamic-pyruvic transaminase and urea nitrogen were markedly higher but those of endotox in and TNFα were lower in BPIP-treated group than in control group. Conclusion: BPIP can exert significant protective effects on cardiac, hepatic and renal functions in rats after endotoxic shock, indicating that BPIP might be a good choice in treatment of sepsis/septic shock. 展开更多
关键词 ENDOTOXIC shock bactericidal/permeability-increasing protein PROTECTION
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Protective effects of bactericidal/permeability-increasing protein against hemorrhagic shock and its mechanism
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作者 蒋建新 朱佩芳 +3 位作者 王正国 陈惠孙 田昆化 刁有芳 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 1998年第2期143-145,149,共4页
Effects of bactericidal/permeability-increa protein(BPI, 1. 5 and 3. 5 rug/kg iv at the beginning of shock and resuscitation respectively) on the outcome of hemorrhagic shock was investigated in rats. Itwas found that... Effects of bactericidal/permeability-increa protein(BPI, 1. 5 and 3. 5 rug/kg iv at the beginning of shock and resuscitation respectively) on the outcome of hemorrhagic shock was investigated in rats. Itwas found that BPI administration could improve hepatic and renal functions after hemorrhagic shock, andenhance the survival rate of the rats with shock (BPI group: 81 % vs physiological saline group: 44 %, P <0.05). In BPI group, the plasma endotoxin level was not significantly changed (0. 20± 0. 04 at the end of resuscitation vs 0. 24± 0. 05 U/ml before shock). Tumor necrosis factor. and interleukin-6 levels in BPI group, although higher after shock and resuscitation, were significantly lower than those in physiologia saline group.It is suggested that BPI exerts a protective effects on rats with hernorrhagic shock, which might be due to itsaction against hemorrhage-induced endotoxin translocation and its inhibition of cytokine responses in shock, 展开更多
关键词 hernorrhagic/shock bactericidal/permeability-increa protein ENDOTOXIN tumor NECROSIS factor α INTERLEUKIN-6 rat
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IgG Fab-BPI融合蛋白真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达 被引量:7
