铜过量负荷导致肝细胞凋亡及其对Bax Bcl-2基因表达的影响

目的建立肝豆状核变性铜过量负荷大鼠模型,并研究肝铜沉积对肝细胞凋亡及Bax,Bcl-2基因表达的影响。方法建立铜过量负荷大鼠模型,检测肝脏和血清铜以及血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量;用末端脱氧核苷酸转移酶介导生物素标记(TUNEL)技术、RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测铜过量负荷大鼠肝细胞凋亡、凋亡相关基因Bax,Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平,并利用图像分析系统观察阳性细胞的变化规律。结果随着铜负荷时间的延长,铜过量负荷大鼠肝组织铜含量、血清ALT水平逐渐升高,同时肝细胞的凋亡也逐渐增多,凋亡指数(AI)逐步升高。铜过量负荷大鼠肝组织Bax基因的表达水平明显高于对照组,且随着铜负荷时间的延长有升高趋势;Bcl-2基因的表达水平高于对照组,且随着铜负荷时间的延长也有升高趋势,但升高幅度低于Bax,故Bcl-2与Bax的比值(Bcl-2/Bax)随着铜负荷时间的延长而降低。结论成功建立肝豆状核变性铜过量负荷大鼠模型,铜过量负荷通过相对上调促凋亡基因Bax表达水平来诱导肝细胞的凋亡。

缺血再灌注对在体兔窦房结细胞Fas-L Bax Bcl-2基因表达的影响

目的 :探讨缺血再灌注对在体兔窦房结细胞Fas L、Bax、Bcl 2表达的影响。方法 :取家兔 90只 ,随机分为对照组、缺血 10、3 0、60、12 0min组及缺血 10、3 0、60、12 0min再灌注 4h组 ,每组 10只。通过结扎及放松右冠状动脉起始部制作在体兔窦房结细胞缺血再灌注损伤模型 ,当达各预定时间点后 ,迅速切取窦房结组织 ,用SABC免疫组化法检测窦房结细胞Fas L、Bax及Bcl 2表达 ,用Tiger 92 0图象分析系统计算Fas L、Bax、Bcl 2表达平均光密度值。结果 :1 缺血 10min组窦房结细胞Fas L、Bcl 2表达与对照组比较无明显差异 ,而Bax表达则较对照组明显增强 (P <0 0 5 ) ;Fas L、Bax表达量随缺血时间延长逐渐增加 ,以缺血 12 0min组表达最强 ;Bcl 2表达则以缺血 60min组最强。 2 缺血再灌注组 ,Fas L、Bax表达随缺血时间延长逐渐增加 ,以缺血 60min再灌注 4h组最强 ;Bcl 2表达以缺血 3 0min再灌注 4h组最强 ,而缺血 12 0min再灌注 4h组已恢复至对照组水平。 3 随缺血时间延长 ,缺血组及缺血再灌注组Bcl 2 Bax比值均逐渐减小 ,而缺血再灌注组Bcl 2 Bax比值均较相同时间缺血组明显降低。结论 :缺血及缺血再灌注均可上调窦房结细胞Fas L、Bax表达 ,下调Bcl 2 Bax比值 ,此作用可能介导了缺血再灌注诱导窦房结细胞?

蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血大鼠神经细胞凋亡与Bax Bcl-2蛋白表达的作用研究

目的:通过观察大鼠脑出血后神经细胞凋亡与Bax、Bcl-2蛋白表达的动态变化及蛭龙活血通瘀胶囊的干预作用,探讨蛭龙活血通瘀胶囊可能的脑保护作用。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、蛭龙活血通瘀胶囊低、中、高剂量组。采用自体血注入法制备脑出血大鼠模型。采用TUNEL法测定凋亡细胞的表达,免疫组化法测定Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:与模型组比较,蛭龙活血通瘀胶囊低、中、高剂量组的Bax蛋白及凋亡细胞表达明显下降,而Bcl-2蛋白的表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与低剂量组比较,中、高剂量组各时间点的Bax蛋白及凋亡细胞表达均明显下降,而Bcl-2蛋白的表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:蛭龙活血通瘀胶囊能明显促进Bcl-2表达,抑制Bax表达,减少细胞凋亡,对脑出血大鼠具有明显的脑保护作用,且存在一定量效关系。

