蛋白激酶C抑制剂Ro-31-8220逆转高糖诱导乳鼠心肌细胞肥大的作用及其相关机制

目的:观察蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro-31-8220对高糖诱导的乳鼠心肌细胞肥大的影响,并初步探讨PKC及其下游信号转导途径在其中的作用机制。方法:建立乳鼠心肌细胞培养模型,随机分成对照组(5.5mmol.L-1)、不同浓度高糖组(10mmol.L-1、15mmol.L-1、20mmol.L-1、25.5mmol.L-1)、高糖(25.5mmol.L-1)+PKC抑制剂Ro-31-8220组(50nmol.L-1)和高糖(25.5mmol.L-1)+NF-κB抑制剂BAY11-7082(5mmol.L-1)组,分别测定各组乳鼠心肌细胞直径和蛋白质含量,并应用Westernblotting检测乳鼠心肌细胞PKC-α、PKC-β2、p-PKC-α、p-PKC-β2、NF-κB和c-Fos等蛋白的表达水平。结果:高糖可以明显诱导乳鼠心肌细胞肥大,提高乳鼠心肌细胞PKC-α、PKC-β2、p-PKC-α、p-PKC-β2、NF-κB和c-Fos的蛋白表达,与对照组相比差异显著(P<0.01),并呈现一定的浓度依赖性;而Ro-31-8220能够逆转上述现象,其细胞直径和蛋白表达低于高糖组,并有显著差异(P<0.01)。结论:高糖能够浓度依赖性地诱导心肌细胞肥大,而PKC抑制剂Ro-31-8220则能抑制高糖所诱导的这种反应,其机制可能与PKC/NF-κB/c-Fos途径相关。

MgCO_3在AZ31镁合金中的细化效果及机理

为改善AZ31镁合金铸态组织,用MgCO3对其进行细化,采用扫描电子显微镜、X射线衍射仪和金相显微镜研究了细化工艺参数对AZ31镁合金显微组织及其物相组成的影响.结果表明:在AZ31中添加质量分数为0.6%的MgCO3,于760℃保温10 min细化效果最佳,α-Mg晶粒的尺寸由基体合金的570μm降至100μm,降幅约82.5%.少量多次添加MgCO3的细化效果明显优于单次添加MgCO3的细化效果.研究认为,细化机理是MgCO3反应后生成的部分Al4C3质点作为异质核心细化晶粒,多余的Al4C3质点钉扎晶界阻碍晶粒长大.Al元素随固/液界面前沿被快速推至晶界,生成沿晶界生长的β-Mg17Al12相,起到进一步固定晶界的作用.合金元素的分布均有改变.

济阳坳陷古近纪咸化层段甲藻甾烷和C31甾烷特征

通过对济阳坳陷古近纪咸化层段源岩的饱和烃色谱质谱分析发现,沙河街组一段、沙三段和沙四段上亚段源岩中发育了可以指示海侵发生的甲藻甾烷和C31甾烷分子化石,并且C31甾烷通常出现在水体盐度更高、海侵程度更大的环境中,从而推测三个层段的咸化与海相关。

瞬时辐射对80C31单片机性能的影响

研究了80C31单片机瞬时剂量率辐射特性和闭锁电流随“闪光-1”γ射线剂量率的变化规律,分析了80C31单γ片机在浅和深闭锁时具有不同的电流特性。

Al-5C中间合金对AZ31镁合金的细化机理(英文)

采用粉末原位合成工艺制备Al-5C中间合金,研究Al-5C中间合金对AZ31镁合金晶粒细化的影响及细化机理。结果表明:Al-5C中间合金由α(Al)和Al4C3两相组成,Al4C3颗粒的尺寸分布由烧结时间控制。Al-5C中间合金能显著地细化AZ31镁合金晶粒尺寸,当Al-5C中间合金添加量低于2%时,随着Al-5C中间合金添加量的增加,AZ31镁合金晶粒尺寸减小。晶粒细化机理是由于Al4C3与Mn反应生成的Al-C-Mn颗粒能作为初生α-Mg晶粒的异质形核基底,从而细化晶粒。