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作者 马越云 马文煜 +3 位作者 于文彬 尹文 苏明权 丁振若 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期470-472,共3页
目的构建抗抗LPSFab-BPI真核表达载体,并在CHO细胞中表达。方法通过RT-PCR,获得广谱抗LPSmAbC3A2IgG的Fd和完整轻链LCcDNA片段。在分别构建了pcDNA3-Fd和pcDNA3-LC表达载体的基础上,将包括BPIN端抗LPS活性中心的180bpDNA片段,通过一段... 目的构建抗抗LPSFab-BPI真核表达载体,并在CHO细胞中表达。方法通过RT-PCR,获得广谱抗LPSmAbC3A2IgG的Fd和完整轻链LCcDNA片段。在分别构建了pcDNA3-Fd和pcDNA3-LC表达载体的基础上,将包括BPIN端抗LPS活性中心的180bpDNA片段,通过一段长16个氨基酸的linker连接于上述Fab表达载体中Fd基因的下游,构建成Fab-BPI融合蛋白FB真核表达载体。将pcDNA3-LC质粒中包括hCMV启动子、LC和BGHpolyA等序列在内的片段,插入到pcDNA3-Fd中hCMV启动子上游,从而构建成单质粒的Fab-BPI表达载体pcD-NA3-FB,转染真核细胞。结果序列测定表明,重组质粒构建正确。pcDNA3-FB转染CHO细胞后,经ELISA、免疫荧光和mR-NA鉴定表达成功,免疫印迹试验显示,与抗κ轻链和抗BPI抗体反应的蛋白区带的Mr均为60000左右。交叉反应试验证明,Fab和FB与多种革兰氏阴性菌的LPS有交叉反应性。结论成功地在CHO细胞中表达出了抗LPSFab-BPIFB融合蛋白。FB作为融合蛋白,集广泛交叉反应性和强大中和活性于一身,有可能成为更适于临床应用的新的抗LPS免疫制剂。 展开更多
关键词 LPS FAB 杀菌通透性增强蛋白 真核表达 IGG
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重组BPI_(23)-Fcγ1融合蛋白在CHO细胞中的表达 被引量:6
4
作者 徐俊杰 徐静 +1 位作者 童贻刚 王海涛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期587-589,共3页
The fusion gene of BPI 23 and human Fcγ1 was obtained by PCR method,and the expression plasmid was constructed to express recombinant BPI 23 \|Fcγ1 fusion protein in CHO cells.After transfection with the plasmid and... The fusion gene of BPI 23 and human Fcγ1 was obtained by PCR method,and the expression plasmid was constructed to express recombinant BPI 23 \|Fcγ1 fusion protein in CHO cells.After transfection with the plasmid and selection by methotrexate,the cell lines expressing the fusion protein were obtained.The recombinant protein was purified using cation\|exchange chromatography and its bioactivity was proved with bactericidal assays. 展开更多
关键词 杀菌/通透性增加蛋白 BPI23-Fcγ1融合蛋白 表达 CHO细胞 重组
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杀菌/通透性增加蛋白N端片段在原核细胞中的表达及其临床应用的初步探讨 被引量:4
5
作者 周宇麒 张天托 +2 位作者 胡波 李林 黄静 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期385-389,共5页