红花注射液对内毒素性急性肝损伤大鼠的Bax Bcl-2表达及其比值的影响

目的:观察红花注射液对内毒素性急性肝损伤大鼠的干预作用及可能的机制。方法:将清洁级雄性SD大鼠80只随机分为模型组、红花注射液干预组(红花组)、还原型谷胱甘肽干预组(TAD组)及空白对照组,模型组时相点设为6h、24h、48h,红花注射液干预组、还原型谷胱甘肽干预组(TAD组)时相点同模型组;每时相点10只动物;空白对照组10只动物。模型组以腹腔注射内毒素脂多糖(LPS)+D-氨基半乳糖胺(D-GalN)诱导建立大鼠急性肝损伤模型;红花组、TAD组于建模前0.5h分别以红花注射液、还原型谷胱甘肽尾静脉注射;模型组、红花组、TAD组分别于建模后6h、24h、48h及空白对照组于6h时取腹腔静脉血和肝组织,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST),苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理学变化,免疫组织化学法检测肝组织Bax、Bcl-2蛋白表达并计算其比值(Bax/Bcl-2)。结果:与空白对照组比较,模型组各时间点大鼠血清ALT、AST水平显著升高(均P<0.01);肝组织Bax、Bcl-2表达及其比值明显上升(均P<0.01)。与模型组相比,红花组、TAD组各时间点大鼠肝组织病理损伤程度明显改善;血清ALT、AST水平不同程度地下降(P<0.05或P<0.01);肝组织Bax、Bcl-2表达及Bax/Bcl-2下降(均P<0.01)。红花组与TAD组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:红花注射液对内毒素性急性肝损伤有较好的保护作用,其机制可能与下调肝组织Bax、Bcl-2表达及其比值,抑制肝组织细胞过度凋亡相关。

瑞舒伐他汀对局灶性脑缺血再灌注大鼠Bax Bcl-2和脑含水量的影响

目的通过观察瑞舒伐他汀对急性脑缺血再灌注损伤大鼠Bax、Bcl-2、脑含水量的影响,探讨其脑保护作用机制。方法将72只SD大鼠随机分为3组:A组为假模型组,B组为模型组,C组为干预组。采用改良的Zea Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)模型,免疫组化法观测大鼠海马区Bax、Bcl-2改变,干湿质量法测定脑含水量变化,神经功能评分采用Zea Longa 5分制标准评分,脑梗死容积百分比采用2,3,5苯四氮唑(tetrazolium chloride,TTC)染色测定。结果A组各不同时间点大鼠Bax、Bcl-2的激活、脑含水量、神经功能评分及脑梗死容积百分比无明显改变。B、C组大鼠各不同时间点Bax、Bcl-2的激活、脑含水量、神经功能评分及脑梗死容积百分比与A组相比较,有显著性差异(P<0.05)。24 h及72 h时脑含水量、脑梗死容积百分比C组与B组相比,差异不明显(P>0.05),7 d时C组与B组相比,降低明显(P<0.05)。结论瑞舒伐他汀能明显抑制急性脑缺血再灌注大鼠神经元过度凋亡,减轻脑水肿,降低脑梗死容积,具有脑保护作用。神经元数目增多,神经元变性程度及空泡现象明显减轻。

基于Caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路探究加味旋覆代赭汤治疗食管癌前病变的作用机制

目的:探究加味旋覆代赭汤对食管癌前病变大鼠Caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路的调控作用机制。方法:将48只雄性SD大鼠随机分为4组,空白组、模型组、中药组、西药组,每组各12只。除空白组外均采用复合造模法制作食管癌前病变大鼠模型,造模成功后,分别进行药物灌胃干预,空白组、模型组用生理盐水灌胃,中药组和西药组分别给予加味旋覆代赭汤、西药(雷贝拉唑+莫沙必利)灌胃,给药8周取材。利用光学显微镜观察食管上皮组织的形态学变化;分别应用蛋白质印迹法(Western-blot)及聚合酶链式反应(PCR)检测食管上皮组织Caspase-3、Bcl-2及Bax的表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠食管上皮病理积分升高(P<0.01);与模型组比较,中药组、西药组大鼠食管上皮病理积分均降低(P<0.01)。PCR及Western-blot检测结果显示,与空白组比较,模型组大鼠Caspase-3、Bax mRNA、蛋白表达均降低(P<0.01);与模型组比较,中药、西药组大鼠Caspase-3、Bax mRNA、蛋白表达均增高(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠食管组织中Bcl-2 m RNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,中药组和西药组Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论:加味旋覆代赭汤可能通过下调Bcl-2/Bax比值,增加线粒体外膜通透性,释放凋亡因子,激活Caspase-3,使病变组织发生凋亡,扭转食管上皮异型增生,从而起到治疗食管癌前病变的作用。

