毛细管直接PCR方法快速鉴定NDM-1阳性细菌

目的建立一种无需核酸提取预处理的毛细管PCR方法,用于新德里金属酰胺酶(NDM-1)阳性细菌的快速鉴定。方法考察在直接加入细菌培养液条件下,两种改良型DNA聚合酶Terra和MightyAmp DNA聚合酶对NDM-1编码基因的扩增效果。选用其中一种DNA聚合酶进行毛细管PCR,确定其对于NDM-1阳性细菌的检测限。结果当分别向25 μLPCR反应体系加入1、3、5、7μL细菌培养液条件下,两种DNA聚合酶均能有效扩增NDM-1编码基因序列,Terra DNA聚合酶效果较好。采用两步法毛细管PCR扩增NDM-1编码基因,3 μL反应体积条件下,40个循环反应在20 min内完成。结论应用改良型DNA聚合酶可以免去细菌核酸纯化步骤直接进行PCR。免核酸提取扩增结合毛细管PCR方法可以显著缩短核酸分析时间,适合于NDM-1阳性细菌的快速鉴定。

The Mechanism of Resistance of Pseudomonas Aeruginosa toβ-lactam Antibiotics and Clinical Significance

To study the resistant mechanism and clinical significance of pseudomonas aeruginosa toβ- lactam antibiotics,the outer mem brane permeability rate of30 P.aeruginosa strains to5 β- lactam antibiotics was m easured and their production ofβ- lactamase and theβ- lactam ase genes they carried detected. Furthermore,the relationship between the perm eability,β- lactam ase and the clinical effects ofβ- lactam antibiotics was observed. By using 1 4C- penicillin and liquid- scintillant isotope assay,the affinity of penicillin binding proteins(PBPs) was m easured and their roles in the resistant m echanism studied.Itwas revealed thatthe perm eability rate was higher in sensitive strains than in resistantones(P<0 .0 5 ) .All strains harbored1- 4 β- lactamase genes and produced β- lactam ase.Higher permeability rate and higher degree of stability toβ- lactamase indicated better clinical therapeutic effects. The affinity of PBPs changed little without regard to the perm eability andβ- lactam ase. These results suggested that the permeability of outer mem brane andβ- lacta- mase,but not PBPs,played im portant roles in the resistant mechanism of P. aeruginosa toβ- lac- tam antibiotics and affected the clinical therapeutic effectiveness of som e patients.

流感嗜血杆菌耐药基因及耐药机制分析

目的从分子水平了解南京地区儿童流感嗜血杆菌(Hi)对氨苄西林的耐药状况。方法对158株Hi临床分离株进行β-内酰胺酶检测,PCR扩增β-内酰胺酶的TEM及ROB编码基因,并克隆到T载体中作核酸序列测定与分析。结果本地区儿童感染Hi对氨苄西林的耐药率为41.77％。β-内酰胺酶阳性率为40．51％。TEM基因阳性89株,ROB阳性基因1株。63株耐氨苄西林且β-内酰胺酶阳性,耐药性主要是由于产生β-内酰胺酶和TEM基因。2株耐氨苄西林且β-内酰胺酶阴性。1株β-内酰胺酶阳性,但未检测到TEM或ROB基因。结论本地区儿童感染Hi对氨苄西林的耐药情况不容乐观,耐药机制主要是产生β-内酰胺酶,且以TEM型为主。

改良Hodge试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的诊断价值的系统评价

目的系统评价改良Hodge试验(MHT)检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的准确性。方法计算机检索PubMed、中国生物医学文献数据库等数据库(CBM),收集用MHT检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的实验研究,依据QUADAS质量评价标准评价纳入研究的质量后,进行Meta分析。结果共纳入8个研究,合计1254份无重复标本。Meta分析显示:MHT检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的合并敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比、诊断比值比和SROC曲线下面积分别为0.96、0.94、10.01、0.06、168.98和0.989。结论 MHT对于产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的表型检测具有很高的敏感度、特异度和准确性。

三亚地区综合性医院213株产ESBLs肺炎克雷伯菌的临床分布及耐药性基因的检测

目的了解三亚市人民医院肺炎克雷伯菌的标本来源及耐药基因情况,为临床合理用药和控制院内感染提供依据。方法从2013年1月至2014年12月各临床送检标本中分离肺炎克雷伯菌,采用Phoenix-100全自动细菌鉴定药敏系统进行药敏试验,按照标准纸片扩散法进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型的筛选和确证,依据当年的美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准判读结果,用WHONET 5.6软件对所有数据进行统计分析。用聚合酶链反应(PCR)对213株产ESBLs的肺炎克雷伯菌进行常见的几种的耐药基因进行检测。结果分离并确认213株产ESBLs肺炎克雷伯菌,标本来源主要是痰、呼吸道分泌物,占78.4%;其次是分泌物标本和中段尿,分别占8.92%和5.2%。对头孢噻肟耐药率最高(98.1%);对亚胺培南的耐药率最低(2.86%)。213株产ESBLs肺炎克雷伯菌中有195株能检测到1个或多个耐药基因,分别为CMY,CTX,TEM,SHV,DHA1和KPC,其检出率分别为6.10%、76.53%、59.62%、76.06%、12.21%和2.82%。结论该院肺炎克雷伯菌主要分离自痰、呼吸道分泌物,对常用抗菌药物均产生了一定的耐药性,应进一步了解该院产ESBLs菌株的耐药基因的分布,预防医院感染的发生和多重耐药菌的产生。