目的:构建编码杀菌/通透性增加蛋白(BPI)N端片段基因原核表达载体,并在大肠杆菌中表达重组蛋白。方法:采用RT PCR技术,从人外周血中性粒细胞的总RNA中扩增BPI蛋白N端片段cDNA编码区基因,DNA序列分析鉴定;将测序证实的BPI蛋白N端片段编... 目的:构建编码杀菌/通透性增加蛋白(BPI)N端片段基因原核表达载体,并在大肠杆菌中表达重组蛋白。方法:采用RT PCR技术,从人外周血中性粒细胞的总RNA中扩增BPI蛋白N端片段cDNA编码区基因,DNA序列分析鉴定;将测序证实的BPI蛋白N端片段编码区基因PCR产物直接克隆于原核表达载体pBAD/Thio TOPO中,再次测序鉴定;通过在大肠杆菌中以L 阿拉伯糖进行诱导表达,然后以SDS PAGE、Westernblot对表达的重组蛋白进行分析。重组蛋白经初步纯化处理后,进行生物学活性检测。结果:RT PCR扩增出一个835bp的DNA片段,DNA测序表明为所需目的基因。限制性内切酶酶切和DNA序列分析表明,BPI蛋白N端片段正确克隆到大肠杆菌表达载体pBAD/Thio TOPO中,SDS PAGE和Westerblot结果表明在大肠杆菌中成功表达了BPI蛋白N端片段。对该蛋白进行初步活性测定显示其可与BPI单克隆抗体结合并具有杀灭耐药铜绿假单胞菌的活性。结论:成功构建了BPI蛋白N端片段编码区基因原核表达载体,并在大肠杆菌中进行了表达。 展开更多
关键词 杀菌作用 通透性增加蛋白 基因克隆 基因表达 中性粒细胞
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鉴别诊断临床急性肺炎病原体感染的血清标志物研究 被引量:12
6
作者 刘萌 窦云鹏 +5 位作者 谷丽 吕喆 王一民 刘颖梅 安云庆 曹彬 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第5期636-640,共5页
目的检测急性肺炎患者血清相关生物标志物含量,为建立一种快速鉴别诊断临床急性支原体肺炎、病毒性肺炎、细菌性肺炎的免疫胶体金检测法提供实验依据。方法以临床病原学诊断明确的急性支原体肺炎,病毒性肺炎,细菌性肺炎患者和正常人血... 目的检测急性肺炎患者血清相关生物标志物含量,为建立一种快速鉴别诊断临床急性支原体肺炎、病毒性肺炎、细菌性肺炎的免疫胶体金检测法提供实验依据。方法以临床病原学诊断明确的急性支原体肺炎,病毒性肺炎,细菌性肺炎患者和正常人血清为检测样品,采用血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)/杀菌渗透增强蛋白(bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测试剂盒检测上述血清中相关生物标志物含量。结果 (1)正常人群血清78份,急性支原体肺炎患者血清46份,病毒性肺炎和细菌性肺炎患者血清42份,其中病毒感者患者血清35份,细菌感染患者血清7份;(2)正常人群血清PDGF最大值<6 000 pg/m L;血清BPI最大值<80 ng/m L;(3)以血清PDGF值6 000 pg/m L作为鉴别诊断急性支原体感染的基线值,支原体感染患者阳性检出率为93.47%(43/46);病毒和细菌感染患者出现支原体感染的假阳性率为7.14%(3/42);(4)以血清BPI值80 ng/m L作为鉴别诊断急性细菌感染的基线值,细菌感染患者阳性检出率为85.71%(6/7);病毒感染患者出现细菌感染的假阳性率为3.22%(1/31)。结论以血清PDGF6 000 pg/m L和BPI 80 ng/m L作为鉴别诊断不同病原体感染的基线值,对临床急性支原体肺炎、病毒性肺炎、细菌性肺炎鉴别诊断具有一定意义。 展开更多
关键词 肺炎 鉴别诊断 血小板衍生生长因子 杀菌渗透增强蛋白
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BPI_(m23)重组抗菌蛋白在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达 被引量:3
7
作者 靖学芳 安云庆 杨贵贞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期374-378,共5页
目的 :采用巴斯德毕赤酵母表达系统表达分泌型功能性rBPIm2 3抗菌蛋白。方法 :利用构建的pUC1 8 synBPI4 1 4质粒和PBV2 2 0 BPIm4 2 0 质粒 ,按分子克隆方法构建pPICZα synBPIm6 0 0 重组表达载体 ;用线性化pPICZα synBPIm6 0 0 质... 目的 :采用巴斯德毕赤酵母表达系统表达分泌型功能性rBPIm2 3抗菌蛋白。方法 :利用构建的pUC1 8 synBPI4 1 4质粒和PBV2 2 0 BPIm4 2 0 质粒 ,按分子克隆方法构建pPICZα synBPIm6 0 0 重组表达载体 ;用线性化pPICZα synBPIm6 0 0 质粒电转化PichiapastorisGS1 1 5 ,筛选抗性转化子 ,进行PCR和Mut表型鉴定 ;用甲醇诱导目的蛋白rBPIm2 3的表达 ;用离子交换层析纯化rBPIm2 3,并进行SDS PAGE分析、Westernblot鉴定和用BCA法定量。结果 :①成功构建了pPICZα synBPIm6 0 0 重组表达载体 ;②获得稳定整合目的基因的GS1 1 5菌株 ;③表达产物相对分子量约为 2 3kD ,可与抗BPI抗体特异性结合 ;④培养上清液中目的蛋白表达量约为 2 9mg L。结论 :BPIm2 3重组抗菌蛋白在毕赤酵母GS1 1 5中得到分泌表达。 展开更多