桂枝加龙骨牡蛎汤对魄不安于肺不寐大鼠脑组织Caspase-3、Bcl-2、Bax水平的影响

目的:探讨桂枝加龙骨牡蛎汤对魄不安于肺不寐大鼠脑组织Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响及其治疗魄不安于肺不寐可能的作用机制。方法:32只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药组和西药组,每组8只。采用水环境小平台法干预9 d建立魄不安于肺不寐大鼠模型,造模成功后,中药组予以桂枝加龙骨牡蛎汤7.6 g·kg-1·d-1灌胃,西药组予以右佐匹克隆片0.1 mg·kg-1·d-1灌胃,对照组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续14 d,测量体质量。采用免疫组织化学法及蛋白质免疫印迹法检测脑组织中Caspase-3、Bcl-2、Bax表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠体质量减轻(P<0.01),免疫组化检测结果显示,大鼠脑组织Bcl-2的表达显著减少(P<0.01),Caspase-3、Bax表达显著增加(P<0.01),Bcl-2/Bax比率显著减少(P<0.01);Western blot结果显示大鼠脑组织Bcl-2相对表达量显著减少(P<0.01),Bax、Caspase-3相对表达量显著增加(P<0.01)。与模型组比较,中药组及西药组大鼠体质量显著增加(P<0.01),免疫组化检测结果显示,大鼠脑组织Bcl-2表达增加(P<0.05),Caspase-3、Bax表达减少(P<0.05),Bcl-2/Bax比率显著升高(P<0.01);Western blot结果显示大鼠脑组织中Bcl-2相对表达量增加(P<0.05),Bax、Caspase-3相对表达量显著减少(P<0.01)。结论:桂枝加龙骨牡蛎汤改善魄不安于肺不寐大鼠的睡眠可能与增加其脑组织Bcl-2、降低Caspase-3、Bax表达水平有关。

海藻玉壶汤对甲亢大鼠Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响

目的探讨海藻玉壶汤对甲亢大鼠Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响。方法选取SPF级SD大鼠60只,雌雄各半,随机分为空白组、模型组,其中空白组10只,模型50只;模型组大鼠皮下注射L-左旋甲状腺素钠造模,1次/d,造模时间为1周,单次给药剂量0.35 mg/kg,造模结束后将大鼠分为模型组、甲巯咪唑(MMI)组,海藻玉壶汤低、中、高剂量组。给药组灌胃时间为8周,空白组与模型组给予等量的0.9%生理盐水灌胃,中药高、中、低各组剂量为42.86、21.43、12.44 g/kg,甲巯咪唑(MMI)组剂量为0.1875 g/kg。灌胃第0、8周应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠T3、T4、TSH,灌胃结束后应用实时荧光定量PCR法(qPCR)检测各组甲状腺组织中Bax、Bcl-2 mRNA的表达,苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠甲状腺组织病理形态,免疫荧光法检测大鼠甲状腺Bax、Bcl-2的表达。结果与空白组比较,模型组T3、T4显著升高,TSH下降(P<0.05);灌胃结束后,与模型组相比,甲巯咪唑(MMI)组、中药中高剂量组T3、T4下降,TSH上升(P<0.05),中药低剂量组T3、T4、TSH无明显改变。病理切片显示,模型组与空白组比较,甲状腺部分区域内甲状腺滤泡上皮增生,滤泡增大,大小形态不一。甲巯咪唑(MMI)组、中药中高剂量组甲状腺组织与模型组比较,甲状腺滤泡上皮无明显增生,滤泡大小形态不一,滤泡肿大较轻。免疫荧光结果显示:模型组与空白组比较,甲状腺中Bcl-2表达量增加,与模型组比较,甲巯咪唑(MMI)组、中药中高剂量组甲状腺中Bcl-2表达量下降,所有组甲状腺中Bax无明显变化。实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)结果显示:与空白组比较,模型组甲状腺中Bcl-2 mRNA表达量明显增加(P<0.05);与模型组比较,甲巯咪唑(MMI)组、中药中高剂量组甲状腺中Bcl-2 mRNA表达量下降(P<0.05);各组甲状腺中Bax mRNA表达量无明显差异(P>0.05)。结论海藻玉壶汤可通过抑制大鼠甲状腺Bcl-2 mRNA的表达改善甲亢大鼠病情,但对Bax mRNA的表达无明显影响。

