基于Caco-2细胞模型的辣椒素与槲皮素协同调节小肠糖代谢的分子机制

为探究辣椒素与槲皮素协同调节小肠糖代谢的分子机制,借助Caco-2细胞单层模型,研究辣椒素与槲皮素单一及联合处理对Caco-2细胞存活率、细胞膜通透性的影响。采用免疫印迹法测定跨膜蛋白Occludin、胞质蛋白ZO-1、表面生长因子受体EGFR和纤维状肌蛋白F-actin以及葡萄糖转运关键蛋白GLUT2、SGLT1、Na^(+)/K^(+)-ATPase的表达量。结果显示:各试验处理组Caco-2细胞的增殖率均大于75%,表明药物对细胞没有明显毒性,可进行后续试验。Caco-2细胞单层模型的跨膜电阻值为(315.70±26.65)Ω·cm^(2),加药后各试验组的跨膜电阻值均呈现上升趋势,表明膜通透性变小,细胞屏障功能增强,可延缓小肠对葡萄糖的吸收。同时与空白对照组相比,各试验组上调了跨膜蛋白Occludin(>0.65)、胞质蛋白ZO-1 (>0.51)、表面生长因子受体EGFR(>0.19)和纤维状肌蛋白F-actin(>0.04)的相对表达量,并且下调了葡萄糖转运关键蛋白GLUT2(>1.00)、SGLT1(>0.78)、Na^(+)/K^(+)-ATPase(>0.87)的相对表达水平。综合来看,辣椒素与槲皮素在调节小肠糖代谢方面具有协同效应,二者在高剂量水平以1∶3比例混合效果最佳,主要通过增强肠道黏膜屏障功能,下调葡萄糖转运关键蛋白水平,从而抑制小肠对葡萄糖的吸收来达到调节糖代谢的效果。

2型糖尿病患者代谢相关脂肪性肝病列线图预测模型的建立与验证

目的构建和验证2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者代谢相关脂肪性肝病(metabolic associated fatty liver disease,MAFLD)的个体化预测模型。方法回顾性收集2020年1月至2022年12月上海市徐汇区大华医院收治的1592例T2DM患者的临床资料。根据超声/影像学检查结果将患者分为MAFLD组和非MAFLD组,比较两组患者的一般临床特征。采用二元Logistic回归构建和验证MAFLD的影响因素并建立列线图模型。采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线和一致性指数(concordance index,C-index)评价列线图模型区分度。采用bootstrap法验证列线图模型的拟合度和校准度,采用一致性曲线评估模型的预测效能,采用决策曲线分析(decision curve analysis,DCA)评价模型是否临床获益。结果纳入研究的1592例T2DM患者中,1085例(68.2%)患者为MAFLD,507例(31.8%)患者为非MAFLD。MAFLD组患者年龄(中位数:74岁比73岁)、有饮酒史患者比例[17.6%(191/1085)比13.0%(66/507)]、体重指数(中位数:22.5 kg/m^(2)比22.0 kg/m^(2))、24 h动态舒张压(中位数:76 mmHg比74 mmHg)、糖尿病持续时间[(14.9±10.2)年比(10.7±8.3)年]、糖化血红蛋白(中位数:8.5%比7.9%)、总胆固醇(中位数:5.2 mmol/L比4.8 mmol/L)、甘油三酯[(2.1±1.2)mmol/L比(1.8±1.2)mmol/L]和尿素氮[(7.1±3.1)mmol/L比(6.8±2.7)mmol/L]水平高于非MAFLD组,高密度脂蛋白胆固醇[(1.1±0.5)mmol/L比(1.2±0.4)mmol/L]、25-羟基维生素D(中位数:37.5 nmol/L比40.5 nmol/L)和血糖在目标范围内时间(中位数:75%比79%)低于非MAFLD组(P均<0.05)。多因素Logistic分析表明,饮酒史(OR=2.44,95%CI:1.56~3.83,P<0.001)、体重指数(OR=1.06,95%CI:1.01~1.12,P=0.045)、糖尿病病程(OR=1.05,95%CI:1.02~1.07,P=0.010)、糖化血红蛋白(OR=1.08,95%CI:1.01~1.17,P=0.032)、总胆固醇(OR=1.43,95%CI:1.23~1.65,P<0.001)、25-羟基维生素D(OR=0.91,95%CI:0.86~0.96,P=0.001)以及血糖在目标范围内时间(OR=0.98,95%CI:0.97~0.99,P<0.001)与T2DM人群发生MAFLD独立相关。将Logistic模型筛选的因素构建列线图模型,ROC曲线下面积为0.77(95%CI:0.71~0.83),C-index为0.76(95%CI:0.72~0.81)。一致性曲线显示预测概率与实际观察值一致性良好,DCA提示模型具有良好的临床获益。结论T2DM人群中,MAFLD患者更可能存在不良生活方式和代谢障碍性因素,更易存在25-羟基维生素D缺乏和血糖在目标范围内时间低。该模型可用于T2DM人群中MAFLD的预测。