关键词 杀菌/渗透增强蛋白 BPIm23重组抗菌蛋白 巴斯德毕赤酵母 分泌表达
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杀菌/通透性增加蛋白研究现状及应用前景 被引量:4
8
作者 李彦兵 桂祎 +3 位作者 李进涛 李作生 史宪伟 张以芳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第9期29-34,共6页
杀菌/通透性增加蛋白(BPI)是中性粒细胞内存在的一种碱性蛋白,是一个分子质量介于50-60 ku的阳性蛋白,它主要存在于人、牛、兔等哺乳动物多形核粒细胞(PN4NL)的嗜天青颗粒中及其表面,它能与革兰氏阴性菌脂多糖(LPS)结合,具有中和... 杀菌/通透性增加蛋白(BPI)是中性粒细胞内存在的一种碱性蛋白,是一个分子质量介于50-60 ku的阳性蛋白,它主要存在于人、牛、兔等哺乳动物多形核粒细胞(PN4NL)的嗜天青颗粒中及其表面,它能与革兰氏阴性菌脂多糖(LPS)结合,具有中和内毒素和杀灭细菌的作用,在革兰氏阴性菌感染的治疗方面有良好的应用前景,人类最初注意杀菌性/通透性增加蛋白是因其具有杀菌作用,但随后发现它还具有较强的颉颃内毒素的作用。近年来国外对其研究颇多,并逐渐发现其还具有很多其他功能,如抗真菌、杀灭寄生虫等作用,其被学者称为未来的“超级抗生素”。 展开更多
关键词 杀菌/通透性增加蛋白 内毒素 中性粒细胞
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BPI-BD3融合抗菌肽修饰C3H10T1/2细胞对小鼠感染创面愈合的影响 被引量:6
9
作者 张欣然 刘翠 +3 位作者 钱智勇 徐红梅 郭希民 郭红延 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期722-726,共5页
目的观察p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞对小鼠感染创面愈合的影响。方法使用重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞,并采用RT-PCR及Western blotting进行鉴定。取30只KM小鼠行直径1cm的全层皮肤缺损创面,并接种金黄色葡... 目的观察p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞对小鼠感染创面愈合的影响。方法使用重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞,并采用RT-PCR及Western blotting进行鉴定。取30只KM小鼠行直径1cm的全层皮肤缺损创面,并接种金黄色葡萄球菌制造感染创面。造模后,随机均分为3组每组10只,T组尾静脉注射p Adxsi-BPIBD3转染后的C3H10T1/2细胞,C组注射未转染的C3H10T1/2细胞,N组注射等量PBS。通过大体观察、痂下细菌计数、测定创面残留面积、HE染色等来评价BPI-BD3修饰的C3H10T1/2的促愈效果。结果与其余两组相比,T组痂下菌量较少(P<0.05),且T组愈合较快,7、14d时,创面残留面积与其余两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,与其余两组相比,T组炎症较轻、表皮生长较快。结论 BPI-BD3修饰的C3H10T1/2可以促进金黄色葡萄球菌所致的小鼠感染创面的愈合。 展开更多
关键词 C3H10T1/2细胞 Β防御素 杀菌/通透性增加蛋白 伤口感染
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杀菌/渗透性增强蛋白功能及应用前景 被引量:4
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作者 颜金鹏 王丽 +2 位作者 李善妮 邓丽明 韩旭 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期622-631,共10页