澳洲茄碱通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3信号通路促进非小细胞肺癌发生凋亡

目的 探讨龙葵活性成分澳洲茄碱对非小细胞肺癌细胞PC9增殖、凋亡的影响。方法 体外培养PC9细胞,设对照组(0μmol/L)及澳洲茄碱不同剂量组(0、2、5、10、15、20、25μmol/L),CCK-8试剂盒检测澳洲茄碱对PC9细胞的增殖抑制作用;TMRE检测线粒膜电位;caspase3/7活性试剂盒联合GreenNuc?Caspase-3/Annexin V-mCherry染色检测caspase-3活性;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;给药处理或者使用PTEN抑制剂后,Western blot检测细胞中相关蛋白的表达量。结果 与对照组相比,经澳洲茄碱干预24、48、72 h后,PC9细胞的活力均明显降低(P<0.05);经澳洲茄碱干预24 h后,细胞线粒体膜电位明显降低,而细胞凋亡比例明显升高(P<0.05);caspase-3/7活力、活细胞Caspase-3活性及cleaved caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.01);PI3K和Akt磷酸化水平降低(P<0.05);而PTEN、Bax蛋白表达上调(P<0.05);抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达下调(P<0.05)。结论 澳洲茄碱可通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3通路及其上游蛋白活性而抑制PC9细胞增殖,促进其凋亡。

基于caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路探究SMAC基因对肺腺癌细胞紫杉醇敏感度及细胞活性的影响

目的基于caspase-3/Bcl2/Bax信号通路探究SMAC基因对肺腺癌细胞紫杉醇敏感度及细胞活性的影响。方法建立肺腺癌紫杉醇耐药细胞株A549/Taxol,将细胞分为pcDNANC组(转染pcDNA-NC空白载体)、pcDNA-SMAC组(转染pcDNA-SMAC载体)、siRNA-NC组(转染siRNANC空病毒载体)和siRNA-SMAC组(转染siRNA-SMAC慢病毒载体)。qRT-PCR法检测细胞中SMAC mRNA表达;MTT法检测细胞敏感度;克隆实验法检测细胞增殖能力;Transwell法检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡能力;Western blot法检测细胞中caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果肺腺癌A549细胞较BEAS-2B正常细胞中SMAC mRNA表达明显降低(P<0.05)。pcDNA-SMAC组较pcDNA-NC组细胞中SMAC mRNA表达显著升高(P<0.05)。和siRNA-NC组相比,siRNA-SMAC组细胞中SMAC mRNA表达显著降低(P<0.05)。和pcDNA-NC组相比,pcDNA-SMAC组细胞IC_(50)、细胞克隆数、细胞侵袭能力及Bcl-2蛋白和Bcl-2/Bax比值均显著降低,细胞耐药指数逆转倍数为2.51倍,细胞凋亡能力及caspase-3和Bax蛋白表达明显高于pcDNA-NC组(P<0.05)。和siRNA-NC组相比,siRNA-SMAC组细胞IC_(50)、细胞克隆数、细胞侵袭能力及Bcl-2蛋白和Bcl-2/Bax比值均显著升高,细胞凋亡能力及caspase-3和Bax蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论高表达SMAC可增加肺腺癌细胞的紫杉醇敏感度、抑制细胞增长和侵袭、促进细胞凋亡,且对caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路有一定调控作用。