血清CHI3L1水平与2型糖尿病合并代谢相关脂肪性肝病患者的相关性分析

目的 探讨血清壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)水平与2型糖尿病(T2DM)患者合并代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)的关系。方法 按照1∶1比例选取2020年1月至2023年12月河北省唐山南湖医院收治的T2DM合合并MAFLD患者(MAFLD组)和未合并MAFLD的T2DM患者(非MAFLD组)各120例,采用酶联免疫吸附法检测2组患者血清CHI3L1水平,并收集2组患者基线资料。采用多因素条件Logistic回归模型分析CHI3L1与T2DM患者合并MAFLD的关系,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析CHI3L1对T2DM合并MAFLD的预测价值。结果 与非MAFLD组比较,MAFLD组血清CHI3L1水平升高(P <0.05)。调整混杂因素后,CHI3L1升高为T2DM患者合并MAFLD的独立危险因素(P <0.05)。血清CHI3L1水平预测T2DM患者合并MAFLD的曲线下面积(AUC)为0.803,敏感度为70.83%,特异度为88.33%。结论 T2DM患者血清CHI3L1水平升高是合并MAFLD的独立危险因素,并对T2DM患者合并MAFLD具有一定的预测价值。

氯胺酮对缺血再灌注脑损伤小鼠海马Bcl-2、Bax的影响

目的:研究氯胺酮对缺血再灌注脑损伤小鼠海马Bcl-2、Bax蛋白及大脑梗死体积的影响。方法:昆明纯种小白鼠共30只,随机分为4组,S组(n=7)为假手术组,C组(n=8)为缺血再灌注损伤对照组,I组(n=8)为线栓缺血梗死后氯胺酮治疗组,R组(n=7)为线栓缺血梗死再灌注后氯胺酮治疗组。结果:C组海马Bax蛋白表达明显高于其他3组(P<0.05),C组海马Bcl-2蛋白表达低于I组和R组(P<0.05)。C组脑梗死体积明显高于I组和R(P<0.05)组。C组、I组、R组的神经功能缺失体征评分无显著性差异(P>0.05)。结论:氯胺酮可降低缺血再灌注脑损伤小鼠海马凋亡基因Bax的蛋白表达和大脑梗死体积,提高抑制凋亡基因Bcl-2的蛋白表达。

氯沙坦对心力衰竭大鼠心肌细胞Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨氯沙坦对心力衰竭大鼠心肌细胞促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的影响。方法:选24只雄性8周龄SD大鼠,分为对照组、心衰组和氯沙坦干预组各8只。采用阿霉素腹腔注射造模,氯沙坦干预组同时灌胃给氯沙坦连续给药6周。用原位脱氧核糖核酸酶未端标记法(TUNEL法)检测大鼠心肌细胞凋亡,用免疫组化法检测大鼠心肌Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:与对照组比较,心衰组心肌细胞凋亡指数升高,提示心衰组存在明显心肌细胞膜损伤。与心衰组比较,氯沙坦干预组心肌细胞凋亡指数降低。心衰组和氯沙坦干预组心肌细胞Bax和Bc1-2基因蛋白表达显著高于对照组,与心衰组相比,氯沙坦干预组明显下调Bax基因表达,上调Bc1-2基因表达。结论:氯沙坦可明显提高抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达,降低促凋亡蛋白Bax蛋白表达,提示氯沙坦具有有效抑制心肌细胞凋亡,改善心衰作用。