杀菌/通透性增强蛋白(BPI)是存在于中性粒细胞中的阳离子蛋白,约为55 kD.BPI能与革兰氏阴性菌外膜上的脂多糖结合,增加外膜对抗菌药的通透性,具有特异性杀灭革兰氏阴性菌及结合/中和内毒素的生物学功能,在革兰氏阴性菌感染的治疗方面有... 杀菌/通透性增强蛋白(BPI)是存在于中性粒细胞中的阳离子蛋白,约为55 kD.BPI能与革兰氏阴性菌外膜上的脂多糖结合,增加外膜对抗菌药的通透性,具有特异性杀灭革兰氏阴性菌及结合/中和内毒素的生物学功能,在革兰氏阴性菌感染的治疗方面有良好的发展前景.近年来,国内外对BPI研究颇多,并逐渐发现BPI还具有调理作用、抗真菌、抗原虫和抑制血管生成等许多功能,被学者称为未来的"超级抗生素".本文主要就BPI的结构、分布、生理功能、作用机理及临床研究方面的研究进展作一综述. 展开更多
关键词 杀菌/渗透性增强蛋白(BPI) 中性粒细胞 革兰氏阴性菌 内毒素
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pPICZα-synBPI_(m600)酵母表达载体的构建和鉴定 被引量:3
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作者 丛敏 靖学芳 +2 位作者 刘振龙 孙明洁 安云庆 《首都医科大学学报》 CAS 2004年第1期35-39,共5页
为使rBPIm2 3 重组抗菌蛋白在毕赤酵母表达系统中分泌表达 ,拟构建synBPIm60 0 酵母表达载体。以pUC18 synBPI41 4 质粒为模板扩增synBPI2 0 0 基因片段 ,经XhoI/EcoRI双酶切获得synBPI1 85bp基因片段 ;EcoRI/SalI双酶切PBV2 2 0 BPIm6... 为使rBPIm2 3 重组抗菌蛋白在毕赤酵母表达系统中分泌表达 ,拟构建synBPIm60 0 酵母表达载体。以pUC18 synBPI41 4 质粒为模板扩增synBPI2 0 0 基因片段 ,经XhoI/EcoRI双酶切获得synBPI1 85bp基因片段 ;EcoRI/SalI双酶切PBV2 2 0 BPIm60 0 质粒获得BPIm42 0 基因片段 ;将上述 2个基因片段连接后定向克隆到pPICZα酵母表达载体上。连接产物转化E .coliTOP 10F′ ,在含Zeocin的低盐LB固体培养基上筛选阳性转化子。阳性克隆菌经菌落PCR法鉴定、酶切分析和测序鉴定 ,结果与预期相符。提示 :成功构建了pPICZα synBPIm60 0 展开更多
关键词 pPICZα-synBPIm600酵母 表达载体 构建 鉴定 毕赤酵母
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酸性氧化电位水对铜绿假单胞菌的杀菌机制研究 被引量:9
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作者 赵凯丽 李武平 +2 位作者 张晓娜 王刚 庄玉晨 《中国感染控制杂志》 CAS 北大核心 2017年第1期41-45,共5页
目的探讨酸性氧化电位水(EOW)对铜绿假单胞菌的杀菌机制。方法以铜绿假单胞菌作为研究对象,从蛋白质渗漏,核酸和细胞膜钙离子通透性等方面对EOW的杀菌机制进行研究,同时以2%戊二醛作为阳性对照组,以生理盐水(NS)作为阴性对照组。结果以... 目的探讨酸性氧化电位水(EOW)对铜绿假单胞菌的杀菌机制。方法以铜绿假单胞菌作为研究对象,从蛋白质渗漏,核酸和细胞膜钙离子通透性等方面对EOW的杀菌机制进行研究,同时以2%戊二醛作为阳性对照组,以生理盐水(NS)作为阴性对照组。结果以EOW、2%戊二醛对铜绿假单胞菌作用30 s杀灭率>99.99%,作用60 s杀灭率可达100.00%。EOW、NS、2%戊二醛作用铜绿假单胞菌60 s后,经BCA法检测蛋白渗漏,分别为(96.00±7.42)、(94.15±7.49)、(216.97±10.35)μg/mL,总体比较,差异有统计学意义(F=613.20,P<0.01),2%戊二醛组高于EOW组、NS组;蛋白渗漏量不随作用时间增加而改变(均P>0.05)。随机多态性扩增DNA电泳图谱显示,EOW组与NS组均在500~1 000 kb间显示亮度较高的密集条带,2%戊二醛组无扩增条带。EOW及2%戊二醛作用后钙离子荧光强度均低于NS组。结论 EOW可能的杀菌机制是使铜绿假单胞菌细胞膜通透性受到一定程度的损伤,致使Ca2+泄漏,但未能造成蛋白质泄漏,对其核酸损伤作用不明显,DNA可能并非EOW杀菌靶点。 展开更多
关键词 酸性氧化电位水 戊二醛 铜绿假单胞菌 杀菌机制 蛋白质泄漏 核酸 细胞膜通透性
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杀菌通透性增加蛋白体外抑制革兰阴性细菌脂多糖激活血小板的作用 被引量:3
13
作者 罗先明 杨秋红 +1 位作者 魏菁 马丽萍 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期129-132,共4页