桃红四物汤对气滞血瘀型浸润性乳腺癌Bcl-2,Bax及Ki-67蛋白表达的影响

目的探讨气滞血瘀型浸润性乳腺癌采用桃红四物汤治疗对B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞增殖核抗原(Ki-67)蛋白表达及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)水平的影响。方法选取2020年8月—2021年8月我院收治的气滞血瘀型浸润性乳腺癌患者共计84例,根据随机摸球法分成观察组(n=42)与对照组(n=42),对照组采用常规化疗治疗,观察组采用桃红四物汤联合化疗治疗,对两组Bcl-2、Bax、Ki-67蛋白及炎性因子水平进行比较。结果治疗后两组Bcl-2、Ki-67蛋白水平降低(P<0.05),Bax水平提高(P<0.05),观察组Bcl-2、Ki-67蛋白水平较对照组更低(P<0.01),Bax水平较对照组更高(P<0.01);治疗后两组TNF-α、CRP水平提高(P<0.05),观察组水平较对照组低(P<0.01)。结论桃红四物汤用于治疗气滞血瘀型浸润性乳腺癌可改善Bcl-2、Bax、Ki-67蛋白水平,缓解机体炎症反应。

橙皮苷调控Bcl-2/Bax-Caspase3信号通路阻抑H2O2诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡

【目的】探析橙皮苷对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的阻抑效果及其分子作用机制,为其在促进奶牛乳腺器官生长发育和维持泌乳功能领域的应用提供理论依据。【方法】以1000μmol/L H_(2)O_(2)处理奶牛乳腺上皮细胞8 h构建细胞凋亡模型,再用120μg/mL橙皮苷处理24 h,然后采用CCK-8法测定奶牛乳腺上皮细胞活性,通过激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡情况,利用实时荧光定量PCR检测奶牛乳腺上皮细胞的Bcl-2、Bax和Caspase3基因表达水平,并以Western blotting检测Bcl-2、Bax和Caspase3蛋白的表达变化。【结果】与空白对照组(CK)相比,H_(2)O_(2)组奶牛乳腺上皮细胞活性极显著下降(P<0.01,下同),发生凋亡的细胞比例极显著升高,且DNA片段呈梯状条带;橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞活性显著升高(P<0.05,下同),且细胞凋亡程度低,发生凋亡的细胞数目较少。与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞活性显著上升,细胞凋亡比例极显著降低,且DNA片段的梯状条带减少。在Bax、Bcl-2和Caspase3基因及其蛋白表达方面,H_(2)O_(2)组奶牛乳腺上皮细胞中的Bax和Caspase3基因及其蛋白表达水平显著或极显著高于CK组,而Bcl-2基因及其蛋白表达水平较低;橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞的Bax和Caspase3基因及其蛋白表达水平显著低或极显著于CK组,Bcl-2基因及其蛋白表达水平则均高于CK组;与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞的Bax和Caspase3基因及其蛋白表达极显著下调,而Bcl-2基因及其蛋白表达极显著上调。【结论】橙皮苷通过Bcl-2/Bax-Caspase3信号通路阻抑H_(2)O_(2)诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡,有效提高细胞活性,故推测橙皮苷对促进乳腺器官发育和维持泌乳能力具有良好的正向效应。

槲皮素通过抑制Caspase3/Bax/Bcl-2凋亡通路保护内毒素血症小鼠心肌损伤

目的:观察槲皮素对内毒素血症小鼠心肌损伤的保护作用,并探讨Caspase3/Bax/Bcl-2凋亡信号通路机制。方法:18只C57BL/6N小鼠随机分为对照组(Control组)、脂多糖诱导内毒素血症模型组(LPS组)、槲皮素治疗组(QR组)。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清中cTnI、LDH、CK-MB、TNF-α、IL-1β和IL-6水平;心脏超声检测小鼠LVEDd、LVESd、EF、FS、CO等心脏结构及心功能指标;Western Blot法检测心脏组织中Caspase3、Bax、Bcl-2的表达。结果:与Control组比较,LPS组cTnI、LDH、CK-MB、TNF-α、IL-1β和IL-6表达均升高,EF、FS、CO等心功能指标均下降,Caspase3和Bax表达增强,Bcl-2表达减弱;与LPS组比较,QR组cTnI、LDH、CK-MB、TNF-α、IL-1β和IL-6表达均下降,EF、FS、CO等心功能指标均升高,Caspase3和Bax表达减弱,Bcl-2表达增强。结论:槲皮素对LPS诱导内毒素血症小鼠心肌损伤具有保护作用,其作用机制与降低炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6释放,抑制Caspase3/Bax/Bcl-2凋亡信号通路有关。