ΦC31整合酶介导猪基因组定点修饰的探讨

高效与特异的基因组定点修饰是基因工程动物研究的前沿与难点.链霉菌噬菌体ΦC31整合酶能介导含attB位点的外源基因定点整合于多种真核生物基因组的假attP位点,可维持外源基因的正常结构及高效表达.本文探讨ΦC31整合酶介导外源基因在猪基因组内定点整合的分子基础.构建含attB位点的报告载体pEGFP-N1-attB,与ΦC31整合酶表达载体pCMV-INT共转染猪肾PK15细胞,G418筛选获得单克隆细胞系.实时荧光定量PCR筛选出单拷贝整合的转基因细胞系.TAIL-PCR鉴定出1个猪基因组假attP位点,位于猪1号染色体,watson链,坐标114220087-114220126,命名为pig-attP-1.测序结果显示,pEGFP-N1-attB在attB位点处断开插入到pig-attP-1.用荧光计测定细胞培养基上清EGFP含量发现,该转基因细胞系EGFP的表达水平是本底的50倍(13500 AU vs.280 AU),表明pig-attP-1是利于外源基因高效表达的"友好位点".该研究不仅为实现外源基因在猪基因组内的定点整合提供了新策略,也为创制基因工程猪、建立动物生物反应器等研究注入了新思路.

中心复合设计射线法考察离子液体C_(16)H_(31)ClN_2与乐果的毒性相互作用

离子液体(ILs)是一种用于替代传统易挥发有机溶剂的新型"绿色"溶剂.由于不挥发、不会对大气产生污染而得到广泛应用.但是某些ILs易溶于水,其自身毒性能够对生态环境造成潜在影响,这已引起诸多学者对ILs毒性的研究兴趣.然而ILs与其它污染物的毒性相互作用目前研究很少.论文选取咪唑类离子液体C16H31ClN(2DMI)与有机磷杀虫剂乐果(DIM)作为目标化合物,以青海弧菌Q67为检测生物,采用微板毒性分析法测定了目标化合物及其混合物的毒性.为全面考察不同浓度范围DMI与DIM的毒性相互作用,将中心复合设计与固定浓度比射线法有机结合起来构建5个不同浓度比的混合物射线,通过浓度加和与独立作用模型对混合物射线进行比较评估.结果表明在DMI浓度较大且DIM浓度较低时,DMI与DIM之间存在明显拮抗作用,而在其它浓度范围内两者之间为加和作用.

白凤丸对Aβ_(1-40)和C31导致PC12细胞损伤的保护作用

目的 :探讨Aβ1 4 0 和C3 1对体外培养的PC12细胞的作用 ,同时研究了白凤丸有效成份BFP对其作用的影响。方法 :采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)检测方法 ,在培养的PC12细胞观察应用Aβ1 4 0 和C3 1前后对细胞在 5 70nm的吸收值的影响 ,以及给予BFP和雌二醇共同孵育后吸收值的改变。结果 :Aβ1 4 0 和C3 1可使细胞在 5 70nm的吸收值显著降低 ,而应用BFP和雌激素后 ,能有效地提高细胞在 5 70nm的吸收值。结论 :Aβ1 4 0 和C3 1对PC12细胞具有毒性作用 ,而BFP能显著拮抗这种作用 ,与雌激素的作用类似 ,具有一定的神经保护作用。

单片机80C31构成的无线远程通信系统设计

由单片机 80 C3 1、调制解调器 AM791 0、无线电台构成的无线远程通信系统 ,电路简单 ,信息传输可靠 ,成本较低 ,在昆明 -东川国际泥石流观测站的降雨无线遥测系统中应用证实 。

KLHL31促进C2C12细胞的肌原分化

人类KLHL31基因是本实验室已克隆的基因,其蛋白质含有保守的BTB和串连重复的Kelch结构域,已有报道表明其在人类成体骨骼肌和心肌组织中特异表达。RT-PCR分析表明在C2C12细胞肌原分化过程中过表达KLHL31能够提高肌原分化标志基因MyoD与Myogenin的转录水平;荧光报告系统分析发现过表达KLHL31能够增强肌原分化相关基因MCK启动子的活性,表明KLHL31能够促进C2C12细胞的肌原分化。