本研究旨在探索杀菌通透性增加蛋白(bactericidal permeability-increasing protein,BPI)能否抑制G-细菌脂多糖(LPS)激活血小板的作用。取10例健康体检者全血制备富含血小板血浆(PRP,1×108/ml)。实验分为4组:正常血小板组:不作任... 本研究旨在探索杀菌通透性增加蛋白(bactericidal permeability-increasing protein,BPI)能否抑制G-细菌脂多糖(LPS)激活血小板的作用。取10例健康体检者全血制备富含血小板血浆(PRP,1×108/ml)。实验分为4组:正常血小板组:不作任何处理;LPS组:LPS(10μg/ml)刺激6 h;BPI组:BPI(100μg/ml)处理1 h;BPI+LPS组:BPI(100μg/ml)预孵育1 h后,再接受LPS(10μg/ml)刺激6 h。应用流式细胞术(FCM)检测各组血小板膜Toll样受体-4(TLR-4)的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定PRP上清中细胞因子释放水平,包括肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)。结果表明,与正常血小板组相比,LPS刺激血小板后血小板膜TLR-4表达及上清中TNF-α和IL-6浓度均明显增高(P<0.001)。在接受BPI预处理后,LPS刺激血小板表达TLR-4及TNF-α和IL-6的作用明显下降,但仍高于正常血小板组。BPI单独刺激血小板不引起血小板TLR-4表达增高及细胞因子水平改变。结论:BPI能够抑制LPS诱导的血小板活化。 展开更多
关键词 杀菌通透性增加蛋白 血小板 脂多糖 TLR-4 细胞因子
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BPI蛋白对感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊细胞因子水平的影响 被引量:4
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作者 郭海英 沈文 +4 位作者 陈冬梅 陈凯丽 张晓丽 高宝德 孙延鸣 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1882-1890,共9页
研究重组BPI蛋白(rBPI)对感染绵羊肺炎支原体(MO)的盘羊杂交羊的免疫应答分析。将6只巴什拜羊作为A组,将12只盘羊杂交羊随机分为B、C组,全部人工感染MO,感染第4天开始,C组每天分别注射rBPI,A和B组注射生理盐水。采用ELISA方法检测试验... 研究重组BPI蛋白(rBPI)对感染绵羊肺炎支原体(MO)的盘羊杂交羊的免疫应答分析。将6只巴什拜羊作为A组,将12只盘羊杂交羊随机分为B、C组,全部人工感染MO,感染第4天开始,C组每天分别注射rBPI,A和B组注射生理盐水。采用ELISA方法检测试验羊不同时间血清中IL-8、IL-10、IFN-γ及TNF-α的含量。在试验结束后宰杀各组6只羊,取肺组织做病理切片,进行治疗效果评价。结果:在感染初期,3个组IL-8、TNF-α及IFN-γ含量都升高,而IL-10有降低趋势。在感染后第7天,C组IL-8浓度显著低于A组(P<0.05);在第14—21天,B组极显著高于A组(P<0.01)。在第5天,C组IL-10显著高于A组(P<0.05),极显著低于B组(P<0.01);在第14天,C组极显著低于A组(P<0.01),显著高于B组(P<0.05);在第21天,C组显著低于A组(P<0.05),极显著高于B组(P<0.01)。在第14天,C组IFN-γ含量显著高于A组(P<0.05);在第21天,C组显著低于B组(P<0.05),但极显著高于A组(P<0.01)。在感染第14天,C组TNF-α显著低于B组(P<0.05),显著高于A组(P<0.05);在第21天,C组的TNF-α显著低于B组(P<0.05),但极显著高于A组(P<0.01)。组织病理学评分结果:A组平均分为9.4,B组平均分19.9,C组平均分为12.8,B组评分显著高于A、C组(P<0.05、P<0.05)。rBPI对MO感染的杂交羊有治疗作用,对细胞因子有调节作用。 展开更多
关键词 杀菌/通透性增加蛋白 杂交羊 绵羊肺炎支原体 细胞因子 病理评分
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杀菌/通透性增强蛋白N端cDNA的克隆和表达 被引量:4
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作者 马越云 马文煜 +2 位作者 于文彬 刘家云 苏明权 《第四军医大学学报》 2000年第10期1223-1226,共4页