BCL-2、Bax及Beclin-1表达与非小细胞肺癌临床病理特征的相关性分析

目的探讨BCL-2、Bax及Beclin-1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况及其与患者临床病理特征的相关性。方法选取2019年2月—2021年6月河南省安阳市第六人民医院(安阳市口腔医院)收治的96例NSCLC患者作为研究对象,收集并记录患者性别、年龄、吸烟史、淋巴结转移情况等一般资料,取NSCLC患者肺癌组织作为NSCLC组标本(n=96),另取距离肺癌组织5 cm以上的癌旁组织作为对照组标本(n=96)。比较2组标本BCL-2、Bax、Beclin-1表达水平,分析NSCLC组织中BCL-2、Bax、Beclin-1表达水平的相关性,探究BCL-2、Bax、Beclin-1与NSCLC患者临床病理特征的相关性。结果NSCLC组标本的BCL-2阳性率明显高于对照组(P<0.05),Bax、Beclin-1阴性率明显高于对照组(P<0.05)。不同基本情况及临床病理特征患者的NSCLC组织BCL-2、Bax及Beclin-1蛋白表达情况比较发现:不同TNM分期及淋巴结转移情况的患者NSCLC组织BCL-2蛋白表达情况差异具有统计学意义(P<0.05);不同分化程度的患者NSCLC组织Bax蛋白表达情况差异具有统计学意义(P<0.05);不同分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况的患者NSCLC组织Beclin-1蛋白表达情况差异具有统计学意义(P<0.05)。相关分析结果显示:BCL-2表达水平与Bax、Beclin-1表达水平呈负相关(r=-0.392,-0.441;P<0.05);而Beclin-1表达水平与Bax表达水平呈正相关(r=0.463,P<0.05)。结论NSCLC组织中BCL-2呈高表达,Bax、Beclin-1呈低表达,且上述因子的水平变化与NSCLC病情进展密切相关。

藏红花水提取物通过调控ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达影响人卵巢癌细胞HO-8910增殖

目的:探讨藏红花水提取物调控ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达对人卵巢癌细胞HO-8910增殖、凋亡、侵袭的影响。方法:以人卵巢癌细胞HO-8910为研究对象,给予不同浓度(0、0.4、0.8、1.0 mg/L)藏红花水提取物进行培养,MTT法检测细胞HO-8910的增殖活力;流式细胞术观察细胞HO-8910的凋亡率;划痕法检测细胞HO-8910的迁移情况;Transwell法检测细胞HO-8910的侵袭情况;Western blot法检测细胞HO-8910的ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:人卵巢癌细胞HO-8910的增殖活力、迁移能力及侵袭能力受藏红花水提取物的影响,随藏红花水提取物剂量增加,人卵巢癌细胞HO-8910的增殖活力、迁移能力及侵袭能力减弱;而人卵巢癌细胞HO-8910的凋亡率则相反,随藏红花水提取物剂量增加,人卵巢癌细胞HO-8910的凋亡率逐渐增加;受藏红花水提取物影响,人卵巢癌细胞HO-8910中ERK、Bcl-2蛋白的表达降低,Bax蛋白的表达增加,且藏红花水提取物剂量越高,ERK、Bcl-2蛋白表达越低,Bax蛋白表达越高。结论:藏红花水提取物能够降低卵巢癌细胞的增殖活力、迁移能力及侵袭能力,并诱导卵巢癌细胞凋亡,这可能是通过调控ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达来实现的。