CaCO_3在AZ31镁合金中的细化效果及机理

用CaCO3作细化剂研究了对AZ31镁合金凝固组织的影响.结果表明:在AZ31中添加质量分数为0.5%的CaCO3,在760℃保温10 min后细化效果最佳,α-Mg晶粒的尺寸由基体合金的570μm降至209μm,降幅约63.3%.通过能谱分析、结合能和自由能的计算证实,细化机理是CaCO3反应后生成Al4C3,其中部分Al4C3质点作为异质核心,使晶粒细化,其余的Al4C3质点钉扎晶界也阻碍了晶粒长大.Al元素随固/液界面前沿被快速推至晶界,生成沿晶界生长的β-Mg17Al12相,起到进一步固定晶界的作用.合金元素的分布均有改变.

фC31位点特异性整合酶系统研究进展

介绍了фC31重组酶作用机制、фC31整合酶在基因治疗及其转基因动物研制中的应用、фC31整合酶催化效率的影响因素,以及фC31整合酶整合的安全性。实验证实,фC31-int可作用于多种动植物细胞及组织,将目的基因特异地整合到宿主基因组,使目的基因得以持续、高效地表达。近年来该酶在哺乳动物体内和体外的研究进展表明,фC31整合酶已经成为研究转基因、基因治疗及基因修饰的一种重要工具。

ΦC31整合酶的表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的:提供ΦC31整合酶研究所需的大量纯化蛋白质及特异性抗体。方法:将编码ΦC31整合酶的ORF插入到pET22b+载体构建表达质粒并转化E.coliBL21(DE3),用IPTG诱导表达His-C31整合酶融合蛋白,His-Bind Quick Car-tridge纯化表达产物。重组蛋白作为抗原常规免疫家兔制备相应的多克隆抗体,Western blotting确定抗体的特异性,体外线性底物分子内重组检测系统检测抗体的活性。最后用该抗体检测了ΦC31整合酶在真核细胞HEK293中的定位和分布。结果:16℃条件下0.2 mmol/LIPTG诱导培养30 h,携带pET22b-ΦC31质粒的E.coliBL21(DE3)在YTG培养基中,可表达出大量的融合蛋白,该蛋白经体外线性底物分子内重组检测系统检验具有较高的活性。使用该融合蛋白免疫新西兰大白兔后,分离兔血清可得到ΦC31整合酶多克隆抗体,Western blotting和荧光免疫细胞组织化学方法证实,该抗体可特异性地识别细菌及细胞表达的ΦC31整合酶蛋白抗原。结论:本实验建立了表达ΦC31整合酶的方法,并成功制备了ΦC31整合酶特异性抗体。

基于φC31整合酶的高等真核生物基因组操作技术研究进展(英文)

位点特异性重组系统已经成为基因组操作的强有力工具。来自链霉菌噬菌体φC31的整合酶是丝氨酸重组酶家族的一员,可催化2个不同的识别位点attB和attP间发生有效的单向性重组。总结了φC31整合酶可能的重组机制以及在人类细胞、小鼠胚胎干细胞、果蝇和植物等真核生物基因组操作上的应用,并对该系统的优点和存在问题进行了分析。φC31整合酶系统有望成为高等生物基因功能分析、转基因标记删除、生物合成等研究领域最强有力的手段之一,为此也简要介绍了家蚕个体水平上φC31整合酶介导的盒式交换的研究进展,期望能为家蚕基因组的操作技术研究提供一些借鉴。

稳定过表达人KLHL31基因的H9c2细胞系的建立及鉴定

人类KLHL31基因是本实验室已克隆的基因,其蛋白质含有保守的BTB和串连重复的Kelch结构域,实验表明人类KLHL31在成体骨骼肌和心肌组织中特异表达,KLHL31蛋白的过表达可以抑制了AP-1与SRE的活性。本文拟利用阳离子聚合物转染技术将重组表达质粒pCMV-tag2B-KLHL31转染H9c2细胞,通过G418筛选,RT-PCR和Western blotting验证,建立稳定过表达KLHL31基因的细胞系H9c2-KLHL31,为研究KLHL31在心脏发育及其相关功能提供有用的细胞研究模型。