Effects of genistein on neuronal apoptosis,and expression of Bcl-2 and Bax proteins in the hippocampus of ovariectomized rats

Genistein is one of several isoflavones that has a structure similar to 17β-estradiol, has a strong antioxidant effect, and a high affinity to estrogen receptors. At 15 weeks after ovariectomy, the expression of Bcl-2 in the hippocampus of rats decreased and Bax expression increased, with an obvious upregulation of apoptosis. However, intraperitoneal injection of genistein or 17β-estradiol for 15 consecutive weeks from the second day after operation upregulated Bcl-2 protein expression downregulated Bax protein expression, and attenuated hippocampal neuron apoptosis. Our experimental findings indicate that long-term intervention with genistein can lead to a decrease in apoptosis in hippocampal neurons following ovadectomy, upregulate the expression of Bcl-2, and downregulate the expression of Bax. In addition, genistein and 17β-estradiol play equal anti-apoptotic and neuroprotective roles.

基于代谢分析的SARS-CoV-2药物靶点预测方法

提出一种基于代谢分析的抑制SARS-CoV-2复制的药物靶点预测方法。使用5组基因表达综合数据库(GEO)的人类肺部组织细胞的转录组学数据,提取出SARS-CoV-2入侵宿主细胞后显著高表达的基因,进而重构出病毒入侵肺部组织细胞后的代谢网络模型;之后采用基因敲除、毒性测试等系统生物学分析方法来预测药物靶点。对GEO中5个数据集的样本进行分析,结果显示各数据集预测的靶点基因具有一定的一致性。其中,PLPBP是5个数据集中预测的共有靶点基因,说明它对于SARS-CoV-2代谢活动具有重要作用,可作为治疗该疾病的潜在药物靶点;另外,BCAT1、BCAT2、ADI1也具有一定的研究价值。提出的方法为预测SARS-CoV-2的药物靶点提供一种新的思路,预测的药物靶点也具有进一步临床研究的潜力。

一种基于Caco-2细胞单层膜的筛选抵抗特定代谢性疾病益生菌的模型

最近的研究揭示了益生菌在缓解与肠道屏障功能障碍相关的代谢疾病方面的潜力。然而,目前还没有一种能高效筛选抵抗特定代谢疾病益生菌菌株的模型。本研究采用肿瘤坏死因子(TNF-α)和酒精处理的Caco-2细胞单层膜模型,评价了139株乳杆菌在体外对肠道屏障功能的影响。然后,我们选择了11株对肠道屏障具有不同调节能力的乳杆菌菌株,进一步在体内评价了它们对卵巢切除引起的骨质疏松症或慢性酒精性肝损伤的作用效果。体外细胞模型和体内动物模型数据的关联性分析显示,两种疾病模型下的Pearson系数分别为0.82和-0.97,表明使用体外细胞模型模拟益生菌在体内的保护作用是可靠的。本研究建立了一种基于Caco-2细胞单层膜模型的体外方法,用于高效筛选可以抵抗特定代谢疾病(如骨质疏松症和慢性酒精性肝病)的益生菌。