电针对2型糖尿病大鼠睾丸形态及生精细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响

目的:观察电针对2型糖尿病大鼠睾丸形态及睾丸生精细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响,探讨通过电针降糖改善T2DM大鼠生精细胞凋亡的作用机制。方法:12只雄性Wistar大鼠高糖高脂饲料喂养结合2%链脲佐菌素溶液(35 mg/kg)腹腔注射制备2型糖尿病模型,以大鼠随机血糖(BG)>16.67 mmol/L、空腹血糖(FBG)>11.1 mmol/L为成模标准。成模后的糖尿病大鼠按血糖高低随机区组分为模型组和电针组,后续仍以高糖高脂饲料喂养。同时设立空白对照组6只,普通饲料喂养。电针组大鼠选取双侧“胃脘下俞”“脾俞”“足三里”“三阴交”进行针刺,电针同侧“胃脘下俞”“足三里”,每周6次,持续6周。干预前后检测各组大鼠空腹血糖(FBG);干预结束后取大鼠血清Elisa法检测血清胰岛素(INS)、睾酮(T)含量;HE染色法观察各组大鼠睾丸形态学变化;Western Blot法检测各组大鼠睾丸Bcl-2、Bax蛋白表达水平,Image J软件测定条带灰度。结果:干预前,模型组、电针组大鼠FBG均显著高于空白组(P<0.01),两组大鼠FBG差异无统计学意义(P>0.05)。干预6周后,与空白组相比,模型组大鼠FBG显著升高(P<0.01),血清INS、T水平显著降低(P<0.01),睾丸Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01),Bax蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,电针组大鼠FBG显著降低(P<0.01),血清INS、T水平升高(P<0.05或P<0.01),睾丸Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),Bax蛋白表达降低(P<0.05)。HE染色显示模型组较空白组病理改变明显,电针组整体情况优于模型组。结论:高血糖状态下,雄性大鼠血清睾酮水平下降,生精细胞凋亡增加;电针可明显降低2型糖尿病大鼠FBG水平,缓解高血糖状态下大鼠生精小管内部形态的病理性改变,保护精子正常发育,其机制可能与电针下调促凋亡因子Bax蛋白表达、上调抑凋亡因子Bcl-2蛋白表达和抑制生精细胞凋亡的功能有关。

补肾活血方对慢性肾衰竭大鼠氧化应激、PI3K/Akt、Bcl-2/Bax的影响

【目的】探讨补肾活血方对慢性肾衰竭大鼠的治疗作用及机制。【方法】将40只SD大鼠分为正常组(10只)、模型组(9只)、补肾活血方低剂量组(10只)和补肾活血方高剂量组(10只)。除正常组外,其他组别大鼠采用腺嘌呤灌胃法复制慢性肾衰竭模型。造模成功后,补肾活血方低、高剂量组大鼠分别给予0.52、2.08 g/kg补肾活血方药液灌胃,每日1次,连续给药28 d。给药结束后,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肾功能指标尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)和尿酸(UA)水平及肾组织氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,苏木素-伊红(HE)染色法观察肾组织病理学变化,Western Blot法检测肾组织磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达情况。【结果】(1)与正常组比较,模型组BUN、SCr、UA水平均上升(P<0.05);与模型组比较,补肾活血方低、高剂量组BUN、SCr、UA水平均显著下降(P<0.05)。(2)与正常组比较,模型组MAD水平上升,SOD水平下降(P<0.05);与模型组比较,补肾活血方低、高剂量组MAD水平下降,SOD水平上升(P<0.05);(3)与正常组比较,模型组肾组织中出现轻度坏死和炎性细胞浸润,肾小管扩张,肾小球变形等病理学变化;与模型组比较,补肾活血方低、高剂量组肾组织病理情况均有改善。(4)与正常组比较,模型组大鼠肾组织PI3K、Akt蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,补肾活血方低、高剂量组大鼠肾组织PI3K、Akt蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。(5)与正常组比较,模型组大鼠肾组织Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax蛋白表达水平上升(P<0.05);与模型组比较,补肾活血方低、高剂量组大鼠肾组织Bcl-2蛋白表达水平上升,Bax蛋白表达水平下降(P<0.05)。【结论】补肾活血方能够改善慢性肾衰竭大鼠肾脏损伤,其机制与减轻氧化应激、抑制PI3K/Akt信号通路、调控凋亡蛋白Bcl-2/Bax表达有关。