食管鳞癌VEGF-C mRNA和CD 31表达及其意义

研究食管鳞癌血管内皮生长因子C(VEGF-C)mRNA和CD 31的表达,探讨VEGF-C促食管鳞癌淋巴转移的作用。应用原位杂交法检测43例食管鳞癌组织VEGF-C mRNA表达,CD 31免疫组织化学染色标记血管、淋巴管内皮细胞,并计数肿瘤组织的微血管密度(MVD)。结果显示,食管鳞癌组织VEGF-C mRNA阳性19例(41.86%),MVD平均为76.36±20.30/mm^2。VEGF-C mRNA表达与食管鳞癌淋巴结转移、TNM分期和肿瘤浸润深度相关(p<0.05或p<0.01);而与肿瘤组织学分级无关(p>0.05)。MVD与食管鳞癌淋巴结转移、TNM分期的相关性有统计学意义(p<0.05);而与肿瘤浸润深度和组织学分级的相关性则无统计学意义(p>0.05)。VEGF-C mRNA表达阳性者MVD高于表达阴性者,两者比较具有显著性差异(p<0.05)。研究提示VEGF-C促进了肿瘤诱导的淋巴管新生和血管新生,在食管鳞癌的淋巴转移中起重要作用。

位点特异整合酶φC31的作用机制及应用

链霉菌噬菌体φC31整合酶是一种位点特异整合酶(Site-specific recombinase,SSR),其能够精确并单向的促进attP位点与attB位点的重组,是继Cre/Loxp、FLP之后又一个倍受关注的位点特异整合酶,该整合酶已经成为基因治疗、转基因研究等领域的常用技术手段。现对φC31位点特异性整合酶的作用机制、整合位点及其在转基因和基因治疗中的应用进行了综述,并对其发展前景进行了展望。

拟南芥蛋白磷酸酶PP2C31的盐胁迫响应功能研究

蛋白磷酸酶2C(protein phosphatase 2C,PP2Cs)家族是植物细胞去除磷酸化蛋白中磷酸基团的重要蛋白磷酸酶。拟南芥含有80多个编码PP2Cs的基因,然而大部分成员在植物抗逆反应中的功能仍有待研究。本文发现拟南芥PP2C31(At2g40860)基因的表达受高盐抑制,其T-DNA插入突变体(pp2c31-1突变体和pp2c31-2突变体)表现出对高盐胁迫的耐受性且Na+含量较低。实时定量PCR(quantitative real time-PCR,qRT-PCR)分析发现,PP2C31基因在植物体各组织均有表达;亚细胞定位结果显示PP2C31蛋白定位于细胞质和细胞核中。利用脱落酸合成抑制剂和外源脱落酸处理发现,突变体植株的高盐耐受性和PP2C31基因的表达均不受脱落酸的影响。研究结果表明:PP2C31蛋白是拟南芥响应高盐胁迫的一个非脱落酸依赖的负调控组分。

TMS320C31与MAX125 A/D转换器的接口设计及应用

在描述MAX12 5A/D转换器的特点及工作原理的基础上 ,结合在静电悬浮控制系统中的应用 ,从硬件方面介绍了该芯片与TMS3 2 0C3 1的接口设计方法 ,并给出了数据采集过程采用定时中断方式的编程示例。

80C31微处理器单粒子效应敏感性地面试验研究

文章针对不同厂家的80C31微处理器,利用重离子、锎源模拟源进行单粒子效应地面试验研究。详细介绍了80C31微处理器单粒子效应试验原理、试验方法、试验系统的软硬件组成以及试验取得的结论。通过试验研究获得了80C31微处理器单粒子翻转和单粒子锁定特征参数。研究结果可为被测器件在卫星型号的使用提供技术参考依据。