出院计划新模式对2型糖尿病患者代谢指标和低血糖事件的影响研究

目的探讨出院计划新模式对2型糖尿病患者代谢指标和低血糖事件的影响。方法选择2012年11月—2013年2月在河北医科大学第二医院内分泌科住院的2型糖尿病患者100例,并将其按随机数字表法分为对照组（50例）和试验组（50例）。对照组采用传统教育方式,试验组在传统教育基础上实施出院计划新模式,出院后两组均随访12周。比较两组血脂指标〔总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）〕、血糖水平（空腹血糖、餐后2 h血糖）、糖化血红蛋白（HbA1c）水平及HbA1c达标率、血压达标率、低血糖事件发生率。结果随访过程中,对照组有1例失访,脱落率为2.0%。干预前两组患者的TC、TG和LDL-C比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;干预后试验组患者的TC、TG和LDL-C低于对照组（P〈0.05）;两组患者干预后的TC、TG和LDL-C均低于干预前（P〈0.05）。出院后,试验组患者各时间点空腹血糖水平及餐后2 h血糖水平均低于对照组（P〈0.05）。干预前两组患者的HbA1c水平和HbA1c达标率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;干预后试验组患者的HbA1c水平低于对照组,HbA1c达标率高于对照组（P〈0.05）;两组患者干预后的HbA1c水平低于干预前,HbA1c达标率高于干预前（P〈0.05）。干预前后两组患者的血压达标率比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）;且两组患者干预后血压达标率分别与干预前比较,差异亦无统计学意义（P〉0.05）。出院后1~4周,两组患者均无重度低血糖事件发生;试验组低血糖事件发生率（2.3%,25/1 080）低于对照组（5.4%,55/1 010）,差异有统计学意义（χ2=13.89,P=0.000）。试验组患者症状性低血糖、可疑症状性低血糖及相对低血糖的发生率均低于对照组（P〈0.05）。结论出院计划新模式有利于2型糖尿病患者代谢指标的控制,减少低血糖事件的发生率,为临床干预提供了有益的参考依据。

Caco-2细胞模型及其对黄酮类成分作用机制研究进展

Caco-2细胞模型作为ADME/Tox研究平台中肠吸收模型之一,已广泛用于药物动力学研究,可通过体外试验预测药物在体内的吸收和代谢,阐明药物在体内的吸收机制、毒性、药物吸收过程中的相互作用、药物的化学结构和体内转运关系以及药物代谢稳定性等。以黄酮类成分为代表,介绍Caco-2细胞模型在中药有效成分吸收代谢机制研究方面的应用进展。

个体化阶梯式疾病管理模式在2型糖尿病中的应用

目的评估新型的个体化阶梯式疾病管理模式对2型糖尿病临床治疗的效果。方法将2型糖尿病患者随机分为实验组和对照组,实验组采取个体化阶梯式疾病管理,对照组采取传统糖尿病护理,观察疾病管理对糖化血红蛋白、血糖、血压、血脂以及体质量指数、腰臀比等的影响。结果个体化阶梯式疾病管理组患者的代谢指标和传统糖尿病组相比较,其体质量指数、糖化血红蛋白、空腹血糖、收缩压、甘油三酯控制明显低于对照组(P<0.05),患者对糖尿病知识水平掌握程度相应更全面(P<0.05);而餐后血糖、舒张压、总胆固醇、低密度脂蛋白、腰臀比仅有降低趋势,无统计学差异(P>0.05),高密度脂蛋白亦仅略有升高,无统计学差异(P>0.05)。结论个体化阶梯式疾病健康管理对2型糖尿病的疾病控制明显有效,可显著改善患者体质量指数、糖化血红蛋白、空腹血糖、收缩压、甘油三酯以及患者对糖尿病知识的掌握。

Caco-2细胞模型在药物体外研究中的应用

Caco-2细胞模型是一种筛选药物离体口服特性的模型,已广泛用于评价药物在小肠的吸收特性和各种转运机制的研究。现综述Caco-2细胞单层模型的基本特点及其在药物的小肠吸收、代谢以及高通量筛选等方面的应用。