目的 克隆杀菌 /通透性增强蛋白 (BPI) N端 c DNA,构建原核和真核表达载体 ,分别在大肠杆菌和 CHO细胞中表达 BPI蛋白 .方法 提取正常人外周血多形核粒细胞 (PMN)总 RNA,经套式 RT- PCR法扩增出 BPI N端 c DNA片段 ,将其克隆入 p GEM-... 目的 克隆杀菌 /通透性增强蛋白 (BPI) N端 c DNA,构建原核和真核表达载体 ,分别在大肠杆菌和 CHO细胞中表达 BPI蛋白 .方法 提取正常人外周血多形核粒细胞 (PMN)总 RNA,经套式 RT- PCR法扩增出 BPI N端 c DNA片段 ,将其克隆入 p GEM- T easy载体中并进行酶切鉴定和序列测定 .然后亚克隆入 p GEX- 4T- 1质粒 ,转化大肠杆菌 ,进行诱导表达 ,表达产物用 Western blot法鉴定 .同时将该基因片断克隆入 pc DNA3质粒 ,通过脂质体转染 CHO细胞 ,免疫荧光法鉴定 BPI的表达 .结果 获得 BPI N端长度为 72 6 bp的基因片断 .序列分析证实该片断中有 4个点突变 ,但均不在活性中心 .在大肠杆菌中的表达产物为相对分子质量 5 1× 10 3的GST- BPI融合蛋白 ,Western blot反应中在 5 1× 10 3处有显色区带 .G418筛选出的阳性 CHO细胞在免疫荧光反应中产生荧光反应 .结论 我们成功的在大肠杆菌和 CHO细胞中表达了 BPI2 5蛋白 ,为进一步研究 展开更多
关键词 杀菌/通透性增强蛋白 克隆 基因表达 N端 CDNA
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人β-防御素3融合细菌膜穿透增加蛋白在毕赤酵母中的表达 被引量:9
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作者 庹晓晔 柴家科 +2 位作者 蒋伟 常东 盛志勇 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第7期648-650,共3页
目的:探讨采用酵母表达系统进行人β-防御素3(hBD3)与细菌膜穿透增加蛋白(BPI)融合表达的可行性.方法:将hBD3成熟肽基因通过Linker蛋白与BPI基因串联,克隆于酵母表达载体pPICZαB中,电转导入X-33毕赤酵母菌,经重组酵母基因组PCR和表型... 目的:探讨采用酵母表达系统进行人β-防御素3(hBD3)与细菌膜穿透增加蛋白(BPI)融合表达的可行性.方法:将hBD3成熟肽基因通过Linker蛋白与BPI基因串联,克隆于酵母表达载体pPICZαB中,电转导入X-33毕赤酵母菌,经重组酵母基因组PCR和表型鉴定获得阳性克隆,对阳性克隆进行甲醇诱导表达,上清进行目的蛋白纯化和Western Blot鉴定.结果:重组载体经酶切和测序证实序列正确,重组X-33-pICZαB-hBD3-BPI克隆经甲醇诱导24h后,上清SDS-PAGE电泳显示有目的蛋白表达,Western Blot分析表明重组蛋白抗人hBD3和BPI均阳性,该目的蛋白依次通过疏水色谱、离子交换色谱纯化,蛋白纯度达到89%.结论:采用毕赤酵母系统融合表达hBD3和BPI是可行的. 展开更多
关键词 人β-防御素3 细菌膜穿透增加蛋白 融合表达 毕赤酵母
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人类杀菌肽基因cDNA片段的克隆 被引量:2
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作者 杨宇 陈玉祥 +5 位作者 刘水平 易伟峰 陈铁骅 文继舫 胡维新 长沙 《生命科学研究》 CAS CSCD 2001年第2期133-136,共4页
采用 RT-PCR方法 ,从慢性粒细胞白血病患者的外周血白细胞中扩增得到长度约为 1 .5kb1的人类杀菌肽 c DNA,并进一步得到长度约为 60 0 bp的该多肽的氨基端部分 c DNA扩增产物 .将上述两种长度的扩增产物分别克隆至 p UCm-T载体中 ,为进... 采用 RT-PCR方法 ,从慢性粒细胞白血病患者的外周血白细胞中扩增得到长度约为 1 .5kb1的人类杀菌肽 c DNA,并进一步得到长度约为 60 0 bp的该多肽的氨基端部分 c DNA扩增产物 .将上述两种长度的扩增产物分别克隆至 p UCm-T载体中 ,为进一步开展该重组抗菌肽的表达和活性研究奠定了基础 . 展开更多
关键词 杀菌肽 慢性粒细胞白血病 分子克隆
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杀菌通透性增加蛋白基因的克隆及在CHO细胞中的表达 被引量:4
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作者 徐俊杰 徐静 王海涛 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期669-673,共5页