1,25(OH)_(2)D_(3)通过Bcl-2/Bax/cleaved caspase-3凋亡机制抑制小鼠气道平滑肌细胞的增殖

目的探讨1,25(OH)_(2)D_(3)对过氧化氢(H_(2)O_(2))刺激的小鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)的抗增殖及促凋亡作用,并分析其在Bcl-2/Bax/cleaved caspase-3凋亡机制发挥的调控作用。方法体外培养小鼠气道平滑肌细胞,再用不同浓度(0、25、50、100μmol/L)的H_(2)O_(2)刺激细胞增殖,作用不同时间(12、24、48、72 h),探索H_(2)O_(2)最佳作用浓度和时间。接着将ASMCs分为对照组、H_(2)O_(2)组、1,25(OH)_(2)D_(3)、H_(2)O_(2)+1,25(OH)_(2)D_(3)4组进行培养,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组ASMCs增殖活性的变化,并用流式细胞仪检测其凋亡情况。并用蛋白印迹法检测各组Bax、Bcl-2及cleaved caspase-3蛋白的表达情况。结果H_(2)O_(2)刺激小鼠气道平滑肌细胞增殖的最佳作用浓度和时间分别为25μmol/L和24 h。1,25(OH)_(2)D_(3)干预能明显降低ASMCs增殖能力,并增加其凋亡率。H_(2)O_(2)+1,25(OH)_(2)D_(3)组细胞凋亡率为21.9%(对照组细胞凋亡率为7.1%,H_(2)O_(2)组细胞凋亡率为4.8%),差异具有统计学意义(P<0.01)。1,25(OH)_(2)D_(3)干预后,蛋白印迹法结果显示ASMCs的Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高,Bcl-2表达水平下降。结论1,25(OH)_(2)D_(3)能抑制H_(2)O_(2)刺激ASMCs的增殖,并促进其凋亡,其机制与Bax/Bcl-2/ccleaved caspase-3凋亡通路有关。

苗药九仙罗汉接骨汤含药血清对MC3T3-E1Subclone14细胞增殖、凋亡和Runx2、Osterix、Bax、Bcl-2表达的影响

目的:观察苗药九仙罗汉接骨汤含药血清对MC3T3-E1Subclone14细胞增殖、凋亡及Runx2、Osterix、Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白表达的影响,探讨其促进成骨细胞增殖,抑制成骨细胞凋亡的可能机制。方法:将体外培养的MC3T3-E1Subclone14细胞系分为空白对照组、仙灵骨葆胶囊组及九仙罗汉接骨汤含药血清低、中、高浓度组,各组制备含药血清后均用高糖DMEM培养液分别配制成不同浓度进行培养;培养24 h后采用MTT与流式细胞仪检测细胞增殖及凋亡;RT-PCR与Western Blot、免疫组化法测定Runx2、Osterix、Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白表达。结果:与空白对照组比较,九仙罗汉接骨汤含药血清中、高浓度组增殖能力显著升高,细胞凋亡率显著降低,Runx2、Osterix、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著升高,Bax mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:苗药九仙罗汉接骨汤可促进MC3T3-E1Subclone14细胞增殖,并抑制其凋亡,其作用机制可能与调节Runx2、Osterix、Bax、Bcl-2基因及蛋白表达有关。

益气活血化浊解毒方对脑缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响

目的:探讨益气活血化浊解毒方是否可通过调控Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。方法:72只SPF级雄性SD大鼠,按随机数字表法分为假手术组(Sham)、模型组(MCAO)、益气活血化浊解毒方低剂量组(TCM-L)、中剂量组(TCM-M)、高剂量组(TCM-H)、尼莫地平组(Nim),每组12只大鼠。建立大鼠大脑中动脉闭塞模型,缺血2h后再灌注。造模24h后,各用药组分别予相应浓度的药物灌胃,其余各组等容积生理盐水灌胃,连续治疗3d。采用改良神经功能缺损评分评估大鼠神经功能损伤情况;盐酸2,3,5-三苯基四氮(TTC)染色观察脑梗死体积;TUNEL染色检测神经细胞凋亡情况;Western blot检测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的情况;荧光定量PCR法检测Caspase-3mRNA表达的情况。结果:(1)与Sham组比较,MCAO组的大鼠神经功能缺损症状显著加重(P<0.05);脑梗死体积占比增大(P<0.05);缺血区细胞凋亡率增加(P<0.05);Western blot检测显示大鼠脑组织Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显下降(P<0.05);PCR检测显示Caspase-3mRNA表达显著升高(P<0.05)。(2)与MCAO组比较,TCM组和Nim组的神经功能缺损评分均明显降低(P<0.05);脑梗死体积百分比减少(P<0.05);缺血区细胞凋亡率降低(P<0.05);Western blot检测显示大鼠脑组织Bax、Caspase-3蛋白表达明显降低,Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05);PCR检测显示Caspase-3mRNA表达显著降低(P<0.05)。结论:益气活血化浊解毒方可通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax、Caspase-3蛋白及Caspase-3mRNA表达抑制神经细胞凋亡,减轻脑缺血再灌注损伤,发挥神经保护作用。