2型糖尿病周围神经病变与代谢综合征相关性探讨

目的:探讨2型糖尿病合并糖尿病周围神经病变与代谢综合征(MS)的相关性。方法:对302例2型糖尿病患者进行Michigan糖尿病神经病变症状评分和Michigan体征评分及神经电生理检查,同时进行代谢综合征组分(腰围、血糖、血脂、血压)测定,比较上述指标在MS组与非MS组间的差异。结果:糖尿病合并MS组较非MS组周围神经患病率(57.5%vs44.3%)、神经症状评分(4.12±1.89vs1.69±1.54)和体征评分(2.15±1.60vs1.56±1.01)增高,差异有统计学意义(P<0.05),糖尿病合并MS组较非MS组左腓感觉神经传导速度[(43.7±4.6)m/svs(46.1±4.0)m/s]、右腓感觉神经传导速度[(40.0±4.9)m/svs(45.9±4.5)m/s]及左正中感觉神经传导速度[(51.7±4.2)m/svs(55.5±4.3)m/s]减慢,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素回归分析显示,糖尿病病程长、腰围大、收缩压高、糖化血红蛋白及尿微量白蛋白排泄率高是糖尿病神经病变发生的危险因素。结论:MS与2型糖尿病患者周围神经病变的发生密切相关,它的大多数组分是糖尿病神经病变的危险因素。

2型糖尿病性骨质疏松动物模型建立

2型糖尿病是在环境因素、遗传因素等共同作用下所致的以胰岛素抵抗为主,可伴有胰岛素分泌不足,表现为慢性血糖升高的代谢性疾病。2型糖尿病所致骨质疏松或骨代谢异常目前机制尚不明确,研究2型糖尿病性骨质疏松发病机制及其防治的关键之一是复制理想的动物模型,国内以药物链脲佐菌素注射大鼠造模观察骨代谢异常文献较多,亦可见自发性2型糖尿病大鼠或小鼠所致骨量降低等文献报道。在造模过程中饲料喂养、药物注射剂量、观察指标等是影响2型糖尿病造模成功的因素,而大鼠成模的血糖标准未有统一定论,根据在以大鼠或小鼠造模过程中所遇到的常见问题,本文从最新国内外文献在2型糖尿病继发骨质疏松或骨代谢异常大鼠或小鼠造模方面有关的动物选择、造模方法、成模标准及时间等问题作一综述。

Caco-2细胞模型在茶叶生物活性成分研究中的应用

Caco-2细胞单层的形态和功能特性都类似于人小肠上皮细胞,是研究营养素或药物吸收、转运和代谢的一个重要体外模型,近年来在茶叶生物活性成分的研究中也得到广泛应用。本文对Caco-2细胞中儿茶素、茶氨酸、没食子酸和咖啡碱的吸收和转运机制,儿茶素的代谢以及茶叶生物活性成分药效机理的研究进行了综述,并对采用Caco-2细胞模型快速评价茶叶生物活性成分的吸收特性以促进茶叶保健产品和制剂的开发进行了展望。

乌梅汤联合二甲双胍对2型糖尿病患者糖代谢和胰岛素抵抗指数的影响

目的探讨乌梅汤联合二甲双胍对2型糖尿病患者糖代谢和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的影响。方法将102例2型糖尿病患者随机分为对照组(n=51)和联合组(n=51)。对照组给予二甲双胍治疗,联合组在对照组基础上给予乌梅汤治疗,比较2组治疗前后糖代谢因子、胰岛功能指标、中医证候积分及临床疗效。结果2组治疗后空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 hPG)及糖化血红蛋白(HbA1c)水平均下降,且联合组上述指标均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2组治疗后HOMA-IR和空腹胰岛素(FINS)水平均降低,胰岛β细胞功能(HOMA-β)水平升高,且联合组HOMA-IR、FINS低于对照组,HOMA-β高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,联合组中医证候积分低于对照组,总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论乌梅汤联合二甲双胍治疗2型糖尿病效果显著,可有效控制血糖水平,减轻胰岛素抵抗,促进胰岛细胞功能恢复。

健脾益气中药对脾气虚证2型糖尿病大鼠胰岛素介体的影响

目的观察健脾益气中药对脾气虚证2型糖尿病大鼠肝细胞膜胰岛素介体的影响。方法采用中剂量链脲佐菌素(30mg/kg,qd×3)腹腔内注射与过度劳倦、饥饱失常及肥甘饮食的方法造成2型糖尿病病证结合(脾气虚证)大鼠模型,设中药治疗组、模型组及正常对照组,治疗前及治疗3周后检测空腹血糖、血浆胰岛素,并于治疗结束后检测肝细胞膜胰岛素介体释放量。结果中药治疗组与模型组比较,肝细胞膜介体释放量显著增加(P<0.05),中药治疗前后比较,空腹血糖明显下降(P<0.05),胰岛素敏感性显著上升(P<0.05)。结论健脾益气中药能增加肝细胞膜释放的抑制腺苷酸环化酶活力的胰岛素介体量,改善高胰岛素血症,提高胰岛素敏感性。