从一名健康中国人外周血白细胞中克隆出杀菌 通透性增加蛋白 (BPI)基因 ,全长1 45 2bp,编码 2 7个氨基酸的信号肽和 45 6个氨基酸成熟蛋白。序列比较发现 ,此序列与国外发表的序列有 6个核苷酸的差异 ,编码蛋白有 4个氨基酸的差异。构... 从一名健康中国人外周血白细胞中克隆出杀菌 通透性增加蛋白 (BPI)基因 ,全长1 45 2bp,编码 2 7个氨基酸的信号肽和 45 6个氨基酸成熟蛋白。序列比较发现 ,此序列与国外发表的序列有 6个核苷酸的差异 ,编码蛋白有 4个氨基酸的差异。构建真核表达质粒 ,在CHO细胞中实现BPI基因的稳定表达。对重组蛋白初步纯化后进行杀菌实验 ,结果表明重组蛋白具有与天然蛋白同样的生物活性。 展开更多
关键词 杀菌/通透性增加蛋白 基因克隆 表达 CHO细胞
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腹部大手术后杀菌/通透性增加蛋白的变化规律及意义 被引量:2
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作者 张立天 姚咏明 +1 位作者 陆家齐 于燕 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期377-379,共3页
目的观察外科大手术后内源性杀菌/通透性增加蛋白(BPI)的变化规律及其临床意义。方法选择拟行腹部大手术患者11例,分别于术前和术后1、3、5、7、14天采集血标本,测定外周血中性粒细胞数的变化,并采用ELISA方法测定血浆BPI、脂多糖结合蛋... 目的观察外科大手术后内源性杀菌/通透性增加蛋白(BPI)的变化规律及其临床意义。方法选择拟行腹部大手术患者11例,分别于术前和术后1、3、5、7、14天采集血标本,测定外周血中性粒细胞数的变化,并采用ELISA方法测定血浆BPI、脂多糖结合蛋白(LBP)和IL-6水平,改良基质显色法鲎试验检测血浆内毒素含量。结果正常对照组血浆中BPI/LBP比值为(0.672±0.083)×10-3,腹部大手术后第1天增高至(1.058±0.074)×10-3(P=0.004),第3天为(1.107±0.061)×10-3(P=0.001),第5天后降至正常范围(P>0.05)。11例患者术前血浆中均未检测到IL-6,腹部大手术后第1天血浆中IL-6水平迅速增高达峰值(27.440±12.144pg/ml,P=0.04),第3天仍处于较高水平(11.530±5.312pg/ml)。结论手术创伤后机体内源性BPI的增幅明显高于LBP,可能有助于控制大手术后内毒素血症的发生及发展。 展开更多
关键词 杀菌/通透性增加蛋白 脂多糖结合蛋白 细胞因子类 外科手术
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杀菌性/通透性增加蛋白对感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊的免疫调节作用研究 被引量:3
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作者 郭海英 沈文 +4 位作者 陈冬梅 陈凯丽 高宝德 张晓丽 孙延鸣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期481-485,共5页
为研究重组杀菌性/通透性增加蛋白(r BPI)对感染绵羊肺炎支原体(MO)后的盘羊杂交羊的细胞因子变化情况,本研究以6只巴什拜羊为A组,12只盘羊杂交羊随机分为B和C两组,全部人工感染MO(ccu=106),感染4 d后C组每天肌肉注射r BPI 150 mg/只,A... 为研究重组杀菌性/通透性增加蛋白(r BPI)对感染绵羊肺炎支原体(MO)后的盘羊杂交羊的细胞因子变化情况,本研究以6只巴什拜羊为A组,12只盘羊杂交羊随机分为B和C两组,全部人工感染MO(ccu=106),感染4 d后C组每天肌肉注射r BPI 150 mg/只,A和B组注射生理盐水,并采用荧光定量PCR方法及ELISA检测实验羊不同时间外周血中BPI、IL-1β、IL-4及IL-6的表达水平。结果显示,B对照组死亡率为33.3%。BPI的表达水平在感染后第7 d,C组显著低于A和B组(p<0.05),第14 d^21 d C组极显著高于B组(p<0.01),而在第7 d^21 d,A组极显著高于B组(p<0.01)。IL-1β表达水平在感染后第7 d^21 d,C组极显著低于A和B组(p<0.01),第21 d,A组显著低于B组(p<0.05)。IL-4的表达水平在感染后第7 d^21 d,C组极显著高于A和B组(p<0.01),第14 d^21 d,A组显著高于B组(p<0.05)。IL-6表达水平在感染第14 d^21 d,C组极显著低于A和B组(p<0.01),A组显著低于B组(p<0.05)。以上结果表明r BPI对感染MO后的盘羊杂交羊具有一定的免疫调节作用。 展开更多
关键词 杀菌通透性增加蛋白 绵羊肺炎支原体 盘羊杂交羊 ELISA 荧光定量PCR
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