姜黄素在Caco-2细胞模型中的吸收机制研究

目的测定姜黄素透过Caco-2单细胞层的浓度,研究其吸收特征。方法用Caco-2细胞单层模型来考察时间、浓度、不同药物酮康唑、维拉帕米、胡椒碱对姜黄素吸收的影响。采用液相色谱-质谱联用(LC-MS)法,测定姜黄素浓度并计算其表观渗透系数(Papp)。结果不同浓度姜黄素在90 min之前Papp大小顺序为:180>240>300μg/ml;与对照组比较,胡椒碱,低浓度酮康唑,维拉帕米对姜黄素的吸收均呈不同程度的促进作用(P<0.05)。结论姜黄素的吸收具有明显的高浓度饱和现象,且不呈线性变化,初步判定其吸收为主动吸收机制;促进姜黄素吸收的原因可能与酮康唑抑制Ⅰ相代谢酶CYP450 3A4和1A2酶的活性;胡椒碱抑制姜黄素Ⅱ相代谢酶—葡萄糖醛酸苷酶;维拉帕米抑制药物外排性转运蛋白—P-糖蛋白的活性有关。

2型糖尿病统一标准化延续性管理模式的应用效果观察

目的分析统一标准化延续性管理模式对2型糖尿病(T2DM)患者行为改变、血糖控制效果的影响。方法选择2017年11月—2018年11月在昆明医科大学第二附属医院国家标准化代谢性疾病管理(MMC)中心就诊的220例T2DM患者,根据随机数字表法分为对照组和实验组,每组110例。对照组实施常规管理模式,实验组采用统一标准化延续性管理(即MMC管理模式)。对两组管理前后血糖变化、自我管理水平及护理满意度进行比较。结果干预后,两组糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(PBG)水平均低于干预前,实验组餐后血糖(FPG)低于干预前,且实验组FPG、PBG、HbA1c低于对照组,差异均有高度统计学意义(均P<0.01)。两组合理饮食、运动、血糖自我检测、规范用药评分高于干预前,且实验组合理饮食、运动、血糖自我检测、规范用药评分均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。实验组护理满意度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MMC管理模式有助于提高T2DM患者FPG、PBG、HbA1c的达标率,能有效地改善T2DM患者的自我管理行为,提高患者满意度,具有临床推广应用价值。

2型糖尿病患者血清补体因子H与胰岛素抵抗相关性研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者糖脂代谢和胰岛素抵抗的变化情况,分析其与患者血清补体因子H表达之间的相关性。方法选择2015年1月至2016年2月期间T2DM的患者120例为研究对象,根据亚太地区2000年的肥胖标准分为肥胖组(64例)和非肥胖组(56例),另选择同期体检的健康人群60例为对照组。比较各组患者的血清补体因子H表达情况及空腹胰岛素、空腹血糖、血脂水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),分析各指标与补体因子H表达的相关性。结果肥胖组、非肥胖组、对照组血清补体因子水平分别为(196.38±23.49)mg/L、(184.34±21.48)mg/L和(173.26±18.37)mg/L,肥胖组>非肥胖组>对照组,组间比较差异有显著的统计学意义(P<0.01);T2DM患者血清补体因子H与体质指数(BMI)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、甘油三酯(TG)、空腹血糖(FBG)水平均呈正相关(r=0.397、0.601、0.333、0.312、0.524,P均<0.01),与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)呈负相关(r=-0.588,P<0.01)。结论补体因子H可能参与了肥胖及T2DM的发病过程,临床上有望将补体系统作为T2DM的治疗靶点。